非小细胞肺癌患者血清中MASP-2检测的临床价值

马尚 尹颜军 张鑫桐 白万秋 荣长利 时广利

肺癌严重威胁着人类的健康，是目前全世界最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率排在各种癌症的第一位[1]。肺癌中大约75%为非小细胞肺癌(NSCLC)，肺癌患者的5年生存率比较低(15～20%左右)，主要原因是患者确诊时大多为晚期肺癌，而早期肺癌患者的5年生存率大大提高(约40%)[2]。因此，早期发现和早期治疗对于提高肺癌患者的生存率至关重要。人甘露糖醇结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)-2于肝脏中合成分泌，是补体系统凝集素激活途径的关键酶，参与机体的免疫应答，在机体的免疫调节和免疫监视中发挥着重要作用[3]。有研究表明，MASP-2与肿瘤的发生、发展密切相关，MASP-2可能通过促进增殖而引起肿瘤细胞的侵袭和转移[4-5]。细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)做为一种肺癌相关肿瘤标志物，目前已经广泛应用于临床。本文主要通过检测NSCLC患者血清中MASP-2和Cyfra21-1的浓度水平，并与目前临床上常规检测指标癌胚抗原(CEA)进行比较，探讨联合检测血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC辅助诊断和早期诊断中的临床应用价值。

资料与方法

一、 一般资料

病例组为2017年8月至2018年8月首都医科大学附属北京胸科医院收治确诊的NSCLC患者139例，年龄41～75岁，男性82例、女性57例；其中腺癌96例，鳞癌43例。所有NSCLC患者为初次就诊，并经过病理学确诊为NSCLC，以往未做过任何手术、化疗或放疗。肺部良性疾病组46例(男性24例、女性22例)，包括肺炎患者15例、肺结核患者18例和肺部良性结节患者13例。健康人组61名(男性29名、女性32名)来自北京胸科医院体检正常的人员，血脂、肝肾功能、血常规等指标正常，并且无糖尿病和高血压病史等。

二、 标本采集

采集NSCLC患者、肺部良性疾病患者和健康人空腹静脉血(非抗凝)标本3mL，在2 h内经4000 r·min-1离心后分离出血清，然后将血清标本-80℃冷冻保存，集中进行MASP-2的检测。此研究经首都医科大学附属北京胸科医院伦理委员会审批通过(批件号：2016-01)。

三、研究方法

MASP-2的检测采用丹麦HycultBiorech公司生产的人类MASP-2酶联免疫吸附法定量检测试剂盒，应用进口酶标仪(型号:Multiskan)进行吸光度值的测定，MASP-2的临界参考值为60 ng/mL；Cyfra21-1和CEA的检测应用上海透景生物技术公司生产的全自动流式荧光免疫分析仪完成(型号：TESMI)，Cyfra21-1的临界参考值为4 ng/mL，CEA的临界参考值为5 ng/mL。所有标本的MASP-2、Cyfra21-1和CEA检测严格按照试剂盒说明书和仪器规范操作程序进行。

四、 统计学处理

统计学分析采用SPSS软件进行,对所有数据进行正态性分布检验，非正态性分布数据采用中位数(M)和四分位数间距(QR)表示；非正态性分布数据采用秩和Mann-Whitney检验, 多组之间两两比较采用P值修正的方法,即只有P<0.05/K=0.05/3=0.0167才能认为差异有统计学意义；组间灵敏度的比较采用χ2检验；P<0.05时具有统计学差异。

结 果

一、 血清MASP-2和Cyfra21-1的检测结果

NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平明显高于肺部良性疾病组和正常健康人组，差异具有统计学意义(Z=2.942，P<0.01)；肺部良性疾病组血清中MASP-2和Cyfra21-1的浓度水平与正常健康人组比较无明显差异(Z=0.573，P>0.05)，Cyfra21-1的浓度水平明显高于肺部良性疾病组和正常健康人组(Z=6.798，P<0.001)。NSCLC经病理分型后，血清MASP-2在鳞癌和腺癌中的浓度水平无明显差异(Z=0.407，P>0.05)，Cyfra21-1在鳞癌中的浓度水平显著高于腺癌，差异具有统计学意义(Z=2.689，P<0.05)。NSCLC经TNM分期后，MASP-2在Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期+Ⅳ期中的浓度水平无明显差异(Z=0.857，P>0.05)；Cyfra21-1在Ⅲ期+Ⅳ期中的浓度水平显著高于Ⅰ期+Ⅱ期，差异具有统计学意义(Z=2.986，P<0.05)(见表1)。

表1 血清MASP-2和Cyfra21-1的浓度水平M(QR)

注：NSCLC与良性疾病、健康人比较，MASP-2:Z=2.942，aP=0.003；Cyfra21-1:Z=6.798，bP=0.000；腺癌与鳞癌比较，MASP-2：Z=0.407，cP=0.684；Cyfra21-1：Z=2.689，dP=0.014；Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较，MASP-2：Z=0.857，eP=0.392；Cyfra21-1：Z=2.986，fP=0.008

二、血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中检测的灵敏度和特异度

血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC中检测的灵敏度分别为47.5%和48.2%，略高于CEA的灵敏度44.6%，差异无统计学意义(χ2=0.362,P>0.05)。血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中检测的特异度分别为88.8%、89.8%和90.2%，差异无统计学意义(χ2=0.203,P>0.05)。MASP-2和Cyfra21-1联合对NSCLC检测的灵敏度明显提高，达到了64.0%，特异度略有下降(为86.0%)；MASP-2和Cyfra21-1联合检测的灵敏度与单项MASP-2、Cyfra21-1比较，差异具有统计学意义(χ2=7.714,P<0.01),特异度比较无统计学意义(χ2=0.381,P>0.05)。灵敏度计算方法为：病例组阳性例数/病例组总例数；特异度计算方法为：对照组阴性例数/对照组总例数(见表2)。

表2 MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中的灵敏度、特异度

注：MASP-2、Cyfra21-1、CEA之间比较，灵敏度：χ2=0.362，aP=0.631；特异度：χ2=0.203，bP=0.822；MASP-2+Cyfra21-1与单项比较，灵敏度：χ2=7.714，cP=0.005；特异度：χ2=0.381，dP=0.537

三、血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在不同NSCLC中的灵敏度

血清MASP-2在鳞癌和腺癌中检测的灵敏度无统计学意义(χ2=0.166,P>0.05)；Cyfra21-1在鳞癌中检测的灵敏度显著高于腺癌，差异具有统计学意义(χ2=5.308,P<0.05)；CEA在腺癌中检测的灵敏度显著高于鳞癌，差异具有统计学意义(χ2=5.205,P<0.05)。血清MASP-2在晚期NSCLC(Ⅲ期+Ⅳ期)中的灵敏度高于早期NSCLC(Ⅰ期+Ⅱ期)，但差异无统计学意义(χ2=1.668,P>0.05)；血清Cyfra21-1在晚期NSCLC中检测的灵敏度显著高于早期NSCLC，差异具有统计学意义(χ2=26.24,P<0.001)；血清CEA在晚期NSCLC中检测的灵敏度显著高于早期NSCLC，差异具有统计学意义(χ2=24.72,P<0.001)；血清MASP-2在Ⅰ期+Ⅱ期NSCLC中检测的灵敏度显著高于Cyfra21-1和CEA，差异具有统计学意义(χ2=6.212,P<0.05)(见表3)。

讨 论

由于早期肺癌(Ⅰ期和Ⅱ期)患者发病时症状不明显，因此肺癌患者确诊时大多数已属于中晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)，造成肺癌的死亡率比较高，全世界每年大概有130万人死于肺癌[6]。目前肺癌患者的早期筛查主要依靠肺部低剂量螺旋CT的手段，但是胸部CT对于一些肺部结节的诊断仍有一定的困难[7]。目前，肿瘤标志物已经广泛应用于临床，肿瘤标志物是由肿瘤细胞分泌进入到人的血液或体液中的物质，在一定程度上能够反映肿瘤的病理过程[8]。目前临床上常用的与肺癌有关的肿瘤标志物主要有细胞角蛋白(Cyfra21-1)、癌胚抗原(CEA)和鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)等，用于NSCLC的辅助诊断和疗效监测。但是这些肺癌相关肿瘤标志物在早期NSCLC中的灵敏度比较低，只有10～20%[9]。因此，为了早期诊断肺癌患者以及提高患者的生存率，发现灵敏度和特异度都比较理想的肺癌肿瘤标志物对于临床具有重要的价值。

表3 血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在不同NSCLC中的灵敏度(%)

注：腺癌与鳞癌比较，MASP-2：χ2=0.166，aP=0.716；Cyfra21-1：χ2=5.308，bP=0.021；CEA：χ2=5.205，cP=0.027；Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较，MASP-2：χ2=1.668，dP=0.197；Cyfra21-1：χ2=26.24，eP=0.000；CEA：χ2=24.72，fP=0.000；MASP-2与Cyfra21-1、CEA比较，χ2=6.212，gP=0.024

MASP-2是由686个氨基酸组成一种蛋白质，MASP2编码基因位于1p36.3-36.2染色体上，包含12个外显子[10]。 MASP主要有四类(MASP-1、MASP-2、MASP-3和sMAP)，其中MASP-2是补体系统凝集素激活途径中的关键因素，能够直接激活补体级联反应。补体系统是先天性的重要固有免疫，是机体防御病原体侵害的第一道系统。在机体免疫防御过程中，MASP-2激活补体后开始启动吞噬细胞和清除抗原的功能，还具有促进细胞凋亡和免疫监视等作用[11]。

刘雪晴等[4]的研究结果发现，MASP-2在大肠癌患者的癌组织和血清中异常表达，MASP-2可能在大肠癌的发生发展过程中起一定的作用。段廷旺等[12]的研究结果也显示，MASP-2在胃癌患者的癌组织中表达异常。SWIERZKO等[5]的研究结果发现，卵巢癌患者癌组织和血清中MASP-2的表达量显著高于对照组，并且可以判断卵巢癌患者的预后情况。张小蓬[13]应用酶联免疫法检测了96例Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平，检测结果显示Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平显著高于健康人对照组(P<0.001)，并且与是否有淋巴结转移密切相关。Cyfra21-1是目前临床上常用的肺癌肿瘤标志物之一，《中国原发性肺癌诊疗规范》(2015年版)推荐Cyfra21-1可用于NSCLC的辅助诊断、治疗监测和预后判断[14]。

本研究的结果发现，NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平明显高于肺部良性疾病患者和健康人，差异有显著统计学意义(P<0.01)。这一研究结果与张小蓬[13]的研究结果基本一致，不同的是其研究对象中不包括Ⅲ期和Ⅳ期NSCLC患者。本研究的结果显示，MASP-2在NSCLC中检测的灵敏度为47.5%、特异度为88.8%，Cyfra21-1在NSCLC检测中的灵敏度为48.2%、特异度为89.8%，说明MASP-2在NSCLC检测中的灵敏度和特异度与Cyfra21-1大致相同，同样有可能作为检测NSCLC的一种肿瘤标志物。本研究的结果显示，肺部良性疾病组血清中MASP-2和Cyfra21-1的浓度水平与正常健康人组比较无明显差异(P>0.05)，表明肺部良性疾病对MASP-2和Cyfra21-1表达没有影响。另外，本研究最重要的发现是MASP-2在早期NSCLC中检测的灵敏度比较高，达到了39.0%，显著高于Cyfra21-1的灵敏度(14.6%)，差异具有统计学意义(P<0.05)，说明MASP-2对于早期NSCLC的检出率要好于Cyfra21-1。《中国原发性肺癌诊疗规范》(2015年版)建议联合使用肺癌肿瘤标志物能够提高肺癌检测的灵敏度和特异度。本研究的结果也显示，联合Cyfra21-1和MASP-2对NSCLC检测的灵敏度达到了64.0%，显著高于单一肿瘤标志物的阳性率(P<0.01)。

综上所述，血清MASP-2在NSCLC的辅助诊断中具有较好的临床应用价值,联合MASP-2和Cyfra21-1，可以提高NSCLC检测的灵敏度。