MDC1与YAP1在卵巢癌中的表达及与临床特征和预后的关系

陈晗，艾比布汗·阿布来孜，热孜万古力·热西提，刘文婷#

新疆医科大学第一临床医学院（新疆医科大学第一附属医院）1妇二科，2生殖医学中心，乌鲁木齐830054

卵巢癌是临床常见的生殖系统恶性肿瘤，近年来，由于人们生活习惯的改变及社会压力的增加，卵巢癌的发病率呈逐年上升的趋势，对女性的身体健康及生命安全均造成了严重的影响[1-2]。由于卵巢癌发病早期没有特异性的临床症状，多数患者在确诊时已发展为中晚期，错过了最佳手术时机，致使治疗效果较差，卵巢癌患者的5年生存率小于30%，因此应该积极寻找有助于卵巢癌早期筛查的特异性生物分子及新的治疗靶点以改善患者预后[3-4]。近年来关于肿瘤标志物检测辅助诊断恶性肿瘤的研究较多，但是关于Yes相关转录调节因子 1（Yes1 associated transcriptional regulator，YAP1）、DNA损伤介质检查点1（mediator of DNA damage checkpoint 1，MDC1）在卵巢癌中表达的研究较少，本研究对卵巢癌患者卵巢组织中YAP1、MDC1的表达情况进行探讨，并分析其与卵巢癌患者临床特征和预后的关系，旨在为临床诊断与治疗提供参考，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2017年6月至2019年6月在新疆医科大学第一临床医学院病理科保存的118例卵巢癌组织标本为卵巢癌组，选取同期保存的56例卵巢正常组织标本为对照组。纳入标准：①具有完整的临床资料及随访资料；②卵巢癌患者经术后病理诊断确诊，正常卵巢组织来源于接受手术治疗的生殖系统良性疾病患者；③对本研究知情同意，并签署知情同意书。排除标准：①伴有其他恶性肿瘤；②未接受随访；③术前接受放化疗。卵巢癌组患者年龄35～62岁，平均年龄（49.72±7.69）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期39例，Ⅲ～Ⅳ期79例；淋巴结转移45例，无淋巴结转移73例。对照组研究对象年龄32～65岁，平均年龄（51.29±8.12）岁。两组研究对象的基线特征比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法

采用免疫组化法检测卵巢癌组织及正常卵巢组织中的YAP1、MDC1表达水平，兔抗人YAP1多克隆抗体购自英国Abcam公司，兔抗人MDC1多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。将卵巢癌组织与正常卵巢组织应用4%甲醛固定，石蜡常规包埋，应用切片机将标本切成厚度为5 μm的切片，进行YAP1、MDC1的免疫组化染色，所有操作严格按照试剂盒说明进行，以卵巢癌阳性组织切片为阳性对照，磷酸盐缓冲液为阴性对照。

1.3 阳性判断标准[5]

YAP1阳性表达位于细胞核与细胞质，MDC1阳性表达位于细胞核，阳性细胞呈黄色或棕黄色。染色强度评分：未染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色或褐色为3分。阳性细胞所占百分比评分：＜5%为0分，≥5%且＜25%为1分，≥25%且＜50%为2分，≥50%且＜75%为3分，≥75%为4分。根据两项评分的乘积判断阳性结果，≥4分判断为阳性，＜4分则为阴性。

1.4 观察指标

比较YAP1、MDC1在卵巢癌组织及正常卵巢组织中的表达情况，并分析其与临床特征及预后的关系，患者术后以电话随访或门诊复查方式进行为期1年的随访，统计患者预后。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验，相关性采用Pearson相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌组织及正常卵巢组织中YAP 1、MDC 1表达情况的比较

卵巢癌组织中YAP1、MDC1的阳性表达率均明显高于正常卵巢组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 卵巢癌组织及正常卵巢组织中YAP 1、MDC 1表达情况的比较[ n（%）]

2.2 不同临床特征卵巢癌患者的卵巢癌组织中YAP 1、MDC 1表达情况的比较

分化程度为G1级、FIGO分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢癌组织中YAP1阳性表达率分别明显高于分化程度为G2～3级、FIGO分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的卵巢癌患者，差异均有统计学意义（χ2=29.804、17.979、11.113，P＜0.01）；分化程度为G1级、FIGO分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢癌组织中MDC1阳性表达率分别明显高于分化程度为G2～3级、FIGO分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的卵巢癌患者，差异均有统计学意义（χ2=31.222、39.519、10.062，P＜0.01）。（表2）

表2 不同临床特征卵巢癌患者的卵巢癌组织中YAP 1、MDC 1表达情况的比较（ n=118）

2.3 不同预后患者YAP 1、MDC 1表达情况的比较

根据患者的预后不同分为死亡组（n=25）与生存组（n=93），死亡组患者的卵巢癌组织中YAP1、MDC1阳性表达率均明显高于生存组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表3）

表3 不同预后患者YAP 1、MDC 1表达情况的比较[ n（%）]

2.4 YAP 1、MDC 1在卵巢癌组织中表达情况的相关性分析

经相关性分析显示，YAP1、MDC1在卵巢癌组织中表达无相关性（r=0.126，P=0.213）。

3 讨论

卵巢癌在妇科恶性肿瘤中的发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌，但病死率却位居第一[6-7]。近年来，随着手术方式的不断进步及辅助治疗的改进，早期卵巢癌患者在外科手术治疗后进行放化疗辅助治疗5年生存率得到明显提高，但是晚期患者的预后仍然较差，对于晚期患者治疗的关键在于改善生活质量，延长生存期[8-10]。因此提高早期卵巢癌的诊断水平，对提高患者生存率至关重要。目前临床对于卵巢癌发生及发展的分子生物学机制尚未明确，YAP1是Hippo信号通路中较为关键的调节蛋白，YAP1在细胞内的定位关键在于是否发生磷酸化，当Hippo信号通路被激活后，YAP会发生磷酸化，此时YAP则会聚集在细胞质中[11-12]。当Hippo信号通路失活后会转移到细胞核中，与TEAD相结合，对于生长相关基因的表达发挥促进作用，比如双调蛋白、结缔组织生长因子等，这些都说明Hippo信号通路对YAP进行磷酸化负调控，调节细胞的凋亡和增殖，使YAP1聚集在细胞质[13-15]。目前有相关研究报道，YAP信号通路作为肿瘤抑制的一个重要信号通路，具有调节器官大小和维持细胞增殖与凋亡的动态平衡等功能，与肿瘤的发生与发展具有密切关系[16]。本研究结果显示，YAP1在卵巢癌组织中的阳性表达率明显高于正常卵巢组织，同时与卵巢癌患者的分化程度、临床分期及淋巴结转移有关，提示YAP1可能与卵巢癌的发生与发展有关，同时死亡组患者的YAP1阳性表达率高于生存组，进一步说明了YAP的高表达对卵巢癌的进展有促进作用，分析其原因可能是因为Hippo信号通路失活，导致YAP转移到细胞核，促进了靶基因的表达，进而促进肿瘤细胞的增殖与转移。最近较多研究显示，YAP1在肿瘤组织中的表达增高，尤其是在细胞核内呈高表达，进一步证明YAP1参与了肿瘤的发生与发展[17-18]。

MDC1蛋白是由骨髓细胞分离而得，其在不同种类肿瘤中发挥的作用不同，在宫颈癌和食管癌中呈高表达，能够促进肿瘤细胞的浸润、增殖、转移，在肺癌和乳腺癌中表达水平较低，可能发挥抑癌基因的作用[19]。本研究结果显示，MDC1在卵巢癌组织中的阳性表达率明显高于正常卵巢组织，且与卵巢癌患者临床分期、分化程度及淋巴结转移有关，同时在死亡组患者中的阳性表达率高于生存组，表明MDC1在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。分析其原因可能是因为在DNA损伤后，MDC1激活并磷酸化，能够参与细胞周期调控与DNA损伤修复，促进DNA修复程序的启动，MDCA失活或突变都会增加细胞基因的不稳定性，而当DNA修复受到阻碍时则会诱发癌变[20]。在对YAP1与MDC1的相关性研究分析中显示，两者在卵巢癌组织中的阳性表达无相关性，但是由于本研究样本较少，还需要进一步扩大研究证实。

综上所述，卵巢癌患者卵巢组织中YAP1、MDC1均呈高表达，且与患者临床分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关，参与了卵巢癌的发生与发展，可以用于卵巢癌的辅助诊断。