新型冠状病毒肺炎患者T淋巴细胞亚群分析*

黄丽丽，黄海静，吴 飞，曹 威，陆仁飞

（南通大学附属南通第三医院检验科，江苏226006）

新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）[1]于 2019 年 12 月在湖北省武汉市被发现[2-3]，该病由 2019 新型冠状病毒（2019-nCoV）感染导致的一种新型肺炎。患者主要表现为发热、干咳和乏力等症状，少数患者可伴有流涕、咽痛和腹泻，部分患者可出现呼吸困难，严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、凝血功能障碍和脓毒症休克等症状[4-5]。2019-nCoV 传染性强，主要通过呼吸道飞沫和接触等方式传播[6-8]，主要引起肺部炎症病变，还可以引起胃肠道、肝和神经系统损害。本研究选择我院2020 年1 月—2 月收治的南通地区新型冠状病毒肺炎患者24 例，观察患者T 淋巴细胞亚群的变化及其与临床治疗和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 新型冠状病毒肺炎患者24 例均符合《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第5 版修正版）》诊断标准[9]，所有患者取咽拭子样本，经南通市疾病预防控制中心新型冠状病毒核酸检测阳性。其中男性 13 例，女性 11 例，年龄 26～68 岁，平均50.2±13.7 岁。另取同期健康体检者24 例为正常对照组，其中男性 12 例，女性 12 例，年龄 19～65 岁，平均44.3±13.2 岁。所有受试者签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法 两组研究对象于入院时采集静脉血2 mL，采用希森美康XN-2000 检测血常规。COVID-19 组患者于急性期（入院时）及恢复期（入院后1 周）抽取静脉血2 mL 置于EDTA 抗凝管中，送流式细胞仪检测T 细胞亚群，具体操作:吸取CD3/CD8/CD45/CD4/CD19/CD16+56 检测试剂（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）20 μL 加入试管，再加入50 μL EDTA 抗凝静脉血，在涡旋混匀器混匀，室温避光孵育15 min。然后加入450 μL 稀释后的流式溶血剂，在涡旋混匀器混匀，室温避光孵育15 min，采用迈瑞BricyteE6 流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞。

1.3 统计学处理 应用SPSS21.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以表示，组间差异性比较采用独立t 检验或配对t 检验；计数资料以频数和率表示。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组入院时外周血白细胞计数及分类比较 与对照组比较，COVID-19 组患者中性粒细胞比例显著增高，淋巴细胞比例和绝对数下降，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而 WBC 总数和中性粒细胞绝对数与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组入院时外周血WBC 计数及分类比较

2.2 COVID-19 患者急性期 T 细胞亚群绝对数 COVID-19 患者急性期CD3+细胞减少14 例（58.33%），CD4+细胞减少 13 例（54.17%），CD8+细胞减少 11 例（45.83%）。

2.3 COVID-19 患者急性期与恢复期T 细胞亚群比较 COVID-19 患者恢复期外周血 CD3+、CD4+、CD8+细胞绝对数高于急性期，差异均有统计学意义（P＜0.05）。恢复期 CD3+、CD4+、CD8+细胞比例及 CD4+/CD8+比值与急性期比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2～3。

表2 COVID-19 患者急性期与恢复期T 细胞绝对数比较

表3 COVID-19 患者T 细胞亚群比例及CD4+/CD8+比值比较

3 讨 论

2019-nCoV 是一种新型β 属冠状病毒，属于单链RNA 病毒，其基因特征与SARS-CoV 和MERSCoV 有明显区别，是已知可感染人类的第7 种冠状病毒[10]。T 淋巴细胞亚群是反映机体免疫系统功能的重要细胞，主要由CD4+和CD8+两类细胞组成。CD4+细胞可以促进T 细胞转化为效应细胞，通过分泌多种细胞因子发挥作用，还具有转化B 细胞和活化巨噬细胞的作用。CD8+细胞可以抑制B 淋巴细胞抗体的产生和T 细胞的活化，具有细胞毒性，可以直接杀伤靶细胞。正常情况下两者维持相对平衡和稳定，抵抗外界病原体的入侵。因此，T 淋巴细胞在机体抗病毒感染中起关键作用。

本研究结果显示，与正常人群比较，COVID-19患者中性粒细胞比例显著增高，淋巴细胞比例和绝对数显著下降，提示2019-nCoV 可能主要作用于T淋巴细胞，侵袭患者淋巴结等免疫器官。外周血淋巴细胞的变化可以作为COVID-19 早期诊断依据。本研究发现58.33%COVID-19 急性期患者CD3+细胞绝对数下降，54.17%患者CD4+细胞绝对数下降，45.83%患者CD8+细胞绝对数下降，淋巴细胞减少的原因可能是:（1）病毒感染使得免疫细胞活化参与抗病毒，导致细胞损伤和凋亡；（2）免疫细胞黏附分子的表达致使血液循环池细胞向组织内移动，引起外周血淋巴细胞减少。当然2019-nCoV 感染患者淋巴细胞减少的深层次机制还有待进一步研究。少数重症患者淋巴细胞较少十分显著，可能与患者机体免疫力低下，细胞杀伤毒性作用下降有关。患者恢复期CD3+，CD4+，CD8+细胞明显升高，说明 2019-nCoV 对T 淋巴细胞的损伤是可逆的。观察治疗前后T 淋巴细胞亚群的变化对估计COVID-19 患者的病情和预后有重要作用。

综上所述，COVID-19 患者T 淋巴细胞存在异常，检测T 淋巴细胞亚群有助于了解患者的免疫状况，对指导治疗和判断预后有重要意义。