重症肌无力患者血清学标志物检测及临床意义

令狐永会

云南省文山州中医医院检验科，云南文山 663000

重症肌无力的发病机制主要是由于人体神经以及肌肉接头处出现的传递障碍导致的，受到抗乙酰胆碱受体抗体介导的细胞免疫依赖性影响，属于一种自身免疫性疾病[1]。患者在患病之后明显感到肌肉无力，特别是在运动以后，病情发展会影响到患者神经以及肌肉接头突触后膜ACh R[2]。经过临床的相关研究表明，血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体是影响重症肌无力疾病的重要因素，所以需要在临床上进行检测，这样也有利于重症肌无力疾病的诊断[3]。该次研究就针对2017—2018年期间收治的40例重症肌无力患者以及40名健康体检患者的血清学标志物检测及临床意义进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该次研究的研究对象全部是患有重症肌无力患者以及健康体检者。前者为观察组，人数为40例，后者为对照组，人数为40名。所有患者都进行酶联免疫吸附试验。其中重症肌无力的纳入标准为：①疾病患者具有肌肉无力的症状，并且在运动之后肌无力情况加重；②人体内部的血清抗AChR抗体滴度升高。排除标准为：①合并其他重要脏器疾病以及处于妊娠期的妇女；②不配合该次研究的患者。其中观察组的男性为17例，女性名为23例，年龄范围在 18～87 岁之间，中位年龄为（55.52±1.34）岁，对照组的男性名为16名，女性名为24名，年龄范围在17～86岁之间，中位年龄为（55.42±1.32）岁，比较以上资料发现差异无统计学意义（P＞0.05），该次研究已经经过伦理委员会批准，所有患者家属知情同意。

1.2 方法

首先对所有参与该次研究的患者进行标本采集，护理人员要通知所有患者在规定的时间进行空腹静脉血4 mL抽取，并且将所有采集标本进行离心处理，处理之后将血清放在4℃的环境内保存，同时进行血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗连接素抗体和抗Ryanodine受体抗体的检测。首先进行血清抗乙酰胆碱受体抗体检测，采取的检测方式为酶联免疫吸附试验，并且采用ELISA方法向已经保存备用的血清稀释30倍之后进行血清去除，将其放在37℃的水域中进行甩板去除，持续时间为90 min。随后再放入pH值为7.4的0.2 mol/L磷酸盐缓冲液进行清洗，清洗次数为4次，保证将一些非特异性结合的物质进行清除。随后再加入氧化物酶标记的山羊抗人Ig G 100 μL进行水浴，水温度保持在37℃，持续60 min，再放入pH值为7.4的0.2 mol/L磷酸盐缓冲液进行清洗，清洗次数为4次，随后再加入100 μL三甲氧基苯甲醛显色物进行显色，时间为15 min[4]。抗连接素抗体和抗Ryanodine受体抗体最后通过0.50 mmol/L硫酸溶液终止反应，在采用波长为450 nm进行光密度值的测试。其次再进行相关结果的判断，对所有进行检验的患者进行在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率的判断，保证血清抗乙酰胆碱受体抗体的水平在0.469以上为阳性[5]。另外在进行抗Titin抗体检测的过程当中首先使用ELISA方法将所有患者的血液标本进行血清稀释10倍，并且和血清抗乙酰胆碱受体抗体检测方式一致。随后进行结果判断，当抗Titin抗体的水平在0.343以上为阳性。最后进行抗Ryanodine受体抗体的检测，使用ELISA试剂进行检测，将血液标本进行血清稀释10倍，并且对抗Ryanodine受体抗体进行检测，最后进行结果判断，当抗Ryanodine受体抗体水平＞0.25的时候呈阳性[6]。

1.3 观察指标

观察两组患者的血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率情况，而且还要观察观察组中早发型和晚发型两种类型患者在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗连接素抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率。

1.4 统计方法

将有关数据全部输入到SPSS 17.0统计学软件，资料以（）表示，进行 t检验，计数应用（%）表示，行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同抗体的阳性率比较

观察组在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率要高于对照组，见表1。

表1 两组不同抗体的阳性率比较[n(%)]Table 1 Comparison of the positive rates of different antibodies in the two groups[n(%)]

2.2 早发型和晚发型在不同抗体中的阳性率比较

观察组中早发型重症肌无力患者为20例，晚发型重症肌无力患者为20例，两种类型疾病患者在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率有一定的差异，早发型疾病的阳性率要低于晚发型，见表2。

表2 早发型和晚发型在不同抗体中的阳性率比较[n(%)]Table 2 Comparison of positive rates of early and late hairstyles in different antibodies[n(%)]

3 讨论

经过大量的临床研究表明，重症肌无力疾病的主要发病机制比较复杂，被人们所接受的发病机制主要是由于人体神经肌肉接头处突触后膜的烟碱型乙酰胆碱受体出现下调情况所导致的重症肌无力。血清抗乙酰胆碱受体抗体是重症肌无力疾病最主要的抗体之一，该种抗体能够和人体的神经以及肌肉接头处突触后膜乙酰胆碱受体进行特异性结合，进一步加快了乙酰胆碱受体的内化作用同时通过乙酰胆碱受体的不断降解，能够进一步加强乙酰胆碱受体的破坏性，从而导致人体内部的乙酰胆碱受体数量大大减少，对于人体内部各种信号的传递产生了阻碍作用，这就是重症肌无力的主要发病原因[7]。根据相关研究报道表明，在患有胸腺瘤的重症肌无力患者中出现血清乙酰胆碱受体抗体阳性率为80%，那不具有胸腺瘤的重症肌无力患者在血清乙酰胆碱受体抗体阳性率方面仅有36.8%，具有全身性重症肌无力的患者在血清乙酰胆碱受体抗体阳性率方面有85%，具有眼肌型重症肌无力患者的血清乙酰胆碱受体抗体为50%。另外该次研究所检测的Titin主要是一种丝状型的蛋白，一般都存在于脊椎动物的骨骼肌中，经过生理学研究发现Titin对于进一步控制肌肉结构组成、稳定肌肉纤维以及为积极提供弹性的作用具有较大的意义，所以如果人体内Titin功能出现障碍，对于肌肉正常收缩情况也会产生巨大的影响。抗Titin抗体的主要生理学机制就是能够通过进一步加强肌肉纤维的激活速度，从而对骨骼肌正常结构产生破坏。抗Ryanodine受体抗体主要存在于基质网中维持钙离子释放的通道，对于人体的纤维膜基质往往会产生一种连接的作用，另外通过该抗体还能够进一步对Ryanodine受体以及二氢吡啶受体进行促进和作用，经过相关研究结果表明，Ryanodine受体以及二氢吡啶受体二者能够在兴奋收缩耦联中相互作用，进一步加强抗Ryanodine受体抗体自身的钙离子以及通道的开放性和释放程度。

在该次研究中，观察组在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率分别为80.0%、70.0%、77.5%，对照组在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率分别为12.5%、7.5%、5.0%，观察组的阳性率要显著高于对照组。根据不同类型的观察组疾病可以分成早发型和晚发型两种，比较早发型和晚发型两种类型患者在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率，发现早发型重症肌无力患者在血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体方面的阳性率分别为40%、45%、50%，要低于晚发型重症肌无力患者（60%、55%、60%）。在张晨红等[8]的研究中，其研究结果为重症肌无力患者血清抗AChR抗体、抗Titin抗体和抗RyR抗体阳性率分别为68.13%(124/182)、64.29%(117/182)和 67.03%(122/182),高于 OND 组(均 P=0.000)和对照组(均P=0.000);3种血清学标志物同时阳性,诊断重症肌无力的灵敏度为41.21%,特异度达99.40%。

综上所述，对重症肌无力患者进行血清抗乙酰胆碱受体抗体、抗Titin抗体和抗Ryanodine受体抗体进行检测对于疾病的辅助诊断有着重要的意义，能够有效提高重症肌无力疾病的诊断效果，也有利于患者进行进一步的临床治疗。