miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a与阿尔茨海默病严重程度的关系及预测疗效的价值

尚晓峰 冉秀荣 李虹

脂蛋白相关磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）被证实与（Alzheimer's disease，AD）患病风险增加有关，并在AD 患者治疗后明显降低［1］。微小核糖核酸-146a（microRNA-146a，miR-146a）在AD 动物的海马中表达显著增加，故推测可能与AD 有关［2］。微小核糖核酸-193b（microRNA-193b，miR-193b）是AD 患者和正常人群的外周血转录差异表达基因之一，与AD发病有关［3］。且国外相关报道［4］显示，miR-146a 等多种微小RNA 与AD 患者认知功能和大脑皮质变化有关，有作为认知功能变化、治疗效果预测标志物的潜质。且曹舸等［5］研究发现，心肌梗死患者微小RNA 表达与Lp-PLA2 呈正相关，可调控Lp-PLA2 水平。因此推测miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 可能以AD 为媒介，具有某种关系，共同参与了AD 发病，但现阶段关于三者之间关系及其在AD 病程作用报道的鲜见。鉴于此本研究将探讨miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 与AD 严重程度的关系及预测疗效的价值，报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2019年6月本院收治的114 例AD 患者，根据病情分为轻度组（n=35）、中度组（n=49）、重度组（n=30）。入组患者法定监护人均对本研究知情，自愿签署知情同意书。本实验经医院伦理委员会批准。

纳入标准：①符合AD 诊断标准［6］；②临床痴呆量表（Clinical Dementia Scale，CDR）≥0.5 分；③Hachineski 缺血指数＜4 分；④年龄≥65 岁；⑤无急慢性感染类疾病。排除标准：①其他疾病的导致的痴呆或认知功能障碍者；②合并谵妄者；③有药物滥用史者；④以往有严重创伤性脑损伤者；⑤有抑郁症、精神分裂症者；⑥合并帕金森病者。

1.2 方法

1.2.1 病情严重程度评估［7］

采用CDR 量表评估、简易精神状态检查量表（Mini-mental State Examination，MMSE）、神经精神问卷（Neuropsychiatric Inventory，NPI）评估。

1.2.2 标本采集与检测

于患者入院后治疗前，采集空腹静脉血5 mL，3 000 r/min 离心15 min，采用南京诺曼生物技术有限公司免疫增强发光法检测血浆Lp-PLA2 水平；采用荧光定量PCR 法检测血清miRNA-193b mRNA、miR-146a mRNA 表达。

1.2.3 治疗方法

盐酸多奈哌齐片（重庆植恩药业有限公司，国药准字H20010723）5 mg/次，1 次/d，临睡前口服；薯蓣健脾益智合剂由本院中药室统一煎制成真空包装，250 mL/袋，15 ml/次，2次/d，口服。共治疗2个月。

1.2.4 疗效判断

根据临床疗效总评量表（Clinical Global Impression，CGI）--疗效指数（Efficacy index，EI）［8］评估疗效，分为显效、有效、稍有效、无效或恶化，其中显效、有效、稍有效为总有效。

1.3 统计学方法

采用SPSS22.0 软件进行处理数据，符合正态分布的计量资料以（）表示，多组间比较以单因素方差分析，两两比较以LSD-t检验，计数资料用n（%）表示、χ2检验，采用Spearman 分析miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 与病情分级的相关性，采用Pearson 分析各指标与MMSE、NPI 评分的相关性，采用接收者操作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲线及ROC 下面积（Area under the curve，AUC）分析各指标预测疗效的价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组一般资料比较

3 组年龄、病程、体质量指数、性别、受教育层次、合并疾病等资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2 比较各组miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平及MMSE、NPI 评分

轻度组、中度组、重度组随着病情加重，miRNA-193b mRNA、MMSE 评分依次降低，Lp-PLA2、miR-146a mRNA、NPI 评分依次升高（P＜0.05）。见表2、图1。

表1 各组临床资料对比［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups［n（%），（±s）］

表1 各组临床资料对比［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups［n（%），（±s）］

资料年龄(岁)病程（月）体质量指数（kg/m2）性别（男/女）受教育层次小学及以下初中高中大专及以上合并疾病高脂血症糖尿病心脏病高血压轻度组（n=35）72.49±7.38 28.97±9.11 22.26±2.01 16/19 5（14.29）16（45.71）10（28.57）4（11.43）5（14.29）7（20.00）1（2.86）2（5.71）中度组（n=49）72.69±8.57 29.26±8.75 22.07±1.89 20/29 4（8.16）24（48.98）18（36.73）3（6.12）7（14.29）11（22.45）2（4.08）4（8.16）重度组（n=30）69.06±8.03 27.46±9.03 22.51±1.72 12/18 3（10.00）15（50.00）10（33.33）2（6.67）4（13.33）5（16.67）2（6.67）3（10.00）F/χ2值0.105 0.401 0.508 0.275 2.023 0.017 0.387 0.578 0.417 P 值0.917 0.671 0.603 0.872 0.918 0.992 0.824 0.749 0.812

表2 比较各组miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 及MMSE、NPI 评分（±s）Table 2 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA，MMSE，and NPI scores in each group（±s）

注：与重度组相比，aP＜0.05；与中度组相比，bP＜0.05。

组别轻度组中度组重度组F 值P 值例数35 49 30 miRNA-193b mRNA 0.96±0.23ab 0.87±0.19a 0.66±0.15 20.156＜0.001 Lp-PLA2（ng/mL）185.64±47.93ab 223.51±50.29a 259.14±55.83 16.790＜0.001 miR-146a mRNA 1.86±0.54ab 3.05±1.01a 5.36±1.17 114.257＜0.001 MMSE 评分（分）23.84±3.49ab 15.15±3.02a 6.45±1.27 302.453＜0.001 NPI 评分（分）41.22±8.59ab 71.18±10.35a 96.54±12.48 227.992＜0.001

2.3 分析各指标与病情分级、MMSE、NPI 评分的相关性

miRNA-193b mRNA（r=-0.358）与病情分级呈负相关（见图2A），Lp-PLA2（r=0.377）、miR-146a mRNA（r=0.749）（见图2B、C）与病情分级呈正相关（P均＜0.05）；miRNA-193b mRNA（r=0.413）与MMSE 评分呈正相关（见图2D），Lp-PLA2（r=-0.339）、miR-146a mRNA（r=-0.707）与MMSE 评分呈负相关（P均＜0.05）（见图2E、F）；miRNA-193b mRNA（r=-0.348）与NPI 评分呈负相关（见图2G），Lp-PLA2（r=0.390）、miR-146a mRNA（r=0.609）与NPI 评分呈正相关（P均＜0.05）（见图2H、I）。（病情分级赋值：1=轻度，2=中度，3=重度）。

2.4 miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 之间的相关性

miRNA-193b mRNA 与Lp-PLA2（r=-0.235，P=0.012）、miR-146a mRNA（r=-0.337，P＜0.001）呈负相关，Lp-PLA2 与miR-146a mRNA 呈正相关（r=0.287，P=0.002）。

2.5 比较不同疗效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平

总有效患者miRNA-193b mRNA 高于无效或恶化患者，Lp-PLA2、miR-146a mRNA 低于无效或恶化患者（P均＜0.05）。见表3。

表3 比较不同疗效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平（±s）Table 3 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA levels in patients with different curative effects（±s）

表3 比较不同疗效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平（±s）Table 3 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA levels in patients with different curative effects（±s）

组别总有效无效或恶化t 值P 值n 83 31 miRNA-193b mRNA 0.88±0.22 0.73±0.11 3.624＜0.001 Lp-PLA2（ng/mL）213.36±57.44 242.41±68.99 2.272 0.025 miR-146a mRNA 3.06±0.85 3.91±1.07 4.418＜0.001

2.6 分析各指标预测疗效的价值

miR-146a mRNA 预测疗效的AUC 为0.796（95%CI：0.710～0.866），截断值为＞3.73，敏感度为64.52%，特异度为81.93%（P＜0.05）；miRNA-193b mRNA 预测疗效的AUC 为0.766（95%CI：0.678～0.840），截断值为≤0.87，敏感度为93.55%，特异度为51.81%（P＜0.05）；Lp-PLA2 预测疗效的AUC为0.741（95%CI：0.651～0.819），截断值为＞245.95 ng/mL，敏感度为45.16%，特异度为97.59%（P＜0.05）；各指标联合检测的AUC 为0.870（95%CI：0.794～0.926），敏感度为77.42%，特异度为89.16%（P＜0.05）。见图3。

3 讨论

miRNA-193b 是微小核糖核酸成员之一，与恶性肿瘤、心肌缺血再灌注损伤等有关，以往研究指出，其在AD 患者中呈低表达，有望成为AD 早期诊断的生物标志物［9］。本研究检测发现miRNA-193b mRNA 与病情分级、认知功能均有关。可见从基因水平上调miRNA-193b mRNA 表达可能为预防AD 病情进展提供了一个新靶点。Kong Y等［10］报道显示，与正常动物相比，miRNA-193 在AD 动物大脑中表达降低。Yang TT 等［11］临床实验指出，miRNA-193 在AD 患者血清中表达低于正常人群。均支持本研究结论。

miR-146a 亦是微小核糖核酸成员之一，和多种神经系统肿瘤、脑血管疾病等有关，近年来报道发现，miR-146a 还与帕金森病、AD 等神经系统变性疾病有关［12］。因此本研究发现miR-146a mRNA 参与AD 病情进展与认知功能损害，提示采用相关药物或技术抑制miR-146a mRNA 表达可能为预防AD 病情进展提供了一个新思路。Xue L等［13］报道显示，与对照人群相比，AD 患者的血miR-146a 水平明显更高，本研究观点与之相似。miR-146a 的表达受核因子-κB 的调控，当miR-146a高表达时，可反映核因子-κB 信号通路被激活，而核因子-κB 信号通路的激活已被证实与AD 神经退行病变息息相关，故miR-146a 可能是联系核因子-κB信号通路、AD 神经退行病变的桥梁之一，从而影响AD 患者病情［14］。同时本研究还发现，miR-146a mRNA 预测疗效可为临床选取合适的预测疗效指标提供参考。

本研究结果提示靶向Lp-PLA2，降低Lp-PLA2表达，可能有助于AD 病情的改善，能为抗AD 药物的研发提供参考。Lp-PLA2 作为一种促炎物质，可增加神经元凋亡率，且还能介导氧化应激反应，除对神经元造成直接损伤外，还能通过其导致的血管损伤，间接诱发神经元缺血、坏死，从而参与AD 病情的进展。同时Lp-PLA2 预测疗效能为临床预测疗效提供循证依据。

本研究提示3 指标可相互影响，共同参与AD病情的进展。但由于研究观点的新颖性，尚不明确3 个指标相互影响的详细机制，有待后续的进一步探讨。此外ROC 分析显示，miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 联合预测疗效的AUC 高于任一单一指标，联合检测3 个指标能为临床提供更可靠的参考信息。本研究不足之处在于，未具体观察抑制或上调miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 表达对病情的影响，故靶向各指标是否真正意义上有助于防止AD 病情进展仍需后续的进一步探讨。

综上所述，miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a与AD 严重程度显著相关，3 者可相互影响，共同参与AD 病情进展，检测3 者表达有望成为预测疗效的新型方案。