宁夏地区新生儿22q11.2微缺失综合征临床特征分析

于辛酉，闫亚萍，谢 峰，郑丹丹，闫宝兰

22q11.2 微缺失综合征(OMIM:611 867)是最常见的染色体微缺失综合征之一，为常染色体显性遗传，约90%为新发，其发生率为 1/4 000～1/6 000 活产婴儿，包括腭心面综合征(VCFS) 和Di George综合征[1]。临床表现多样，主要有先天性心脏病、免疫缺陷、腭裂畸形和特殊面容等[2-4]，给其自身、家庭以及社会带来深重的负担。本研究探讨22q11.2 微缺失综合征的临床特征及在本地区发病情况，为该病的遗传学诊断和遗传咨询提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料:本研究对象为2014年4月-2019 年4月在宁夏医科大学总医院住院，通过临床症状、体格检查、B超、实验室检测等评估的具有先天性心脏病(CHD)、严重感染、低钙血症、唇腭裂等患儿 77 例。向父母提供知情同意书并获签字同意后，抽取患儿静脉血5 mL 于 EDTA抗凝管中，-20 ℃保存待用。

1.2 方法

1.2.1 基因组 DNA提取:取患儿肘静脉200 μl，采用 QIAamp DNA Mini Kit(Qiagen)试剂盒，按照说明书操作提取DNA，测定所提DNA在260 nm和280 nm处的吸光度(A)值，计算 DNA 浓度及纯度，要求 A260/A280 在1.8～2.0。使用pH为8.0的TE缓冲液将DNA稀释至终质量浓度为50 mg/L。

1.2.2 染色体芯片(CMA)检测:CMA的检测按照美国 Affymetrix公司生产的Cytoscan 750K芯片检测标准操作规程进行操作，应用配套的ChAS软件及生物信息学方法进行数据分析。分析流程参照美国ACMG的指南进行。

1.2.3 MLPA分析:采用荷兰 MRC Holland 公司 MLPA Mental Retardation-1 试 剂 盒(SALSA P324),含40个扩增产物大小为130～463 nt的探针。这40个探针主要为分布在染色体 22q11.2关键区域的29个探针及11个内参探针，覆盖约2 Mb的范围。MLPA操作过程严格按照试剂盒说明书进行,首先将基因组 DNA变性5 min，然后和探针混匀，再次变性1 min后杂交 16 h，用连接酶连接15 min，孵育 5 min后 终止反应，最后PCR 扩增，将扩增产物用ABI 3100 测序仪进行片段分析。所得数据采用 Coffalyser.Net软件进行处理，参考探针正常比值范围为0.7～1.3。

1.2.4 染色体核型分析：G带核型分析，取0.3 mL外周血接种于淋巴细胞培养基中，置于培养箱中37 ℃，5% CO2培养72 h，加入终浓度为秋水仙素后置于培养箱2 h后收获细胞。将培养物吸入离心管， 离心后弃去上清液，加入KCl溶液低渗， 37 ℃水浴25 min，随后加入卡诺固定液预固定10 min后重复固定 2 次制片。玻片置于75 ℃烤箱中3 h后取出，用 胰蛋白酶消化约1～2 min 后， 吉姆萨染液染色进行G显带。采用染色体核型分析系统进行计数分析，同时参照人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN2016)标准进行染色体核型分析。

2 结果

2.1 一般情况:77例患儿中CHD 50例(64.9%)，室间隔缺损24例(31.1%)，法洛四联症13例(16.9%),房间隔缺5例( 6.5%)，肺动脉闭锁5例(6.5%)，主动脉弓离断3例(3.9%)。另外，还有低钙血症16例(20.1%)，严重感染6例(7.8%),CHD合并感染、低钙血症、唇腭裂等5例(6.5%)。

2.2 CMA检测:77例患儿中，检出 22q11.2 缺失11例，占14.3%；其中先天性心脏病8例，3例表现为低钙血症。剩余 66例患儿未检测到异常，占85.7%。所有阳性标本均进行了 3次重复实验，所得结果一致，见表1。

表1 22q11.2微缺失综合征检测结果分析[n(%)]

2.3 MLPA检测：将CMA检测所得11例阳性结果进行MLPA验证，结果均一致。

2.4 核型分析：77例患儿核型分析结果均为正常。

3 讨论

22q11.2微缺失综合征临床表型几乎涉及机体各个部分，即使在同一家系的患者中也具有表型异质性。常见症状及体征包括CHD、特殊面容和腭裂，免疫缺陷和自身免疫病也较多见[5]。本研究11例患者中，CHD的发病率为72.7%，其中室间隔缺损占50%(4/8),法洛四联症患占25%(2/8)，肺动脉闭锁占12.5%(1/8)，主动脉弓离断占12.5%(1/8)明显低于上述研究。有研究表明75%～85%的22q11.2微缺失综合征都有先天性血管畸形[2，6]。本研究所得结果略低于此数据，可能由于所纳入样本量不足所致。但从22q11.2微缺失综合征的各个临床表现发生率分析，本文中CHD仍是发生率最高的临床症状，与国内外研究一致。22q11.2微缺失综合征中的心血管畸形多以心脏圆锥干异常为主[7- 8]，本研究病例中有50%为室间隔缺损室，也符合该病的临床表现。本研究非圆锥动脉干畸形中未发现合并22q11.2微缺失。出现差异的原因考虑为本地区的经济社会原因，多数复杂畸形患者未能进行进一步检测，转诊至上级医院或放弃治疗，使的本组研究中圆锥动脉干畸形患者病例数比例偏低。在今后的研究中将扩大样本量，以便更加准确地反映22q11.2微缺失综合征在本地区的CHD患者中发病情况。

CHD是我国最常见、亦是最严重的先天性畸形之一。《中国出生缺陷防治报告》显示，2011年全国出生缺陷监测系统统计的围生期CHD发病率高达40.95/万，占出生缺陷的首位。患有CHD的新生儿如果未进行及时的干预和治疗，大约有1/3会在出生后1个月内因严重的病情和畸形而夭折，及早进行相关遗传学诊断，明确病因，对于患儿预后指导及家庭的再生育风险评估具有极大意义。

部分22q11.2微缺失综合征患儿存在严重感染、低钙血症等症状[9]，本研究3例患儿临床表现为首发症状，这与张莉等人[10]报道一致。免疫问题是除CHD外最常见的22q11.2症状。由于该综合征的临床表现异质性，本文中的11例患儿表现不尽相同。目前研究发现[8，11-12]，22q11.2微缺失综合征是由染色体22q11.2区域重排导致，90%的缺失片段大小为3 Mb,包含30～40个基因。目前已经确定的TBX1基因的转录因子参与调控发育过程，与心脏畸形、腭裂、甲状旁腺功能不全等相关[13-15]。本研究检测11例患儿缺失片段大小平均约为3.0 Mb，缺失区域覆盖该综合征的典型区域，含有关键基因-TBX1。还需要积累更多数据明确基因型与表型间的关系，从而进一步阐明该病的发病机理。

从出生缺陷防控角度出发，多数学者认为凡是CHD患者均应进行22q11.2微缺失检测[16]。22q11.2 微缺失综合征呈常染色体显性遗传，其生育患儿的风险为50%，因此，如果发现患该病时，应对其父母进行检测。本研究11例患儿父母均拒绝进行相应的检测，无法评估其再生育风险，建议直接进行产前诊断。