液相色谱法测定水产品中磺胺类代谢物含量的不确定度评定

李鸿超，彭家杰，罗健民，姚婉仪

(1 东莞市水产学会，广东 东莞 523002；2 东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523002)

兽用磺胺类(Sulfonamides)药物常添加到动物饲料中用来治疗疾病和促进生长,但不合理的用药会导致磺胺类药物在动物组织中残留[1],而这些药物残留往往能够直接或者间接地通过环境、 食物链等进入人体，并对人体产生毒副作用[2-3],当浓度累积超过一定量时将对人体健康产生危害。

为了确保检测结果的准确性，需进行测量不确定度的评定。测量不确定度用来表征被测量值在一定范围内的估计，是一种表征测量值分散性的评定方法，是测量结果可比性和可靠性的判定指标[4-5]。为保证磺胺类代谢物残留量检测结果的科学性，开展检测工作的实验室需根据相关认可技术规范要求进行不确定度评定。本实验依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[5]和CNAS-GL06 《化学分析中不确定度的评估指南》[6]等相关规定的基本方法和程序，对HPLC法测定水产品中磺胺类残留量的不确定度进行分析评定，找出主要来源，从而提高检测准确性。

1 实 验

1.1 测量仪器设备

Waters UPLC H-CLASS型超高效液相色谱仪,美国Waters公司；平行蒸发仪,瑞士BuChi；BS214 D分析天平,SARTORIUS、BT125D型电子天平,SARTORIUS；涡旋振荡器,德国IKA、T25匀浆机,德国IKA；Milli-Q型超纯水仪,美国Millipore；超声波清洗机,昆山市超声仪器有限公司;LXJ-IIB型离心机,上海安亭。

1.2 样品前处理方法

参考农业部958号公告-12-2007《水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱法》进行。

2 结果与讨论

2.1 建立数学模型

根据测量方法建立样品中硝基呋喃类代谢物残留量的数学模型如下：

(1)

以上各种因素都会对测量结果的不确定度产生影响，其最终合成不确定度的计算公式为：

(2)

2.2 分析确定不确定度来源

试样中磺胺类药物残留量测量不确定度来源主要有以下几个方面：测量重复性引入的不确定度；曲线校准引入不确定度；待测液体积定容引入的不确定度；样品称量引入的不确定度；外标标准溶液的配制引入的不确定度；提取回收率引入的不确定度；液相色谱仪校准引入的不确定度。

2.3 各分量不确定度计算

2.3.1 测量重复性引入的标准不确定度u1rel

测量样品重复性引起的不确定度分量，属A类标准不确定度，以算术平均值的标准偏差表示。对未知浓度样品进行6次重复测量，平均值的标准偏差Sa(μg/kg)及u1rel见表1。

表1 测定结果及其相对标准不确定度(n=6)

2.3.2 曲线校准引入的标准不确定度u2rel

表2 最小二乘法拟合标准溶液质量浓度-峰面积

表3 磺胺类标准溶液回归方程及相关系数

制备6个梯度混合标准溶液C，每个浓度测1次，以标准溶液浓度Cis为横坐标，以标准溶液峰面积比Ais为纵坐标，用最小二乘法拟合，获得直线方程A=a+b×c以及线性相关系数r，列于表2、表3。

本例对样品测定液测量1次(p=1)，将峰面积比A带入直线方程得样品浓度Ci，线性回归导致的的Ci标准不确定度

表4 曲线校准引入的标准不确定度

2.3.3 定容体积引入的标准不确定度u3rel

2.3.4 样品称量引入的标准不确定度u4rel

2.3.5 外标标准溶液配制引入的标准不确定度u5rel

2.3.5.1 标准物质纯度的标准不确定度u5rel

标准物质纯度的相对标准不确定度见表5。

表5 标准物质纯度的相对标准不确定度

续表5

SCP99.6320.0151SMZ97.8320.0153SMM94.2320.0159SDM99.0320.0152SIZ99.9320.0150SDM99.4320.0151SQX95.7320.0157

2.3.5.2 标准物质定容引入的不确定度u52rel

2.3.5.3 标准物质稀释引入的标准不确定度u53rel

用1000 μL可调移液器和10 mL容量瓶将标准储备液逐级稀释，使用2次1000 μL可调移液器及2次10 mL容量瓶，稀释过程中引入的不确定度如下：

由此可得，外标标准溶液的配制引入的标准不确定度如下：

2.3.6 提取回收率引入的标准不确定度u6rel

表6 样品加标回收的不确定度

2.3.7 液相色谱仪校准引入的标准不确定度u7rel

2.4 评定测量量之间的相互关系

测量量之间相互独立，没有任何相关性。

2.5 合成不确定度及检测结果表述

由上述所得数据代入公式(2)，合成不确定度结果如表7所示。

表7 合成标准不确定度

2.6 计算扩展不确定度

取包含因子k=2(95%置信概率)，其扩展不确定度表示，结果见表8。

表8 不确定度评定结果

3 结 论

通过以上不确定度评定分析得知，利用液相色谱法测定水产品中磺胺类代谢物含量的实验中，影响测量结果的不确定度主要来源于液相色谱仪的校准、标准曲线拟合校准和提取回收率，其他因素影响不大。实验过程中可通过优化标准系列工作溶液配置、控制提取回收率来保证检测结果的准确度。