雷公藤甲素对变应性鼻炎大鼠鼻粘膜组织TGF-β1、IL-4表达的影响

陈 霞，钟 勋，梁 卉，张晓萍，周 敏

（1.萍乡卫生职业学院，江西 萍乡 337000；2.湘雅萍矿合作医院，江西 萍乡 337000）

变应性鼻炎（Allergic Rhinitis， AR）是一种多基因遗传和多环境因素共同影响的鼻变态反应性疾病，患病率为10～20%，主要表现为鼻塞、流清水涕、喷嚏、鼻痒，严重影响患者生活质量。AR发病机制由多种细胞因子、炎症细胞、信号通路以及炎性介质等共同参与。中医药在治疗变应性鼻炎已取得研究成果[1]，雷公藤有激素样作用但又无激素的不良反应，其作用与转化生长因子密切相关，已用于哮喘的治疗研究，但应用于AR的研究及作用机制不明确。因此研究TGF-β1、白介素4（IL-4）在雷公藤对AR的作用机制可探索新的治疗应用，为临床提供新视角。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

卵清蛋白购自美国Sigma公司。雷公藤甲素购自维克奇生物公司。蛋白提取试剂盒购自上海科研生物科技有限公司。实验大鼠按国家相关要求进行饲养。光学显微镜（上海光学37-XB），高灵敏度荧光成像系统（Bio-Rad，上海）。

1.2 建立大鼠模型

将大鼠随机分为四组，每组10只:卵清蛋白（OVA）致敏组-模型对照组，雷公藤甲素（TP）处理组-药物处理组，氯雷他定（IR）处理组-阳性对照组，和生理盐水（SC）组-空白对照组。采用OVA基础致敏法：以OVA混悬液灌肠，隔日1次，共14天。局部致敏：第15天始，TP组和IR组以OVA+生理盐水滴注鼻腔予局部激发，1次/天，连续10天，同时，分别以雷公藤甲素和氯雷他定灌胃，1次/天。SC组和OVA组以生理盐水滴鼻，1次/天，且等量生理盐水灌胃，连续10天。

1.3 症状评分

鼻分泌物流至前鼻孔处，喷嚏次数1～3个且轻挠鼻部，记1分；鼻分泌物流至满面，喷嚏次数大于11个且剧烈挠鼻面部，记3分；介于二者之间记2分。

1.4 标本采集与制备

心脏放血法将大鼠处死，取游离双侧鼻粘膜组织，置于40 g/L多聚甲醛固定4～6小时，常规石蜡包埋，行苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察嗜酸性粒细胞计数，每张切片观察5个高倍视野，取其平均值。

1.5 Weston-Blot法检测鼻粘膜组织中TGF-β1，IL-4蛋白表达水平

按试剂盒说明进行蛋白提取，用BCA试剂盒测定蛋白浓度，将蛋白变性，制备好的蛋白样品加入10%的凝胶中行SDS-PAGE电泳，转膜，取膜，脱脂牛奶封闭，一抗（1:500）4℃孵育过夜，PBS液洗膜3次；孵育二抗（1:300），PBS洗膜3次，显色曝光后凝胶成像系统分析结果。

1.6 统计学处理

采用SPSS 11.0软件对数据进行处理，实验前后症状学比较采用t检验，组间比较采用方差分析，实验数据以±s表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 症状学观察

除SC组外，造模后各组小鼠均出现不同程度变应性症状，评分均大于5分，见表1，各组分别与SC组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；但TP组和IR组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 干预治疗前后症状评分

2.2 各组鼻粘膜组织病理学观察

OVA组：鼻粘膜组织明显肿胀，增厚，毛细血管扩张，杯状细胞增多，大量嗜酸粒细胞及炎性细胞浸润。TP组：鼻粘膜轻度肿胀，毛细血管未见明显扩张，少量嗜酸性粒细胞及炎性细胞浸润。IR组：病理表现与处理TP组相似。SC组：未见明显异常。

2.3 各组鼻粘膜组织中TGF-β1、IL-4的表达

与SC组比较，OVA组TGF-β1和IL-4含量较高，有统计学意义（P＜0.05）；与OVA组比，IR组和TP组中TGF-β1和IL-4含量均较低，有统计学意义（P＜0.05）。TP组TGF-β1和IL-4含量稍低于IR组，但无统计学意义（P＞0.05）

3 讨 论

AR是由多种物质共同参与的慢性气道炎症，具有典型的临床表现和病理学改变。本实验结果OVA组符合典型AR的改变，而TP和IR组经干预后变应性症状及病理学变化明显改善。表明雷公藤甲素干预作用与氯雷他的治疗定效果相当。IL-4，IL-5等炎症细胞因子可诱导嗜酸性粒细胞的产生、聚集、活化、脱颗粒，辅助B细胞产生IgE等介导体液免疫应答及变态反应，从而产生鼻粘膜炎症。本实验结果表明OVA组嗜酸性粒细胞和IL-4表达水平较IR组明显升高，而TP组较IR组明显降低，OVA组大鼠的变态反应症状学得分较IR组明显升高，TP组较IR组得分明显降低，三者综合表明雷公藤甲素可降低IL-4的发生，抑制嗜酸性粒细胞的生成，从而减轻粘膜细胞肿胀，减轻毛细血管扩张，最终减轻或抑制鼻腔粘膜细胞的变态反应作用。

TGF-β1是一种多功能细胞调节因子，对人体免疫起调节作用，中药可通过局部的信号通路调节抑制TGF-β1的生成，从而减轻气道重塑。雷公藤类药物具有广泛的免疫抑制和激素样作用，但无激素样副作用，已成功应用于支气管哮喘的临床治疗研究[2]，本实验结果表明，雷公藤甲素可显著抑制TGF-β1的表达及嗜酸性粒细胞等炎性细胞产生，减轻鼻粘膜组织的肿胀，减轻鼻变态反应症状，与氯雷他定相比，同样可以改善AR。众多研究表明，呼吸道粘膜的气道反应是通过TGF-β1信号通路来实现的，因此，雷公藤甲素可通过抑制IL-4的生成，局部鼻粘膜的TGF-β1低表达，嗜酸性粒细胞浸润减少，从而使鼻粘膜细胞的肿胀减轻，症状得到缓解，这可能是雷公藤甲素抑制鼻变态反应的重要机制，可为雷公藤于临床治疗AR提供新思路，但如何调节TGF-β1的表达仍需进一步研究。