高效液相色谱法测定食品中的非食用色素

刘文靖 宋华静

摘 要：目的：本文采用高效液相色谱法对豆制品中的酸性橙Ⅱ、碱性橙2及碱性嫩黄0残留同时展开测定。方法：经预处理、净化及萃取后的样品，采用高效液相色谱法进行检测。结果：经检测之后，得到酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O的检出限分别为0.01、0.02、0.01 mg/kg，相对标准偏差平均3.53%。结论：该方法检测速度快、准确率高，可用于食品中非食用色素的快速检测。

关键词：高效液相色谱法;食品;非食用色素;检测

目前，个别生产商为降低成本、保障食品外观诱人、色泽稳定，在生产食品时会违法添加非食用色素，此类非食用色素对人体存在潜在危害。因此，有必要建立一种可同时检测食品中多种非食用色素的方法。而高效液相色谱法在食品中非食用色素的测定中应用最广泛。采用该方法时，样品通过预处理、净化及萃取后，可直接快速检测，操作简便且准确度高，应用价值丰厚。

1 实验方法

1.1 仪器与试剂

1260TG-16WS色谱仪，DAD检测器;固相萃取装置;KQ-500DE型数控超声波清洗器。去离子水;甲醇、乙酸铵（均为色谱纯）;酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O标准品。Symmetry RC色谱柱，色谱柱温度40 ℃，检测波长500 nm。流动相A乙酸铵和四乙基溴化铵溶液，流动相B为甲醇采用梯度洗脱的方法。样品为市售豆制品。

1.2 样品预处理

烧杯内放置精密称取一定量粉碎均匀的豆制品样品，加入提取液20 mL，至于超声波下提取20 min后过滤，滤渣中加入提取液20 mL，反复多次后合并滤液，浓缩至10 mL，将pH调整为6，完成样品溶液的制备[1]。固相萃取柱依次采用甲醇、酸化甲醇溶液预淋洗，控制流速在5 mL/min，柱内液体高度控制在0.5 cm以上，待样品溶液加入之后流速控制在6 mL/min。以1∶1的比例加入丙酮和正己烷混合溶液5 mL，依次采用丙酮溶液、甲醇溶液各5 mL、3 mL洗涤萃取柱，随后用5 mL洗脱液（50 mL，1 mol/L的NaOH与500 mL甲醇配制）洗脱萃取柱，收集淋洗液，加水浓缩定容至2 mL，过滤，待测。

2 结果

2.1 色谱柱的选择

对比50 mm和100 mm的色谱柱对分离非食品色素的影响，得知两款色谱柱皆可分离分析物，但100 mm色谱柱分析时间较长，因此本试验选用的色谱分析柱为50 mm的色谱柱。

2.2 流速选择

该试验中，流速分别设置为0.2、0.3、0.5 mL/min与0.6 mL/min，對色素分离中不同流速的影响进行观察，得知0.2 mL/min时，分析时间较长，且分析效果不佳;超出0.5 mL/min时，分离不完全，故而本试验将流速设置为0.3 mL/min。

2.3 洗脱溶剂和洗脱体积优化

本试验中选择的洗脱溶剂有2种，通过对其洗脱效果的对比分析，得知氢氧化钠-甲醇、氨水-甲醇两种洗脱溶剂中，前者回收率较高，洗脱时控制在5 mL的用量，能够完全洗脱色素，故而本次试验中使用的洗脱溶剂及体积为氢氧化钠-甲醇溶液5 mL。

2.4 标准曲线和检出限

配制0.1～20 g/mL的标准溶液，进样测定，对峰面积（y）与质量浓度（x，g/mL）作图，即可获取酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O的线性方程，3者的线性方程分别为y=26 576x+653.19，R2=0.999 7;y=42 361x+538.92，R2=0.999 7;y=51 301x-2 851，R2=0.999 7。确定信噪比S/N为3，并以其对应的目标物浓度进行检出限的测定，酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O的检出限分别为0.01、0.02、0.01 mg/kg[2]。

2.5 回收率和精密度试验

取样品作标准添加试验，平行6次，表1显示了试验结果。

2.6 实际样品分析

采用该方法检测豆制品中非食用色素，未检出非食用色素。本方法简便快捷，检测效率高，实用性强。

3 讨论

采用高效液相色谱法对食品中酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O 3种非食用色素进行检测，操作简便、灵敏度高，且获取结果具备可靠性、准确性，可在短时间内定性、定量分析食品中的非食用色素含量，在检测食品样品中色素时值得推广应用。

参考文献

[1]韩晶.高效液相色谱法检测食品中常见非食用色素[J].食品安全导刊，2018（27）：100.

[2]邹孝，邹春艳，马丽，等.食品中违禁添加的非食用色素检测技术进展[J].科技与创新，2016（9）：101-102.