血清一氧化氮、血管内皮生长因子水平与喉癌患者颈部淋巴结转移的关系

李志勇，马鹏，彭涛，冯俊，杨荃荃

南充市中心医院耳鼻咽喉头颈外科，四川 南充637000

喉癌是最常见的头颈部恶性肿瘤之一，占全身恶性肿瘤的1.2%～1.6%，其发生与吸烟、饮酒、病毒感染及空气污染等因素有关[1]。研究显示，在喉癌患者死亡病例中，因颈部淋巴结转移导致的患者死亡数占绝大部分[2]。早期发现颈部淋巴结转移灶并进行有效治疗，对延长喉癌患者的生存时间，提高其生存质量具有积极意义。肿瘤的生长、转移依赖于血管生成，在相关指标中，一氧化氮（nitric oxide，NO）参与了细胞凋亡、血管生成、细胞侵袭和转移的过程，在肿瘤的进展中发挥了重要作用[3]。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）具有较强的促进血管生成的作用，可刺激肿瘤细胞转移[4]。目前鲜有研究报道NO、VEGF在喉癌患者颈部淋巴结转移中的预测价值。本研究通过比较喉癌患者、喉部良性病变患者和健康者的血清NO、VEGF水平，并分析两者与喉癌患者颈部淋巴结转移的相关性，旨在提高喉癌患者颈部淋巴结转移的早期检出率，改善患者预后，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2017年10月至2018年12月于南充市中心医院就诊的39例喉癌患者和34例喉部良性病变患者，分别作为喉癌组和喉部良性病变组。纳入标准：经临床诊断确诊为喉癌或喉部良性病变[5]。排除标准：①合并严重感染性疾病；②合并其他恶性肿瘤；③合并心、肝、肾功能障碍；④合并血液系统、内分泌系统疾病；⑤入组前接受过放化疗或手术治疗；⑥患有精神疾病或对本研究依从性差。另选取36例同期健康体检者为健康对照组。3组研究对象的性别、年龄、体重指数（body mass index，BMI）比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有研究对象均对本研究知情并签署知情同意书。

表1 3组研究对象的基线特征

1.2 检测方法

抽取3组研究对象的清晨空腹静脉血5 ml，离心后分离血清，置于-70℃冰箱中保存备用，采用硝酸还原酶法检测血清NO水平，采用酶联免疫吸附试验检测血清VEGF水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用q检验。采用Spearman相关分析法进行相关性分析。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线和曲线下面积（area under the curve，AUC）评价VEGF、NO单独及联合检测对喉癌患者颈部淋巴结转移的预测价值，0.5＜AUC＜0.7表示诊断价值低，0.7≤AUC＜0.9表示诊断价值中等，AUC≥0.9表示诊断价值较高。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组研究对象血清NO、VEGF水平的比较

喉癌组、喉部良性病变组、健康对照组的血清NO、VEGF水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。喉癌组患者的血清NO、VEGF水平均高于喉部良性病变组和健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；喉部良性病变组患者的血清NO、VEGF水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 3组研究对象血清NO、VEGF水平的比较（±s）

表2 3组研究对象血清NO、VEGF水平的比较（±s）

注：a与健康对照组比较，P＜0.05；b与喉部良性病变组比较，P＜0.05

组别喉癌组（n=39）喉部良性病变组（n=34）健康对照组（n=36）F值P值88.47±15.23a b 79.64±12.17a 53.21±11.37 72.135 0.000 2.13±0.51a b 1.35±0.41a 0.78±0.22 106.850 0.000 NO（μmol/L）VEGF（μg/L）

2.2 不同颈部淋巴结转移情况喉癌患者血清NO、VEGF水平的比较

39例喉癌患者中，14例发生颈部淋巴结转移，25例未发生颈部淋巴结转移。颈部淋巴结转移患者的血清NO、VEGF水平均高于颈部淋巴结未转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表3）

表3 不同颈部淋巴-结转移情况喉癌患者血清NO、VEGF水平的比较（±s）

表3 不同颈部淋巴-结转移情况喉癌患者血清NO、VEGF水平的比较（±s）

颈部淋巴结转移情况转移（n=14）未转移（n=25）t值P值NO（μmol/L）97.45±12.48 82.58±16.41 2.941 0.006 VEGF（μg/L）2.33±0.62 1.93±0.44 2.347 0.024

2.3 血清NO、VEGF水平与喉癌患者颈部淋巴结转移的相关性

血清NO、VEGF水平均与喉癌患者颈部淋巴结转移呈正相关（r=0.399、0.385，P＜0.05）。

2.4 血清NO、VEGF单独及联合检测对喉癌患者颈部淋巴结转移的预测价值

血清NO、VEGF单独及联合检测预测喉癌患者颈部淋巴结转移的AUC分别为0.740（95%CI：0.566～0.860）、0.731（95%CI：0.575～0.867）和 0.814（95%CI：0.657～0.920）。（图1）

图1 NO、VEGF单独及联合检测预测喉癌患者颈部淋巴结转移的ROC曲线

3 讨论

随着空气污染的日益加重以及人们生活习惯的改变，近年来喉癌的发病率呈逐渐上升趋势[6]。喉癌患者早期无明显症状，60%～70%的患者就诊时已进展至中晚期，且部分患者已发生局部淋巴结转移[7]。有研究指出，喉癌患者的预后与颈部淋巴结转移情况密切相关，发生颈部淋巴结转移的喉癌患者的5年生存率下降超过50%[8]。因此，尽早预测喉癌患者颈部淋巴结转移并实施规范治疗，对提高患者的生存率具有重要意义。目前，临床上尚无评估颈部淋巴结转移的精确方法，主要以影像学检查为主，如磁共振成像（MRI）和增强计算机断层扫描（CT），但其准确度和灵敏度仍无法满足喉癌患者颈部淋巴结转移的临床预测需求[9]。

近年来，血清标志物在恶性肿瘤中的预测价值逐渐引起临床工作者的重视。有学者认为，血管生成在肿瘤转移中具有促进作用，当血管生成因子表达紊乱时，可使肿瘤由无血管状态转变为有血管状态，肿瘤的增殖能力将大幅度提高，进而导致肿瘤转移[10]。NO、VEGF均为反映血管内皮功能的活性物质，其中NO是机体内重要的活性和信号分子，由一氧化氮合酶催化左旋精氨酸生成，可调节VEGF水平，参与肿瘤的生长过程，包括迁移和血管生成等[11]。VEGF是一种具有高度特异性的促血管内皮生长因子，具有增加血管通透性及促进血管内皮细胞增殖、迁移、细胞外基质变性和血管生成等作用，在肿瘤血管生成及浸润转移中发挥关键作用[12]。

梁宇等[13]研究认为，血清VEGF水平可评估动脉化疗栓塞对肝癌患者的治疗效果，其可作为预测患者预后的血清标志物之一。另有文献报道，来源于小鼠乳腺癌细胞的NO可促进肿瘤血管生成及迁移[14]。本研究结果显示，喉癌患者的血清NO、VEGF水平均高于喉部良性病变患者和健康者，差异均有统计学意义（P＜0.05）；颈部淋巴结转移的喉癌患者血清NO、VEGF水平均高于颈部淋巴结未转移的喉癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）；血清NO、VEGF水平均与喉癌患者颈部淋巴结转移呈正相关（P＜0.05）。提示NO、VEGF可能对喉癌患者颈部淋巴结转移具有较好的预测价值。

Cheng等[15]研究指出，NO是导致多种恶性肿瘤发生转移的关键因素。黄静等[16]研究发现，发生淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者的VEGF水平明显高于无淋巴结转移的患者。以上研究均进一步证实NO、VEGF在恶性肿瘤的转移中发挥了促进作用。为探究NO、VEGF对喉癌患者颈部淋巴结转移的预测价值，本研究比较了两者单独及联合检测预测喉癌患者颈部淋巴结转移的AUC，发现两者联合检测的AUC最大，说明NO、VEGF联合检测对喉癌患者颈部淋巴结转移具有较好的预测价值。这是因为NO、VEGF均在肿瘤血管生成和转移中具有重要意义，两者联合检测可进一步提高诊断价值，进而更好地预测喉癌患者颈部淋巴结转移。

综上所述，喉癌患者的血清NO、VEGF水平较高，且其在颈部淋巴结转移患者中的水平高于无颈部淋巴结转移的患者，两项指标联合检测对喉癌患者颈部淋巴结转移具有较好的预测价值。