EOS-CRSwNP与Neu-CRSwNP鼻粘膜组织IL-13、血清tIgE、外周血EO%和临床评分的比较及相关性研究

马艳丽 陈付华 麻宁 熊小星 边锦 刘亚峰★

慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（Chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP）是临床常见病，且发病人数逐年增多［1］。根据免疫病理学特点将CRSwNP 分为嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎（EosinophilicCRSwNP，EOS-CRSwNP）和中性粒细胞性鼻息肉（Neutrophilic CRSwNP，Neu CRSwNP）2种［2］。EOS-CRSwNP 可以通过手术、药物进行治疗，但患者仍呈现症状重、易复发的特点。EOSCRSwNP 与Neu-CRSwNP 是多种因素相互作用的鼻窦黏膜的炎症性疾病［3-4］，其发病机制尚不完全清楚，有研究［5］认为此病的发展主要与异常的粘蛋白分泌、细菌感染因子、过敏或免疫疾病、解剖异常、炎症反应等有关。白细胞介素13（Interleukin 13，IL-13）是Th2 的代表因子，在动物哮喘模型研究显示其能诱导黏液化生，可诱导黏蛋白表达，易导致黏蛋白大量产生［6］。目前已有研究［7］显示总免疫球蛋白E（Total immunoglobulin，tIgE）、嗜酸粒细胞（Eosinophilic，EOS）与鼻息肉的发生存在一定关联。本研究旨在比较EOS-CRSwNP与Neu-CRSwNP患者组织IL-13、血清tIgE、外周血EO%和临床评分的差异，并评估IL-13 与其他指标的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2017年1月至2018年10月本院收治的90 例CRSwNP 患者，根据病理学结果将其分为EOS-CRSwNP 组49 例、（Neu-CRSwNP 组）41 例、无鼻咽部疾病体检健康对象50 例作为对照组。EOS-CRSwNP 组年龄23～72 岁，平均（46.8±13.6）岁；男27 例、女22 例，其中具有哮喘病史3 例、变应性鼻炎病史26 例，吸烟27 例。Neu-CRSwNP组，年龄25～70 岁，平均（45.4±12.4）岁；男25 例、女16 例，其中具有哮喘病史5 例、变应性鼻炎病史23例，吸烟22 例。对照组，年 龄22～67 岁，平均（43.6±10.0）岁；男29 例、女21 例。EOS-CRSwNP组与Neu-CRSwNP 组上述基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①符合慢性鼻-鼻窦炎的诊断标准［8］；②经鼻内镜、鼻CT 检查确诊；③本研究的组织标本来源于鼻甲黏膜；④本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》［3］相关医学伦理规定。⑤所有患者及家属均已签署知情同意书。排除标准：①鼻咽部肿瘤。②真菌性鼻窦炎、鼻窦囊肿、上颌窦后鼻孔息肉等。③放化疗病史；④感染性疾病；⑤原发性鼻纤毛运动功能障碍、囊性纤维化。

1.2 方法

1.2.1 指标检测方法

采集鼻息肉组织，用含青霉素、链霉素和两性霉素B 三抗的生理盐水清洗2～3 次，每次5～10 min。收集组织置于含有1 mg/mL 胶原蛋白酶的试管中，做好标记，在4℃条件下消化过夜。次日加入10%胎牛血清终止消化，用震荡仪分离上皮细胞，并保存。将细胞种入100 mm 培养皿中，加入BEGM 培养基，放入37℃5%培养箱中培养。培养1 周后，当单层细胞融合达70%～80%时，倒掉膜上培养液，在膜下层加入分化培养液（DMEM/F12：BEGM 为1∶1，100 IU/mL 青霉素、100 μg/mL链霉素）。在培养小室基底侧加入IL-13（10 ng/mL），37℃、5% CO2培养箱中常规培养，每2～3 天换液1 次，每次换液均重新加入10 ng/mL IL-13，对照组加入0.5 mL 培养基。气液界面分别培养至0、7、14 d 收获细胞。取组织匀浆上清按照ELISA 试剂盒说明书操作进行IL-13 的检测。使用SYSMEX XE-2100D 全自动血液分析仪检测血中EOS的百分比，利用Allery Screen 过敏原检测系统，体外测定血清中总IgE。

1.2.2 评分标准

根据鼻窦CT 采用Lund-Mackay、Lund-Kennedy 评分［9］对患者病变程度及范围进行评价。

1.3 统计分析

采用SPSS 21.0 软件进行数据分析，计量数据采用（）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用n（%）表示，行χ2检验；相关性分析采用Pearson 线性相关分析法；P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组IL-13 与tIgE、EO%检测结果比较

3 组中的IL-13 与tIgE、EO%检测结果比较：EOS-CRSwNP 组＞Neu-CRSwNP 组＞对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 3 组IL-13 与tIgE、EO%检测结果比较（±s）Table 1 Comparison of IL-13，tIgE，and EO%test results between the 3 groups（±s）

表1 3 组IL-13 与tIgE、EO%检测结果比较（±s）Table 1 Comparison of IL-13，tIgE，and EO%test results between the 3 groups（±s）

注：与对照组比较aP＜0.05，与Neu-CRSwNP 组比较bP＜0.05。

组别EOS-CRSwNP 组Neu-CRSwNP 组对照组F 值P 值n 49 41 50 IL-13（pg/mL）149.5±32.7ab 73.0±17.5a 40.0±8.9 42.031 0.000 EO%4.38±0.95ab 2.41±0.74a 1.64±0.60 31.664 0.000 tIgE（IU/mL）233.9±67.4ab 164.2±44.0a 127.0±22.1 35.728 0.000

2.2 3 组改良Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy 评分比较

3 组改良Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy 评分比较结果为：EOS-CRSwNP 组＞Neu-CRSwNP 组＞对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 3 组改良Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy评分比较Table 2 Comparison of modified Lund-Mackay score and nasal endoscopic Lund-Kennedy score between the 3 groups（±s）

表2 3 组改良Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy评分比较Table 2 Comparison of modified Lund-Mackay score and nasal endoscopic Lund-Kennedy score between the 3 groups（±s）

组别EOS-CRSwNP 组Neu-CRSwNP 组对照组F 值P 值n 49 41 50改良Lund-Mackay评分（分）20.95±5.41 17.17±4.40 8.36±2.40 3.589 0.001 Lund-Kennedy评分（分）15.07±3.02 11.66±2.43 5.42±1.98 5.822 0.000

2.3 鼻粘膜组织中IL-13 表达与tIgE、EO%检测结果及Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy评分的相关性

经Pearson 线性相关法分析，EOS-CRSwNP 组患者鼻粘膜组织中IL-13 表达与tIgE、EO%检测结果及Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy 评分均呈显著的正相关关系，差异有统计学意义（P＜0.05）。Neu-CRSwNP 组患者鼻粘膜组织中IL-13表达与tIgE 有正相关关系，差异有统计学意义（P＜0.05）；IL-13 表达与EO%检测结果及Lund-Mackay评分、鼻内镜Lund-Kennedy 评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 2 组患者鼻粘膜组织中IL-13 表达与tIgE、EO%检测结果及Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy评分相关性Table 3 Correlation analysis results Results of IL-13 expression and tIgE、EO%in nasal mucosa of 2 group and correlation analysis of Lund-Mackay score

3 讨论

鼻息肉的病因较多，在临床实践中被认为与嗜酸性粒细胞有关［10］。随着临床医学技术研究的深入和发展，临床实践进一步证实CRSwNP 与嗜酸性粒细胞浸润有很强的相关性。因此，临床研究侧重于嗜酸性粒细胞的研究。作为主要的Th2细胞因子之一，IL-13 在哮喘、变应性鼻炎等变应性疾病中发挥重要调控作用［11-12］，但在CRSwNP中尤其EOS-CRSwNP 中的表达情况尚不明确。本研究表明IL-13 可促进嗜酸性粒细胞活化、诱导嗜酸性细胞黏附分子的表达，并抑制其凋亡。IL-13 还可促使B 细胞产生IgE，增强过敏反应，促进黏蛋白分泌等等，IL-13 在中性粒细胞与嗜酸性粒细胞中均有分泌，且在嗜酸性粒细胞中分泌的更多。

CRSwNP 主要由EOS 的浸润、细胞因子引起，研究表明［13］随着EOS 浸润的增加，患者过敏原阳性和过敏因素增加，但没有研究表明EOS 的值是预测鼻息肉发生的良好指标。变应性因素在对CRSwNP 具有一定的作用。IgE 介导的I 型过敏反应可释放大量细胞趋化因子如组胺和白三烯，导致组织炎症细胞浸润，血管舒张，炎性渗出和组织水肿，长期反复水肿和局部炎症，这些因素将促进息肉的形成。毕梦等［14］对CRSwNP 患者进行变应性因素监测，发现患者血清tIgE 浓度比健康人高，且Lund-MackayCT 评分也高，这提示了CRSwNP 患者存在着变态反应性因素。炎症反应因子在Neu-CRSwNP 可能具有极其重要的作用，Neu-CRSwNP 患者存在显著的Th1 优势，表现为更为显著的中性粒细胞浸润，Th1 相关因子通过刺激细胞来发挥促炎作用，Neu-CRSwNP 中嗜酸性粒细胞的变应性因素可能由于组织水肿的等原因，其与组织重塑无显著关联，tIgE 没有显著增高。

当外部病原体侵入EOS-CRSwNP 患者时，中性粒细胞大量聚集，共同调控细胞免疫功能。IL-13可加强非特异性免疫功能，进而改善EO%、Lund-Mackay 评分、鼻内镜Lund-Kennedy 评分。炎症反应可使慢性鼻-鼻窦炎患者嗜酸性粒细胞水平增大，上述检测指标IL-13 对嗜中性粒细胞具有趋化作用，中性粒细胞弹性蛋白酶被激活，增加其他炎症因子的水平，激发机体变态反应，影响tIgE水平，损害鼻黏膜，在患有EOS-CRSwNP 的患者中，嗜酸性粒细胞作用显著，其水平的升高影响鼻息肉的大小和嗅觉功能等。在Neu-CRSwNP 组中，不存在相关关系，分析原因是IL-13 等通过参与外周血抑制中性粒细胞凋亡的过程，还与Th2反应和中性粒细胞化的减弱有一定联系。

张宇等［15］的研究表明，IL-13 在EOSCRSwNP中表达升高，为阐述EOS-CRSwNP 的机制提供参考。本研究纳入病例数较少，实验结果可能存在一定程度的偏倚，在今后的实验研究中需要扩大样本量进一步探究，得出更具说服力的结论。

综上所述，EOS-CRSwNP 患者鼻粘膜组织中IL-13 的表达水平高于Neu-CRSwNP 患者，并且与tIgE、EO%及患者的症状程度有关。