miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌中的表达及与临床特征的相关性分析

陈丽华，朱婕曼，刘玉凤，刘 浩，马春星，张 凡，刘云春

子宫内膜癌是一种临床常见的发生于子宫内膜上皮组织的生殖系统恶性肿瘤，具有高发病率、高病死率等特点[1-3]。据不完全统计，我国每年新增子宫内膜癌病例约30万，子宫内膜癌患者病死率在所有妇科恶性肿瘤中位居前三位，仅次于宫颈癌、卵巢癌。近年来，我国子宫内膜癌发病率逐渐上升，已经跃居所有女性生殖系统恶性肿瘤第二位，仅次于宫颈癌[4-5]。子宫内膜癌发病早期无明显临床症状，早期诊断率相对较低[6]，导致大多数子宫内膜癌患者确诊时病情已发展至晚期，对患者的身体健康甚至生命安全造成严重威胁，因此对子宫内膜癌进行及时的诊断，提升早期诊断率对子宫内膜癌的临床治疗以及改善患者预后有重要意义[7-8]。本研究收集子宫内膜癌切除标本，对微小RNA-34(miR-34)、鼠双微基因2(MDM2)、内皮PAS1蛋白(EPAS1)的表达进行检测，旨在探究miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌中的表达及与临床特征的相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2018年3月—2019年3月于我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者50例，年龄45～65(56.1±8.2)岁；病理分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期11例，Ⅳ期14例。排除标准：病历资料不全者；接受过放、化疗治疗者；并发其他恶性肿瘤者；心、肾、肝等器官功能不全者。

1.2方法

1.2.1标本制作:所有患者均接受手术对子宫内膜癌组织进行切除。自所有患者手术切除标本中取癌组织标本以及距离癌组织5 cm以上的癌旁组织，使用4%中性福尔马林对所采集的标本进行固定，并进行常规石蜡包埋，厚度为3 μm，连续切片作免疫组化标记。

1.2.2指标检测:取待测标本，使用Western blot法检测miR-34、MDM2、EPAS1相对表达量。

1.2.3免疫组化染色:对待测标本进行脱蜡、水化等处理之后，将其在0.01 mol/L、95℃的枸橼酸缓冲液中浸泡，并进行热修复，并在3%的H2O2的环境下进行培育，10 min后滴入山羊血清进行封闭，在25～27℃的环境下孵育0.5 h，之后将封闭液抽离，加入一抗，将其置于5℃的环境中过夜培养，次日加入二抗，并在恒温箱中培养0.5 h(恒温箱温度37℃)，使用PBS淋液冲洗后进行DAB显色、脱水、封片处理。

2 结果

2.1miR-34、MDM2、EPAS1在癌组织、癌旁组织中的表达情况 子宫内膜癌癌组织中miR-34表达水平显著低于癌旁组织，MDM2和EPAS1表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1、图1。

表1 miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌癌组织、癌旁组织中的表达水平比较

图1 miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌及癌旁组织中的表达情况(DAB×200)

2.2miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者肿瘤体积的关系 肿瘤体积≥5 cm3患者miR-34表达水平显著低于肿瘤体积<5 cm3者，MDM2和EPAS1表达水平高于肿瘤体积<5 cm3者，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者肿瘤体积的关系

2.3miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者病理分期的关系 病理分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者miR-34表达水平低于病理分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于病理分期为Ⅰ～Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表3 miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者病理分期的关系

2.4miR-34、MDM2、EPAS1表达与子宫内膜癌患者淋巴结转移情况的关系 有淋巴结转移的患者miR-34表达水平低于无淋巴结转移的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义(P<0.01)。见表4。

表4 miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者淋巴结转移情况的关系

2.5miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者浸润程度的关系 浸润程度>1/2肌层的患者miR-34表达水平低于浸润程度≤1/2肌层的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于浸润程度≤1/2肌层的患者，差异具有统计学意义(P<0.01)。见表5。

表5 miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者浸润程度的关系

2.6miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者分化程度的关系 低分化患者miR-34表达低于中分化、高分化患者，且中分化患者miR-34表达水平低于高分化患者，差异均有统计学意义(P<0.01)；低分化患者MDM2和EPAS1表达水平高于中分化、高分化患者，且中分化患者MDM2和EPAS1表达水平高于高分化患者，差异均有统计学意义(P<0.01)。见表6。

表6 miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者分化程度的关系

3 讨论

目前为止，临床医学尚未将子宫内膜癌的发病机制研究透彻，越来越多的专家学者开始致力于此研究。近年来，有学者通过分子生物学、基础医学等途径对子宫内膜癌发病机制进行研究[9-10]。miRNA在大多数生物中大量存在，大量实验研究表明，miRNA与机体组织细胞分化、凋亡、神经元发育、脂肪代谢等生理过程密切相关，尤其是肿瘤组织的发生发展与miRNA之间存在密切联系[11-12]。miR-34作为miRNA家族的重要成员，是一种重要的抑癌基因，与癌组织的发生发展密切相关[13-14]。有学者在研究中表示，miR-34被激活后，能够阻滞细胞周期分布，从而起到诱导癌组织细胞凋亡、抑制癌组织生长的作用[15]。还有学者在研究中表示，miR-34在肺癌、膀胱癌、胃癌等恶性肿瘤中均呈现异常表达，但是关于miR-34与子宫内膜癌发生发展相关性的研究还相对较少[16]。本研究结果显示，与癌旁组织比较，子宫内膜癌癌组织中miR-34表达相对较低，提示miR-34在子宫内膜癌癌组织中呈现异常低表达，并推测miR-34的异常表达与子宫内膜癌的发生发展具有一定的关联。本研究结果还显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者miR-34表达水平较低，提示miR-34表达的变化与子宫内膜癌患者肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度以及分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与子宫内膜癌的发生发展。

MDM2是一种新的进化保守基因，属于原癌基因，在多种恶性肿瘤中均呈现异常表达[17-18]。有学者在研究中表示，MDM2的异常高表达能够调控细胞周期分布及细胞凋亡能力，使细胞出现过度增殖、分化情况，从而参与恶性肿瘤的发生发展[19]。本研究结果显示，相比癌旁组织，子宫内膜癌癌组织中MDM2表达相对较高，提示MDM2在子宫内膜癌癌组织中呈现异常高表达。本研究中还对不同临床病理特征子宫内膜癌中MDM2表达进行对比，结果显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者MDM2表达较高，提示MDM2的异常高表达与子宫内膜癌患者临床病理特征密切相关，在子宫内膜癌的发生发展过程中发挥重要作用。

目前关于EPAS1表达变化与恶性肿瘤发生发展之间相关的研究还相对较少[20-21]。有学者在研究中表示，机体正常组织中EPAS1的表达较低甚至无表达，但是在恶性肿瘤组织中其呈现异常高表达，参与癌细胞的一系列生物学行为[22]。本研究结果显示，相比癌旁组织，子宫内膜癌癌组织中EPAS1表达相对较高，提示EPAS1在子宫内膜癌癌组织中呈现异常高表达。本研究还对不同临床病理特征子宫内膜癌中EPAS1表达进行对比，结果显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者EPAS1呈现异常高表达，提示EPAS1表达的变化与子宫内膜癌患者肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度以及分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与子宫内膜癌的发生发展。

综上所述，miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌中呈现异常表达，且与肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度、分化程度等临床病理参数具有一定相关性，与子宫内膜癌发生、演进过程密切相关。