乙肝肝硬化患者血清中TNF-α、IL-1β的含量与肝纤维化程度的相关性分析

冼观秀，陈 聪，马燕妮，卜丹霞，黄树通

湛江中心人民医院，广东 湛江 324000

乙肝是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染所致的传染病，在全球范围内广泛流行，我国属于HBV感染流行较为严重的地区，有约9 300万人为慢性HBV感染者，其中约3 000万人被确诊为慢性乙型肝炎（CHB），其中有10%～20%可进一步发展为肝硬化、肝癌等严重疾病，对人类生命健康构成严重威胁［1］。肝纤维化是肝硬化发生发展过程的必经阶段，其发生机制是一个比较复杂的病理过程，它与胶原和其他细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的合成与降解失衡，导致在肝内过量沉积有关［2］。肝活组织病理学检查是诊断肝纤维化的金标准，但该检查属于有创性检查，不易在临床上开展，且随着近年来对肝纤维化研究的深入，发现许多细胞因子参与了肝纤维化的过程，因此细胞因子成为临床医生们研究的热点。另外有大量研究表明血清中透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）和层黏蛋白（LN）均可在一定程度反映患者肝细胞损害和肝纤维化程度［3］。因此本研究通过比较乙肝肝硬化患者与CHB患者血清中TNF-α、IL-1β的含量差异，分析它们与肝纤维化指标的相关性，为防止CHB进一步发展为肝硬化提供相关线索。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年12月湛江中心人民医院传染病和肝胆科收治的45例乙肝肝硬化患者作为研究组，并选取同期45例慢性乙型肝炎患者作为对照组。根据2015年中华医学会第十七次全国病毒性肝炎及肝病学术会议上发布的《慢性乙型肝炎防治指南》（2015年版）中关于肝硬化和CHB的诊断标准进行诊断［4］，排除标准：（1）合并其他肝炎病毒感染患者；（2）伴有其他类型肝脏疾病者；（3）伴有食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病、肝肾综合征等严重并发症者；（4）由其他原因如肝肾综合征、酒精性肝炎等引起的肝硬化患者。两组患者的年龄、性别等一般资料均具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准通过，且所有患者均已签署知情同意书。

1.2 方法

抽取患者静脉血5 ml，将血液标本于常温静置1 h、3 500r/min离心15 min后，分离抽取上清液，-20℃保存待测。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中TNF-α、IL-1β含量，采用荧光免疫法检测血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量，所有操作均严格按试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法

数据采用SPSS 20.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson线性相关分析法，多因素分析采用非条件logistic回归分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纤维化指标情况

研究组患者血清中TNF-α、IL-1β的含量明显高于对照组，肝纤维化指标HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN也均明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.01），见表1。

2.2 患者血清中TNF-α、IL-1β含量与肝纤维化指标的相关性

Pearson相关分析结果显示，患者血清中TNF-α、IL-1β与肝纤维化指标（HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN）均呈直线正相关关系，差异均具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 两组患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纤维化指标情况（±s）

表1 两组患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纤维化指标情况（±s）

组别研究组（n=45）对照组（n=45）肝纤维化指标tP TNF-α（pg/ml）68.86±13.83 33.42±10.10 13.88＜0.01 IL-1β（pg/ml）17.87±3.86 7.61±3.15 13.81＜0.01 HA（μg/L）556.92±91.25 301.38±72.34 14.72＜0.01 PC-Ⅲ（μg/L）254.56±45.32 187.52±25.63 8.64＜0.01Ⅳ-C（μg/L）165.87±23.58 103.53±19.85 13.57＜0.01 LN（μg/L）220.94±42.18 164.58±33.65 7.01＜0.01

表2 两组患者血清中TNF-α、IL-1β含量与肝纤维化指标的相关性

2.3 CHB患者发生肝硬化有关因素的非条件logistic回归分析

以是否发生肝硬化为因变量，以血清中TNF-α、IL-1β、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN为自变量，行非条件logistic回归分析结果显示，血清中TNF-α、IL-1β、Ⅳ-C和LN是CHB患者发生肝硬化的影响因素（P＜0.05），见表3。

表3 CHB患者发生肝硬化有关因素的非条件logistic回归分析

3 讨论

CHB是由HBV持续感染引起的慢性肝脏炎症性疾病。大量研究表明，HBV其实并不直接杀伤肝细胞，而是通过免疫应答反应对肝脏起作用，机体感染HBV后可使肝脏内淋巴细胞增加、浸润，产生大量的细胞因子及炎性递质，这些物质虽然可在一定程度帮助机体消灭该病毒，但同时又可造成机体自身肝细胞的变性和坏死，通过长期、反复的作用，导致肝叶内出现纤维隔、再生结节，进而使肝脏发生纤维化，若不加以控制，最终可导致肝硬化和（或）肝细胞癌［5］。CHB患者发生肝纤维化的过程，涉及许多不同水平的调节，其主要病理特征是以胶原蛋白为主的ECM在窦周间隙的大量增生与异常沉积，而HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN是ECM的主要成分［6］。在正常情况下，机体的HA是由星状细胞合成并通过血液循环到达肝脏，然后最终降解于在血窦内皮细胞内，但是若肝脏发生损伤，可使HA到达肝脏的数量增加且降解降低，造成其大量沉积于肝脏内。而LN在正常肝组织中含量极少，主要分布于肝胆管、血管壁及淋巴管壁等，是基底膜的重要成分，若肝脏发生损伤，LN与IV-C合成将增加并共同构成肝基底膜而形成纤维间隔，是肝纤维化的发生和早期肝硬化的诊断重要指标［7］。而PC-Ⅲ是Ⅲ型胶原的前体，也是由肝星状细胞合成的，在肝纤维化早期PC-Ⅲ水平即开始升高。大量研究表明，乙型肝炎患者血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量均可升高，且随着病情加重其血清中含量升高得更明显，可反映机体肝纤维化程度［8-9］。本研究结果显示，乙肝肝硬化患者血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量明显高于CHB患者，同样也证实HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN可作为反映肝硬化程度的良好指标。

ECM的产生受炎症因子等在内的多种因素的影响，这些因素可促进肝纤维化的形成与发展，而炎症反复存在也是CHB患者进展为肝硬化甚至HCC的重要因素［10］。TNF-α是主要由淋巴细胞、单核巨噬细胞合成及分泌的一种分子量为17KD的多肽细胞因子，它可使肝星状细胞及纤维母细胞增殖加快，并可促进胶原的合成以及肝纤维化的发生，另外它还能够刺激内毒素诱导IL-6、IL-8等炎症因子的生成，进而介导肝细胞炎性反应，造成肝组织微血管损伤，纤维蛋白量增加，肝细胞坏死，可导致CHB患者肝纤维化程度进行性加重并可促使其发展为肝硬化［11］。而IL－1β可以通过自分泌或旁分泌方式持续活化肝星状细胞和枯否细胞，而活化的肝星状细胞和枯否细胞又可反过来刺激单核/巨噬细胞分泌IL－1β，导致IL-1β在体内水平不断增加，这种双向反馈机制可使肝内ECM的产生大量增加，加重肝脏炎症及纤维化程度［12］。本研究结果显示，乙肝肝硬化患者血清中TNF-α、IL-1β均明显高于CHB患者，且所有患者血清中TNF-α、IL-1β含量与各项肝纤维化指标均呈正相关关系，说明血清中TNF-α、IL-1β与肝纤维化程度有着紧密联系。另外非条件logistic回归分析结果也显示，TNF-α、IL-1β、LN与IV-C是CHB患者发生肝硬化的影响因素。

综上所述，与CHB患者相比，乙肝肝硬化患者血清中TNF-α，IL-1β以及肝纤维化指标含量均明显升高，TNF-α，IL-1β与肝纤维化指标呈正相关关系，是CHB患者发生肝硬化的影响因素，寻找有效的拮抗TNF-α和IL-1β的途径，有助于防止CHB进一步纤维化而导致肝硬化的发生。