液相色谱- 串联质谱法快速测定食用油中的苯并(a)芘

郭芳芳 高宏 朱成晶（江苏省理化测试中心，江苏 南京210000）

目前，食用油脂中苯并(a)芘的分析方法主要有免疫学法、表面增强拉曼光谱、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等。由于食用油成分复杂，其中苯并(a)芘含量又较低，存在着大量的干扰物质，因此灵敏度高，抗干扰强的检测方法是必要的。GC-MS 法由于灵敏度不高，热稳定性较差，在很多时候使用受到了限制。高效液相色谱法定性能力不够；表面增强拉曼光谱还不够成熟，应用较少，定量分析时还不够准确；免疫学检测灵敏度不高；LC-MS/MS法却能同时提高灵敏度和提升定性能力，目前运用LC-MS/MS测定食用油脂中苯并(a)芘鲜有报道。

文章是针对食用油中苯并(a)芘快速检测的应用研究，可用于批量样品的高通量筛查，提高工作效率，也可用于突发食品中毒分析，这些对保护人类健康具有重要的意义。本文建立的这种液相色谱-串联质谱法测定食用油脂中苯并(a)芘的方法，快速，简便，高效，定量准确。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent-1260-6430液质联用仪。

石油醚，南京化学试剂股份有限公司；乙腈，德国默克有限公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：C18 50×2.1mm 1.8um 柱温：40℃流动相：乙腈/水＝80/20 流速：0.6ml/min 进样量：20uL

1.3 标准溶液的配制

苯并(a)芘标准储备溶液的制备：准确移取1mL 100μg/mL苯并(a)芘标准品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度线，-20℃保存备用。苯并(a)芘-D12 标准储备溶液的制备：准确移取1mL 100μg/mL 苯并(a)芘-D12 标准品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度线，-20℃保存备用。

标准工作液的配制：将上述苯并(a)芘标准储备溶液逐级稀释成浓度为0.5ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL 的系列标准工作溶液，内标苯并(a)芘-D12溶液逐级稀释为浓度均为5.0 ng/mL。

1.4 样品的处理

称取约0.5g 样品，加入10 mL 石油醚提取，超声提取5min，再旋涡振荡提取15min。离心，取上清。上清液全部转移到经活化了的固相萃取柱中，经乙腈洗脱，浓缩至近干，再用乙腈定容至1.0mL，经0.45μm有机滤膜过滤，滤液上机分析测试。

1.5 样品的测定

按照上述色谱条件进样20μL，以保留时间定性，内标法峰面积定量。

2 结果与讨论

2.1 质谱条件的母离子、子离子获得

采用大气压化学电离法进行母离子扫描和子离子扫描，获得苯并(a)芘母离子253，子离子250，224，200。苯并(a)芘-D12母离子265，子离子259，见图1。

图1 苯并(a)芘与苯并(a)芘-D12的子离子

2.2 裂解电压（Fragmentor）优化

根据母离子扫描，得到裂解电压在135左右，响应最强。因此选择裂解电压为120，125，130，135，140，145进一步分析。结果发现苯并(a)芘子离子200 与224 最优Fragmentor 为135，250最优Fragmentor为130，苯并(a)芘-D12子离子259最优Fragmentor为145。

2.3 碰撞能量（Collision Energy）优化

子离子扫描显示，碰撞能量在70左右响应最强。因此选择碰撞能量为60，70，80，90，100五个能量优化，结果表明，苯并(a)芘子离子200 与224 最优碰撞能量为90，250 最优碰撞能量为70，苯并(a)芘-D12子离子259最优碰撞能量为80。

2.4 驻留时间（Dwell）优化

驻留时间长短影响灵敏度，如果驻留时间太短，一段时间通过质量分析仪到达检测器的粒子数太少，不能忠实再现原始峰形，且响应太小，驻留时间太长，影响峰形。结合循环时间，选择80ms，100ms，120ms，200ms 四个驻留时间进行优化，结果表明，驻留时间100ms最合适，见图2。

图2 驻留时间优化图谱

2.5 实际样品分析

实际选择6批次植物油测定，大豆油，花生油，芝麻油，调和油，菜籽油，葵花籽油，苯并(a)芘均有检出，含量在0.4μg/kg～2.0μg/kg，均未超出限值。可能是因为在油料生产过程，要先把油籽加热炒香，炒制的过程中如果温度控制不均匀，很容易有局部过热，从而产生苯并(a)芘。

3 结语

建立的液相色谱-串联质谱法测定食用油中的苯并(a)芘，采用大气压化学电离，内标法定量，进样快，采集时间短，方法线性良好，简便，获得了较好的分离效果和较高的灵敏度，此方法可用于食用油中苯并(a)芘的快速测定，同时也为其他食品中苯并(a)芘的测定提供参考。