206 例非典型地中海贫血HBB 基因测序发现多种非热点突变

陈一君，韦丽丽，唐兰艳

（广西壮族自治区生殖医院，广西 钦州 530021）

0 引言

地中海贫血又称珠蛋白生成障碍性贫血，非典型地中海贫血则是指患者病情表现与地中海贫血相似、但病理变化存在差异且缺乏普遍性的疾病症状。非典型地中海贫血对患者生活存在明显影响，亦可恶化引发其他疾病，临床主张给予对症治疗，这对疾病的诊疗技术提出了较高要求[1]。此前学者分析指出，常规基于热点突变进行分析研究，难以完全满足所有患者的治疗需要，针对基因进行的非热点突变评估，能够弥补常规诊疗技术的不足，提升工作效果，其典型方式之一为HBB 基因测序[2]。为获取可行的工作方法，了解非典型地中海贫血HBB 基因测序作用以及非热点突变的基本态势，选取我院收治的206 例非典型地中海贫血患者，进行研究如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。于我院2012 年1 月至2019 年1 月收治的非典型地中海贫血患者中，选取206 例作为对象，包括男104例，女102 例；年龄11-63 岁，平均（40.3±8.6）岁。研究经伦理委员会批准，患者和家属知情同意，签署知情同意书。纳入标准：患者临床符合《地中海贫血诊疗指南》（2012）中的疾病描述标准（红细胞体积不大于79 fl、红细胞蛋白浓度不小于300 g/L、红细胞血红蛋白含量不大于28 pg）。排除标准：患者合并其他血液系统疾病；患者合并出血性疾病；患者合并血液再生类疾病。

1.2 方法。取EDTA-K2 抗凝静脉血2 mL，借助PCR-反向斑点杂交法进行分析。去除特异性较高的患者，将检测结果中，HbA2 分布处于2.5%-3.5%之间的患者筛出，进行二次分析。取探针，点触硝酸纤维素膜，对所有探针进行编号，对待测血液样本进行PCR 特意性扩增，对生物素进行标记。使完成编号的探针与待测血液样本进行杂交。获取具有同源序列特点的样本，进行编号和记录。对未完成结合的血液样本进行洗涤处理，同步对上述所有样本进行液相显色分析，统计非热点突变的发生率和类别、占比[3]。

1.3 观察指标。借助PCR-反向斑点杂交法进行血红蛋白基因突变率统计，了解常见突变类型、占比情况。

2 结果

2.1 非热点突变患者数。HbA2 分布处于2.5%-3.5%之间的患者共92 例，占比44.66%（92/206）。HBB 基因测序见非热点突变27 例，占比29.35%（27/92），详见表1。

表1 非热点突变患者数[n（%）]

2.2 非热点突变类别和占比。非热点突变类别包括多个类型，占比也有所不同，见表2。

表2 非热点突变类别和占比[n（%）]

3 讨论

非典型地中海贫血一般纳入地中海贫血的分析范畴，患者病情相对特殊，因此治疗又需要强调针对性，对诊断和疾病分析能力提出了较高要求。此前学者研究发现，非典型地中海贫血基因热点突变总数相对较多，达到70%左右，非热点突变的发生率在30%左右[4]。我院研究结果与此相似，共27 例非典型地中海贫血患者符合非热点突变标准，占比29.35%。非热点突变类别方面，

我院研究中，因选例较少，共发现7 大类突变，第七类中又包括三个小类，均为1 例。其他非热点突变中，c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）占比较大，分别为25.93%、18.52%、18.52%。进一步对相关信息进行评估，可发现上述各类患者接受HBB 基因测序时，均可见不同程度的血糖蛋白异常，从病理变化的角度上看，非典型地中海贫血患者的基因是否出现突变，直接影响其珠蛋白链的分子结构，换言之，所有非典型地中海贫血患者均可见血红蛋白的异常[4]。

在HBB 基因测序中，可发现非典型地中海贫血患者自双目双方继承的α 珠蛋白基因均为2 个，其排列特点为αα/αα；β 珠蛋白基因均为1 个，其排列特点为β/β，上述任何珠蛋白基因出现突变，均可影响数目庞大的机体细胞连锁反应，导致部分蛋白链缺失问题，其中较为多见的为单方α 珠蛋白基因缺陷，其次为双方α 珠蛋白基因缺陷，单方β 珠蛋白基因缺陷、双方β 珠蛋白基因缺陷以及其他珠蛋白基因出现缺陷的可能性较低，具体表现为α 型、β 型、δβ 型和δ 型等等。接受HBB 基因测序的过程中，液相显色、气相显色均强调对基因排列缺陷的捕捉，每一类缺陷在基因层面均有不同呈现[5]。

因β 型珠蛋白基因缺陷导致的非典型地中海贫血患者，在HBB 基因测序中，可见c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）等非热点突变，提示在基因遗传过程中，父母双方或单方基因出现了较常规地中海贫血更复杂的变化，也可能与胎儿发育过程中母体因素的异常相关。上述病变往往可见分子层面的多样变化，且病理变化过程复杂多样，可能出现的不同突变态势超过100种，少数患者亦可因此出现基因完全缺失情况。部分患者见c.22G＞A（p.Glu8Lys）、c.75C＞G、c.50G＞A（p.Gly17Asp）和其他非热点突变，一般认为与α 珠蛋白生成障碍存在关联，大部分患者可见α 珠蛋白基因的缺陷，极少数患者可见α珠蛋白基因缺失，提示患者可能存在基因点突变情况[6]。

综上所述，非典型地中海贫血HBB 基因测序可发现非热点突变信息，类别较多且多与血红蛋白变异存在直接关联。后续工作中，可针对血红蛋白变异情况进行非典型地中海贫血病情分析，结合分析结果给予对症干预。