早期口腔鳞状细胞癌中异常表达PDCD4/eIF4A1的预后价值

杨 艳，陈 盛，张 磊，叶传进，黄晓峰

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)的发病率占头颈部肿瘤的24%，术后局部复发是影响早期OSCC患者5年生存率的主要原因[1]，因此寻找有效的生物学标志物有望改善早期OSCC患者的预后。PDCD4是位于人类染色体10q24的抑癌基因[2]。与正常组织相比，PDCD4在结直肠癌、食管鳞状细胞癌和甲状腺髓样癌等多种癌症中的表达较低[3-4]。PDCD4可以与eIF4A1结合，从而抑制肿瘤细胞的增殖[5-6]。然而，PDCD4/eIF4A1信号在OSCC中的临床意义尚不清楚。本实验通过免疫组化检测早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信号在肿瘤中的分布，并分析PDCD4/eIF4A1信号表达与临床病理特征的关系，探讨其对于早期OSCC患者预后的影响。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集南京大学医学院附属口腔医院2007～2014年诊断的50例早期OSCC(T1/T2N0M0)。根据国际癌症控制联盟(UICC)肿瘤TNM分期系统对患者临床分期进行分类。所有患者均未在手术前接受化疗或放疗；并对50例OSCC患者进行随访，随访日期截至2019年1月。本实验经南京大学医学院附属口腔医院伦理委员会批准，所有患者均获得知情同意书，所收集标本均按照伦理和法律标准处理。

1.2 免疫组化anti-PDCD4(1∶200；ab80590；Abcam公司);anti-eIF4A1(1∶200；ab31217；Abcam公司)。所有标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，3 μm厚连续切片，常规脱蜡，免疫组化行SP法染色，DAB显色。然后在PBS中清洗所有切片。苏木精衬染，盐酸乙醇分化，蓝化后梯度乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，用已知阳性标本作阳性对照。

1.3 结果判定PDCD4、eIF4A1染色结果由两名高级病理医师对每种表达进行定量评价，根据阳性细胞百分比和染色强度对免疫组化染色进行综合评分[7-8]。PDCD4、eIF4A1镜下以细胞核或细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。采用半定量积分法判断结果：阳性细胞数占1%～5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分；细胞染色强度：无阳性着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两项得分结果相乘，PDCD4和eIF4A1高、低表达由评分的中位数确定。

1.4 统计学分析采用SPSS 16.0和Prism软件进行统计学分析。采用Pearson χ2检验和Fisher精确检验比较与患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析PDCD4、eIF4A1表达与总生存期之间的关系。在多变量分析中，采用Cox回归模型检验不同预后因素之间的相互关系。

2 结果

2.1 早期OSCC中PDCD4和eIF4A1的表达及其相关性免疫组化结果显示，肿瘤细胞中可见广泛分布的PDCD4和eIF4A1(图1)。PDCD4高表达24例，低表达26例，eIF4A1高表达26例，低表达24例。由于PDCD4与eIF4A1之间的相互作用已经得到证实，本实验发现在肿瘤的相同区域中PDCD4和eIF4A1的表达具有相反的趋势(P=0.022)，当PDCD4高表达时，同一区域的eIF4A1表达有降低趋势(表1)。50例标本连续切片的染色结果显示，PDCD4和eIF4A1的染色强度在同一样本的同一区域具有相反的趋势(图2)。

表1 OSCC中PDCD4与eIF4A1表达的相关性

2.2 OSCC中PDCD4/eIF4A1表达与临床病理特征的关系考虑到PDCD4/eIF4A1信号与OSCC进展相关，本实验进一步分析了不同信号表达模式与早期OSCC患者临床病理特征的相关性(表2)。结果显示：PDCD4和eIF4A1表达与患者性别、年龄、吸烟和T分期无关(P>0.05)，但本研究发现肿瘤细胞中低表达PDCD4和肿瘤分化程度较低(P<0.000 1)、WPOI较差(P=0.001)有关，而高表达eIF4A1和肿瘤分化程度低(P=0.005)、WPOI较差(P=0.005)也密切相关。上述结果提示，肿瘤细胞来源的PDCD4可能负性调节eIF4A1的功能以促进OSCC的恶性表型。

2.3 PDCD4、eIF4A1表达与OSCC预后的关系本实验将50例OSCC患者分为PDCD4高、低表达组和eIF4A1高、低表达组，对PDCD4/eIF4A1信号表达与总生存率之间的关系进行评估，结果表明：肿瘤细胞中PDCD4低表达与总生存时间较短相关(P=0.000 3)，而eIF4A1高表达与总生存时间较短相关(P=0.001 1，图3)。上述结果表明，PDCD4和eIF4A1对OSCC预后的影响呈相反的趋势。

2.4 OSCC预后的影响因素本实验采用单变量和多变量分析OSCC各临床病理特征对预后的影响及意义。结果显示，患者年龄、吸烟、分化、WPOI和eIF4A1在肿瘤细胞中的表达不是患者总生存期的预后指标。肿瘤细胞中PDCD4低表达(P<0.001)、T分期(P=0.002)是OSCC的重要独立危险因素。eIF4A1表达并不是早期OSCC的独立危险因素(P=0.923，表3)。

3 讨论

PDCD4/eIF4A1信号在肿瘤的发生、发展过程中具有重要的病理学意义，因此有必要研究PDCD4/eIF4A1信号在早期OSCC中表达的临床意义。本实验对早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信号的不同表达模式进行了综合分析，发现肿瘤细胞中PDCD4低表达和eIF4A1的高表达具有促癌作用。本实验发现，在OSCC肿瘤细胞中PDCD4/eIF4A1信号的表达模式与以往在其他肿瘤细胞的研究结果一致。

表3 Cox风险回归模型对口腔鳞状细胞癌无瘤生存率预后因素的预测

图3 PDCD4(A)、eIF4A1(B)的表达与口腔鳞状细胞癌患者预后的的关系

前期研究发现，结肠癌中PDCD4表达缺失与患者较差的生存率和较低的无瘤生存率相关，eIF4A1也被发现可以预测乳腺癌的不良预后[9]。然而，目前对它们在同一肿瘤中的共表达模式的预后价值知之甚少，而本实验发现PDCD4与eIF4A1在肿瘤组织相同部位具有相反的表达模式。同时，在肿瘤细胞中高表达PDCD4或低表达eIF4A1与更高的总生存率相关。Cox比例风险模型显示，肿瘤细胞低表达PDCD4是OSCC生存率的重要独立危险因素。

综上所述，早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信号表达水平与反映原发性肿瘤进展的病理参数有关，包括最初诊断时的分化程度和WPOI，同时异常的PDCD4/eIF4A1信号表达水平也可预测早期OSCC的不良预后。