KLF6 及相关抗体P63、P16、CK5/6 在宫颈癌中的表达及意义

周姝雯，胡成艳，余芳，罗骏，伍仁姣

（黔西南州人民医院，贵州 兴义 562400）

0 引言

宫颈癌常由感染引起，多见于30 岁以上女性，早期多无明显症状，可能会有接触性出血情况，但患者多不会注意，发展到中晚期，可见不规则阴道流血，阴道还会出现异常排液情况，液体味多腥臭，发展到晚期可见尿频、下肢肿痛，还会引起周围器官组织病变，危害性极高[1]。对于疾病的诊治，临床上建议越早越好，近年来发现，KLF6 在宫颈癌中的表达存在差异，为疾病早期诊断提供了方向[2]。同时，KLF6 有望成为判断宫颈癌患者预后效果的重要指标，在未来拥有较为广阔的应用前景。本研究通过检测KLF6 在宫颈癌中的表达，探讨其临床意义，为临床提供参考指标，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选择我院2019 年1 月至2019 年12 月存档病例，经再次严格阅片确定宫颈癌前病变50 例，设为对照组，宫颈癌50 例，设为观察组，所选案例均经过病理学诊断，确认为宫颈癌前病变和宫颈癌，并且未罹患其他疾病，不会产生无关因素干扰，且同意参加本次研究，符合研究标准。对照组年龄41-64 岁，平均（52.86±4.28）岁，观察组年龄42-64 岁，平均（53.36±3.97）岁。基本信息无显著差异（P＞0.05），有可比性。

1.2 方法。提取患者病例石蜡包埋切片，厚4 um，作免疫组织化学染色，同时提取对照组健康女性组织切片，根据不同抗体不同要求作出阳性结果的判断。比较宫颈癌及宫颈癌前病变各种免疫标记物的表达，并探讨上述标记物与宫颈癌生物学行为的关系。

操作步骤如下：

（1）石蜡切片脱蜡至水。

（2）3%H2O2室温孵育10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

（3）蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5 分钟。

（4）抗原修复，即将1500-3000 mL 的枸橼酸盐抗原修复液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。切片置于切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖锅压阀。当压力锅开始慢慢喷气时（约加热5-6 分钟后），计时3 分钟，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，取下气阀，打开锅盖，取出切片。

（5）蒸馏水洗后，PBS 洗2 分钟×3。

（6）滴加一抗，4℃过夜。

（7）PBS 冲洗，2 分钟×3 次。

（8）滴加试剂1，室温或37℃孵育20 分钟。

（9）PBS 冲洗，2 分钟×3 次。

（10）滴加试剂2，室温或37℃孵育20 分钟。

（11）PBS 冲洗，2 分钟×3 次。

（12）DAB 显色剂显色。

（13）自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。

1.3 分析标准。KLF6 以细胞浆染色有清晰淡黄色至棕黄色颗粒为阳性；阳性结果判定根据以下两方面的总分进行判断：①选染色均匀的阳性表达肿瘤区域，以阳性细胞所占百分比为五级计分：阳性细胞率＜5%计0 分；阳性细胞率5%-25%计1 分；阳性细胞率26%-50%计2 分；阳性细胞率51%-75%计3 分；阳性细胞率＞75%计4 分。②按染色强度来分：不着色0 分，浅黄色1 分，棕黄色2 分，黄褐色3 分。两种评分相加，0-1 分为阴性（-），2-3 分为弱阳性（+），4-5分为阳性（++），6-7 分为强阳性（+++），以上方法均由两名病理医师采用双盲法独立检测，取平均值。

1.4 统计学分析。使用SPSS 20.0 软件分析，计数资料以率（%）表示，用检验，P＜0.05 代表有统计学意义。

2 结果

根据KLF6 及相关抗体P63、P16、CK5/6 表达情况，对照组宫颈癌前病变患者，多数呈弱阳性表达，少数呈阳性、强阳性表达，观察组宫颈癌少数呈弱阳性表达，多数呈强阳性表达，就阳性、强阳性表达情况来看，观察组明显高于对照组，数据差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

3 讨论

宫颈癌的诊断主要是依靠病史、临床表征、妇科检查、宫颈组织活检等，其中组织活检是诊断的重要指标，但是此类诊断模式一般都是应用于患者已经发现明显异常之后，此时疾病多数已经发展到中晚期，治疗难度增加[3]。基于此种情况，临床上一直在致力于早期筛查，宫颈细胞学在此方面起到了重要作用，为疾病的早期诊治提供了可靠依据，其中起到重要指导意义的就是KLF6 及其相关抗体的表达情况[4]。目前，针对该基因的研究还在不断扩大，目的在于探讨其作用机制，分析其在癌细胞中的作用。

表1 KLF6 及相关抗体P63、P16、CK5/6 表达情况[n（%）]

KLF6 属于抑癌基因，在临床上发现，肿瘤中普遍存在该基因，现阶段所得出的结论是KLF6 能够诱导细胞的凋亡，但是尚不明确其作用机制，主要认为有杂合性缺失、点突变、选择性剪接等原因[5]。其相关抗体主要有P63、P16、CK5/6，P63 常用于肿瘤的诊断，尤其适用于鳞状上皮癌，P16 属于抗癌基因，能够直接参与细胞周期的调控，在肿瘤细胞中超过一半P16 存在纯合子缺失的情况，CK5/6 是基底细胞角蛋白，常用于癌症类型的诊断[6]。可以明显发现，KLF6 及其相关抗体在肿瘤中的表达会有明显不同，临床上可以参考其表达情况，对病情加以分析。

根据KLF6 及相关抗体P63、P16、CK5/6 表达情况，对照组宫颈癌前病变患者，多数呈弱阳性表达，少数呈阳性、强阳性表达，观察组宫颈癌少数呈弱阳性表达，多数呈强阳性表达，就阳性、强阳性表达情况来看，观察组明显高于对照组（P＜0.05）。

综上所述，宫颈癌患者、宫颈癌前病变患者相比，KLF6及相关抗体P63、P16、CK5/6 表达情况有明显差异，临床上可以根据此数据对疾病发展情况进行评估。