大肠杆菌对大鼠肠上皮细胞IEC-6LncRNA 表达的调控

张明昱 宋婉莹 赵鹏伟 李存保（通讯作者）

（1 内蒙古医科大学研究生学院 内蒙古 呼和浩特 010010）

（2 内蒙古医科大学基础医学院 内蒙古 呼和浩特 010010）

大肠杆菌引起的肠道炎症，在临床中最为常见[1-2]。LncRNA（长链非编码RNA，Long non-coding RNA）对细胞的生长，分化等诸多生理活动有调控作用[3-4]。本研究就大肠感染感染大鼠肠上皮细胞后LncRNA 发生的变化进行研究，旨在为进一步研究LncRNA在大肠杆菌感染大鼠肠上皮细胞后的调节机制奠定基础，为深入的临床应用提取条件。

1.实验材料

大鼠肠上皮细胞IEC-6 购自中科院上海细胞库，大肠杆菌ATCC8739 购自贝纳生物。

2.实验方法

2.1 MTT 检测最佳的细菌浓度

用0，101，102和103个/ml 的大肠杆菌作用于大鼠肠上皮细胞IEC-6 中并于第0，24，48 和72h 检测。在酶标仪490nm 波长处测定吸光度（OD）值，依照公式计算细胞增殖率，细胞生长率（%）=（OD 药物/OD 对照）×100%

2.2 大肠杆菌对大鼠肠上皮细胞LncRNA 表达影响的分析

用最佳浓度的细菌作用IEC-6 细胞后提取RNA，送测序公司进行分析。并对所得结果进行生物信息学的分析。

3.结果

3.1 最佳的大肠杆菌作用细胞的浓度

通过MTT 检测得到了如下结果。大肠杆菌能够抑制MFC 细胞的增殖，且呈剂量和时间依赖性。作用细胞时间72 小时，随细菌浓度的增加，对细胞增殖的抑制率也逐渐增加，但当细菌作用时间达到48 小时时细胞几乎全部死亡。在12h 时细胞的生长已经受到抑制，而且103个/ml 和104个/ml 的大肠杆菌对细胞抑制作用显著高于10 个/ml 和102个/ml 组，见表。

表 不同作用时间不同浓度大肠杆菌对MFC 细胞增殖的抑制率

3.2 大肠杆菌对大鼠肠上皮细胞LncRNA 表达影响的分析

提取大肠杆菌作用后的大鼠肠上皮细胞的RNA 后送测序公司进行分析。得到了6 个有可能参与此过程的RNA，见图1。

图1 大肠杆菌对大鼠肠上皮细胞LncRNA 表达影响的分析

4.讨论

肠炎主要是由细菌，病毒，寄生虫等相关病原微升物引起的，临床主要表现为腹痛，腹泻，便希并常带血。该病在夏季最为常见，上吐下泻是其主要症状[5-6]。LncRNA 其长度均大于200，且为非编码RNA，研究发现，LncRNA 对细胞周期，细胞分化等诸多的生命活动均有很好的调控作用[4]。本研究通过对大肠杆菌作用后的大鼠肠上皮细胞的RNA 后送测序公司进行分析。得到了6 个有可能参与此过程的RNA。为进一步的深入研究奠定基础。