血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10和hs-CRP水平与新生血管性青光眼的相关性

宋云霄， 黄晓峰， 张海晨， 姚天悦， 袁文华， 赵智赟

（1.上海市徐汇区中心医院检验科，上海 200031；2. 西藏日喀则市萨迦县卫生服务中心，西藏 日喀则 857800）

新生血管性青光眼（neovascularization glaucoma，NVG）是一种主要由视网膜静脉阻塞（retinal vein occlusion，RVO）和糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）等缺血性视网膜病变引起虹膜及房角表面产生新生血管，导致房水回流障碍的一种继发性青光眼[1]，具有破坏性强、致盲性高等特点，其发病率呈逐年递增趋势[2]。国内外许多研究显示，有多种细胞因子参与了NVG的发生、发展，细胞因子可调节眼内新生血管的产生和炎症免疫反应，相关细胞因子表达失衡可促进新生血管生成和炎症的浸润[3]。有研究结果显示，NVG患者血清和房水中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factoralpha，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8水平均高于对照组（P＜0.05），提示NVG患者体内IL水平异常，可能通过炎症免疫反应参与NVG患者新生血管的产生[4-5]。目前，关于IL水平与NVG患者严重程度关系的研究较少。为此，本研究拟探讨NVG患者血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、高敏C反应蛋白（high-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）水平与NVG患者眼部参数的相关性及其用于NVG诊断的价值，为临床早期预测、评估NVG病情和判断预后提供相关理论依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2014年1月—2018年12月至上海市徐汇区中心医院就诊并确诊为NVG的患者69例（NVG组），其中男40例、女29例，年龄（55.64±12.56）岁。所有患者都经过详细的眼科检查，包括裂隙灯、房角镜、眼底彩照、眼压（intraocular pressure，IOP） 、中央角膜厚度（central corneal thickness，CCT）、垂直杯盘比（vertical cup-disc ratio，VCDR）、眼轴长度（axial length，AL）、前房深度（anterior chamber depth，ACD）、平均视野缺损（visual field mean defect，MD）、平均视敏度（visual field mean sensitivity，MS）等，若患者双眼发病，则纳入急性大发作眼睛或病情较重的眼睛。将NVG患者根据病因分为DR继发性NVG组（37例）和RVO继发性NVG组（32例）。选取同期上海市徐汇区中心医院体检中心体检健康者39名（正常对照组），其中男24名、女15名，年龄（55.31±14.73）岁，初步眼科检查（IOP和VCDR）均正常。记录所有对象的体格检查资料，包括年龄、性别、身高、体质量、糖尿病史、高血压史、血压、胸部X光片、心电图、肝功能、肾功能、传染性疾病史等。2个组之间年龄、性别差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入标准和排除标准

1.2.1 NVG组 纳入标准[6-7]：（1）NVG患者均为住院患者；（2）急性或慢性IOP升高[IOP≥2.79 kPa（21 mmHg）]；（3）由视网膜血管疾病（RVO或DR）引起；（4）虹膜和/或房角有活跃的新生血管形成；（5）纳入的患者包括新诊断的和转诊的NVG患者；（6）年龄＞18周岁；（7）自愿加入本研究且知情同意。排除标准：（1）患有任何可能影响视力或视野的眼部疾病；（2）有眼部手术史；（3）患有系统性疾病，如急性传染病、代谢综合征、肾脏疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等。

1.2.2 正常对照组 纳入标准：（1）年龄＞18周岁；（2）肝、肾功能正常；（3）IOP＜2.79 kPa；（4）VCDR＜0.7；（5）自愿加入本研究且知情同意。排除标准：（1）患有任何可能影响视力或视野的眼部疾病；（2）有眼部手术史；（3）患有系统性疾病，如急性传染病、代谢综合征、肾脏疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等；（4）有青光眼家族史。

1.3 方法

采集所有对象静脉血4 mL，2 300×g离心10 min，分离血清，3 h内完成检测。样本均无脂血、溶血。采用IMMULITE1000全自动化学发光免疫分析仪（德国西门子公司）及配套试剂（化学发光法）、质控品检测血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10水平，批内、批间变异系数（coefficient of variation，CV）为4%～5%。采用BS-2000M全自动生化分析仪（深圳迈瑞公司）及配套试剂（免疫比浊法）、质控品检测血清hs-CRP水平，参考区间为0～3 mg/L，线性范围为0.2～320.0 mg/L，批内、批间CV为2%～3%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。采用K-S检验进行正态性分析。呈正态分布的数据以x±s表示，2个组之间比较采用t检验。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。呈非正态分布的数据以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间比较采用非参数秩和检验。采用Spearman相关分析评估各项指标与NVG患者眼部参数的相关性。采用二分类Logistic回归分析评估NVG发生的危险因素。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析各项指标诊断NVG的价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NVG组与正常对照组一般资料的比较

NVG组有糖尿病史的比例显著高于正常对照组（P＜0.001），高血压史比例、收缩压、舒张压、体质量指数（body mass index，BMI）2个组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 NVG组与正常对照组一般资料的比较

2.2 NVG组与正常对照组血清IL和hs-CRP水平的比较

NVG组血清IL-6、IL-8和hs-CRP水平显著高于正常对照组（P＜0.01、P＜0.001），血清IL-1、IL-2和IL-10水平2个组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 NVG组与正常对照组血清IL和hs-CRP水平的比较

2.3 DR继发性NVG组与RVO继发性NVG组血清IL和hs-CRP水平的比较

DR继发性NVG组与RVO继发性NVG组之间IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10和hs-CRP水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.4 NVG患者血清IL及hs-CRP水平与眼部参数的相关性

Spearman相关分析结果显示，NVG患者血清IL-6水平与MD水平呈正相关 （r=0.257，P＜0.001），与MS水平呈负相关（r=-0.196，P＜0.001），血清IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、hs-CRP水平与眼部参数均无相关性（P＞0.05）。见表4。

表3 DR继发性NVG组与RVO继发性NVG组血清IL和hs-CRP水平的比较

表4 血清IL及hs-CRP水平与眼部参数的相关性

2.5 NVG发病的危险因素分析

以IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、hs-CRP为自变量，以有无NVG（有=1，无=0）为应变量，建立二分类Logistic回归模型。对年龄、性别（男=1，女=2）、BMI、收缩压、舒张压、糖尿病（有=1，无=0）、高血压（有=1，无=0）进行校正。结果显示，IL-6[比值比（odds ratio，OR）=4.443，95%可信区间（confidence interval，CI）为1.207～16.40]、IL-8（OR=1.067，95%CI为1.001～1.237）、hs-CRP（OR=3.886，95%CI为1.191～12.683）是NVG发病的危险因素。见表5。

表5 NVG发病危险因素的二元Logistic回归分析

2.6 IL-6、IL-8、hs-CRP单项及三者联合检测诊断NVG的效能

ROC曲线分析结果显示，IL-6、IL-8、hs-CRP和三者联合检测诊断NVG的曲线下面积分别为0.773、0.873、0.760、0.902。联合检测的诊断效能优于单项检测。见表6、图1。

表6 IL-6、IL-8、hs-CRP单项及三者联合检测诊断NVG的ROC参数

图1 IL-6、IL-8、hs-CRP单项及三者联合检测诊断NVG的ROC曲线

3 讨论

NVG是一种主要累及脉络膜、视网膜的缺血性疾病，主要继发于RVO和DR 2种视网膜缺血性疾病，具体发病机制尚不明确。目前认为NVG的发病与长期眼内的慢性炎症环境密切相关，长期慢性炎症可导致视网膜循环障碍，引起缺血、缺氧，继而导致大量细胞因子释放，形成恶性循环[8]。因此，相关炎症因子与NVG的相关性值得被临床关注。

IL-6是一种调节免疫应答、炎症反应及造血过程的多功能细胞因子，主要由活化的T细胞、单核巨噬细胞及纤维母细胞分泌。IL-6的作用主要包括以下3个方面[9]：（1）诱使大量的中性粒细胞向微血管系统聚集，从而引起微血管管腔狭窄，导致组织缺血、缺氧；（2）刺激血管内皮细胞收缩，通透性增加，使相关物质进入组织液；（3）引起炎性细胞脱颗粒，释放贮存酶，进而引起组织损伤，导致血管的渗出、增生及新生血管的形成。侯艳宏等[10]的研究结果显示，NVG患者血浆IL-6水平明显高于原发性开角型青光眼患者和年龄相关性白内障患者（P＜0.05）。凌佼佼等[11]的研究结果显示，NVG组外周血IL-6水平显著高于正常对照组（P＜0.05）。本研究结果显示，NVG组血清IL-6水平显著高于正常对照组（P＜0.01），与文献报道[10-11]一致。CHEN等[12]的研究结果显示，中央静脉阻塞继发性NVG患者房水IL-6水平显著升高（P＜0.001），提示IL-6及其他新生血管因子共同参与了NVG患者虹膜新生血管的生成。白玉星等[13]的研究结果显示，NVG患者血清及房水IL-6水平均明显高于对照组（P＜0.05）。本研究结果显示，NVG患者血清IL-6水平与MD呈正相关（r=0.257，P＜0.001），且IL-6是NVG发病的危险因素（OR=4.443，95%CI为1.207～16.40）。因此，IL-6在NVG新生血管及疾病进展中有一定作用。

IL-8属于趋化因子家族成员，与肿瘤的转移及血管形成密切相关[14]。有研究结果显示，IL-8在内皮细胞实验、动物实验和肿瘤细胞实验中可诱导、促进新生血管的形成[15-17]。阿依努尔·艾买尔等[1]的研究结果显示，NVG患者血清和房水中的IL-8水平明显高于原发性开角型青光眼组和白内障组（P＜0.05）。还有研究结果显示，急性和慢性闭角型青光眼患者房水IL-8水平显著高于白内障组（P＜0.0167），但原发性开角型青光眼患者与白内障患者之间房水IL-8水平差异无统计学意义（P＞0.05）[18-19]。李臻等[20]的研究结果显示，息肉状脉络膜血管病变患者房水中的IL-8 mRNA表达升高，与最佳矫正视力（最小分辨视角的对数）呈正相关（r=0.438，P＜0.01）。本研究结果显示，NVG患者IL-8水平显著高于正常对照组（P＜0.001），且 IL-8是NVG发病的危险因素（OR=1.067，95%CI为1.001～1.237）。由此可见，IL-8参与了NVG的发生，且与病程进展有关。但到目前为止，IL-8水平与NVG关系的研究仍较少，IL-8在NVG发病中的作用机制还有待进一步研究。

hs-CRP主要用于感染性疾病的诊断，可以反映机体的免疫功能和炎症水平。本研究结果显示，NVG组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组（P=0.009），且hs-CRP是NVG发病的危险因素（OR=3.886，95%CI为1.191～12.683）。由此可见，hs-CRP可与IL-6、IL-8相互作用，引起炎性细胞浸润，从而释放一系列促血管生成因子，加速新生血管的生成。

ROC曲线分析结果显示，IL-6、IL-8和hs-CRP诊断NVG的曲线下面积分别为0.773、0.873、0.760，最佳临界值分别为2.55 pg/mL、12.5 pg/mL、0.375 mg/L，敏感性分别为65.57%、85.25%、98.36%，特异性分别为87.18%、80.49%、92.31%。因此，IL-6、IL-8、hs-CRP对NVG均具有一定的诊断价值。3项指标联合检测诊断NVG的曲线下面积为0.902，敏感性为80.33%，特异性为92.31%，其诊断效能优于各项指标的单项检测。

目前，有关NVG的研究较少，且大多数研究的样本量均较小，本研究的样本量同样也较小。因此，本研究的结论仍需前瞻性、大样本的队列研究进行进一步验证。

综上所述，IL-6、IL-8和hs-CRP对NVG均有一定的辅助诊断价值，可能与NVG的发生、发展有一定关系。