呼吸道九联检试剂在儿童呼吸道感染病原体检测中的应用价值

陈文锋 阮永钦 李 桦

广东省阳江市妇幼保健院检验科，广东阳江 529500

呼吸道感染是一种儿科常见病，引起感染的原因很多，如衣原体、支原体、病毒、真菌、细菌等，一种病原体可具有多种表现形式，同一种临床表现又可由多种病原体所致[1]。及早查明儿童呼吸道感染的病原体，对于提高治疗方案的有效性、准确性、针对性具有重要意义。在孔京慧等[2]研究中，认为呼吸道九联检应用于儿童呼吸道感染疾病诊断中，可有效检出不同病原体，具有重要的诊断价值。本研究纳入本院2017年6月～2019年6月儿科收治的呼吸道感染患者1500例、同期门诊体检的健康儿童1500例，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入2017年6月～2019年6月本院儿科收治的呼吸道感染患者1500例作为实验组，以及同期门诊体检的健康儿童1500例作为对照组。实验组男820例，女680例；年龄2～12岁，平均（7.1±1.5）岁；病程 1～ 6d，平均（3.52±1.14）d；体 重 4.5～ 38.5kg，平 均（21.65±3.59）kg。 对照组男840例，女660例；年龄3～11岁，平均（7.05±1.44）岁；病程 2～ 5d，平均（3.55±1.11）d；体重 4.9 ～ 38.2kg，平均（24.71±3.66）kg。

本研究得到医院伦理委员会批准。纳入标准：（1）均无口服抗菌药物史；（2）无器质性病变；（3）家属已签署此次研究知情同意书；（4）病情以及生命体征均稳定。排除标准：（1）存在重大感染疾病者；（2）合并严重先天性、遗传性疾病者；（3）肾、肝、心等脏器功能不全者；（4）存在血液系统疾病者；（5）未开展研究前1个月进行抗菌治疗者。

1.2 方法

采集标本：抽取所有患儿3mL静脉血，以3000r/min速率离心5min后，分离血清，当天完成检测，一切操作谨遵相关说明书进行。试剂、仪器：三目荧光显微镜（日本奥林巴斯集团，OLYMPUS CX-22），试剂由西班牙比尔塞有限公司VIRCELL，S.L.生产。

方法：间接免疫荧光法，取25μL血清，采用PBS（聚丁二酸丁二醇酯）以1∶1的比例进行稀释。取30μL稀释后的血清，加入吸附剂150μL中，充分混匀，而后进行离心处理，速率为12000r/min，离心时间为10min，将沉淀物质除去。在载玻片上每个孔加入吸附剂15μL对处理过的血清进行阳性、阴性对照。将载玻片置入湿盒中，温育90min，温度为37℃。采用PBS缓冲液对载玻片漂洗10min后，采用蒸馏水漂洗。自然晾干载玻片之后，每个孔中加入荧光素结合物15μL，置入湿盒中，温育30min，温度为37℃。每个孔中加入封闭介质1滴，盖上盖玻片，采用三目荧光显微镜在400倍镜下观察。

1.3 观察指标与判定标准

阳性对照：PIVS、RSV、IFB、IFA以及ADV对阳性血清1%～15%细胞的细胞膜、细胞浆、细胞核出现苹果荧光绿色。COX、CP以及LP中所有的细菌会呈现出苹果绿色荧光。MP对阳性血清在细胞外围则呈现出苹果绿色荧光[3]。阴性对照：COX、CP以及 LP无荧光，PIVS、RSV、IFB、IFA、ADV、MP细胞呈红色[4]。

1.4 统计学方法

采用SPSS26.0软件处理，计数资料数据以[n（%）]表示，进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者病原体阳性率比较

实验组检出780例病原体阳性，对照组检出62例病原体阳性。实验组病原体阳性检出率（100.00%）明显高于对照组（91.94%），差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者病原体阳性率比较[n（%）]

2.2 实验组病原体单一感染与混合感染检出情况

实验组780例阳性标本中，550例感染，占70.51%（550/780）。 其 中 380例 单 一 感 染，占69.09%（380/550）；170例混合感染，占 30.91%（170/550）。MP单一感染率以及混合感染率均高于其他病原体（PIVS、IFB、IFA、RSV、ADV、CP、COX、LP），P＜ 0.05（单一感染率，χ2=112.6393、142.5958、142.5958、86.6400、112.6393、112.6393、、112.6393、112.6393，P均 ＜ 0.05。 混 合 感 染 率，χ2=58.8642、58.8642、58.8642、37.7778、58.8642、37.7778、58.8642、58.8642，P均＜ 0.05）。见表 2。

表2 病原体单一感染与混合感染检出情况比较[n（%）]

2.3 实验组男女性别阳性率比较

实验组780例阳性标本中，女380例，占 48.72%（380/780）， 男 400例， 占 51.28%（400/780），男女性别阳性率比较差异无统计学意义（χ2=1.1026，P=0.7488 ＞ 0.05）。

3 讨论

儿童由于免疫功能低下，呼吸道容易受到各种病原体的侵袭，进而引发呼吸道感染，具体包括毛细支气管炎、支气管肺炎、支气管炎、扁桃体炎等[5-6]。呼吸道感染中非典型性呼吸道感染患者临床症状不典型，极易造成误诊，明显增加了临床治疗难度[7]。据调查显示，将近90%的小儿呼吸道感染为病毒感染[8]。儿童呼吸道感染中的非典型病原体包括副流感病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体、嗜肺军团菌等[9-10]。对于不明原因发热一周以上、喘息、反复咳嗽的患者，往往无法确定病原体，导致滥用抗生素，明显增加了交叉感染率[11]。目前，我国对于儿童呼吸道感染病原学的研究相对较少，在临床症状方面小儿肺炎患者病情轻重不一，因此加强对儿童呼吸大感染患者病原体检查极为重要。

本研究九项呼吸道病原体检测均为IgM，因为儿童呼吸道感染患者首先出现的抗体为IgM抗体[12]。病毒感染一般在发病1周后出现，发病7～14d内会达到高峰，因此IgM抗体可作为近期感染的有效标志物[13]。本研究示，实验组病原体阳性检出率明显高于对照组，MP阳性率明显高于其他病原体（P＜0.05）。MP单一感染感染率以及混合感染率均高于其他病原体（P＜0.05）。本研究结果与王生清等[14]研究结果接近。提示儿童呼吸道感染中以MP-IgM病原体为主。机体在感染MPIgM之后，正常的免疫功能会发生紊乱，出现延迟型变态反应，导致机体受损，增加其他病原体侵入几率。需要注意的是流感病毒也是引发儿童呼吸道感染的重要病原体，IFA以及IFB往往会造成局部儿童呼吸道感染暴发，因此加强对儿童呼吸道感染患者IFA以及IFB等病原体监测极为重要。对于儿童呼吸道感染患者进行呼吸道九联检试剂检测IgM抗体，只需要一份血液标本，即可检测患者血清中PIVS-IgM、IFB-IgM、IFA-IgM、RSV-IgM、ADVIgM、CP-IgM、COX-IgM、MP-IgM、LP-IgM等病原体，具有检测迅速、操作方便、价格低廉等优点，在尽快确定致病因子，为临床医师制定治疗方案具有重要的指导意义[15]。

综上所述，对儿童呼吸道感染患者进行呼吸道九联检试剂进行病原体检测，可有效避免临床滥用抗菌药物，值得在基层医院大力推广，给更多儿童呼吸道感染患者带来福音，具有一定的社会效益和经济效益。