超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中金刚烷胺药物残留研究

曹骞 王磊 代立勤

摘要    本文建立了鸡肉中金刚烷胺药物残留检测方法。样品经过1%乙酸乙腈提取，C18柱净化，以及经超高效液相色谱-串联质谱检测分析，优化了质谱的分离参数。结果表明，金刚烷胺在1～100 μg/mL范围内线性满足要求，相关系数r为0.998，定量限为1.0 μg/kg。该方法简单、灵敏度高、稳定性好，能够满足鸡肉中金刚烷胺药物残留检测要求，为鸡肉中金刚烷胺药物检测提供一定技术参考。

关键词    金刚烷胺;鸡肉;超高效液相色谱-串联质谱法;药物残留

金刚烷胺可用于亚洲甲-Ⅱ型流感的预防和治疗，畜牧养殖业中金刚烷胺主要用于鸡禽流感的预防和早期治疗，但其具有致精神异常的副作用。流感耐药性日益增强，长时间超量食用这些药物则会导致动物中毒、免疫抑制以及药物残留，重则可能会使病毒发生变异，为预防和控制带来很大难题，对动物源性食品的消费者存在较大安全隐患[1-3]。2005年，我国农业部也曾经发出《关于清查金刚院胺等抗病毒药物的紧急通知》，禁止金刚烷胺等抗病毒兽药的生产和使用。由于金刚烷胺在禽类养殖中仍有非法使用，因而对于禽类食品中金刚烷胺残留含量的检测方法研究具有重要的现实意义。本文旨在建立高效液相色谱-串联质谱法，同时探讨鸡肉中金刚烷胺的残留检测方法，为开展鸡肉中金刚烷胺药物的残留检测提供一定的参考。

1    材料与方法

1.1    仪器与试剂

试验仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD 超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪，美国Waters公司;高速冷冻离心机，湖南湘仪公司;涡旋混合器，德国IKA公司;氮吹仪，上海安谱公司;百分之一电子天平，德国赛多利斯公司。

试剂：乙腈、甲醇、正己烷、甲酸（HPLC级，上海安谱公司）;试验用水为屈臣氏蒸馏水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL）购自上海安谱公司;金刚烷胺、金刚烷胺-D15购自德国Dr公司。

1.2    试验方法

1.2.1    标准溶液配置。将金刚烷胺、金刚烷胺-D15各10 mg用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，配置成1 mg/mL的标准储备液，置于0～5 ℃冰箱中保存。准确移取适量金刚烷胺标准品储备液用0.1%甲酸乙腈/水（体积比为3∶7）溶液配置成目标药物浓度为1、2、5、10、20、50、100 μg/L，其中同位素内标浓度为20 μg/L的标准系列溶液。

1.2.2    试剂配置。5.0 mol/L氢氧化钠溶液：称取10 g氢氧化钠，溶解于50 mL水中。1%乙酸乙腈溶液：取5 mL乙酸，用乙腈稀释至500 mL。0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液：称取6.8 g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至500 mL，用5.0 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.00±0.05。0.1%甲酸乙腈/水溶液：取0.5 mL甲酸，用乙腈/水（体积比为3∶7）溶液稀释至500 mL。

1.2.3    样品处理。提取：准确称取2.00 g（精确至0.01 g）均质鸡肉样品于50 mL离心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈，涡旋提取2 min，10 000 r/min离心5 min（建议温度设为4 ℃），上清液转入另一支50 mL离心管中。重复提取1次，离心后合并上清液，加入10 mL正己烷，涡旋混合1 min，10 000 r/min离心1 min（建议温度设为4 ℃），移去正己烷，将乙腈层转入于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，用3 mL磷酸盐缓冲液溶解残渣，待净化[4]。

净化：C18固相萃取柱（100 mg/3 mL），分别用2 mL乙腈、2 mL磷酸盐缓冲液活化和平衡，将待净化的溶液以自然滴液速度过柱，用2 mL水淋洗，真空抽干。用1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（体积比为3∶7）溶液洗脱，真空抽干，收集洗脱液，过0.22 μm滤膜后上机测定[5-6]。

1.2.4    色谱条件。色谱柱为Waters ACQURRY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱温40 ℃，样品室温度20 ℃，进样量5 μL，流速0.4 mL/min，流动相A为0.1%甲酸水溶液、B为乙腈溶液。梯度洗脱条件：0～0.5 min，维持95% A，5% B;0.5～4 min，95%A线性变化至5%，5%B线性变化至95%;4.1 min线性变化至95%A，5%B;4.1～6 min维持95%A，5%B。

1.2.5    质谱条件。电喷雾电压为3.00 kV;离子源温度为120 ℃;色谱柱温度为40 ℃;洗脱溶剂温度为450 ℃;气体流量（N2）为1 000 L/h;锥孔气流量（N2）为50 L/h。

2    结果与讨论

2.1    质谱条件的优化

分别将金刚烷胺和金刚烷胺-D15标准品储备液配置成0.5 μg/mL浓度的标准溶液，以5 μL/min的流速注入质谱仪，在正离子模式下进行扫描，确定目标化合物的分子离子、定性及定量离子，并且优化质谱的各项参数，质谱参数优化结果见表1。

2.2    线性范围和检出限

将金刚烷胺分别配置成1、2、5、10、20、50、100 μg/L的标准溶液进行测定。鸡肉中金刚烷胺检出限为0.3 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg。金刚烷胺在1～100 μg/L范围内，线性方程为Y=0.011 991 5x+0.065 052，相关系数为0.998 407。

2.3    加标回收率

在空白鸡肉样品中添加20 ng/mL金刚烷胺进行回收试验可知，回收量為19.3 ng/mL，金刚烷胺回收率为96.5%。

3    结论

本文建立了鸡肉中金刚烷胺检测分析的LC-MS/MS分析方法。该方法简单、灵敏度高、稳定性好，能满足鸡肉中金刚烷胺残留检测要求，可以为相关检测提供技术参考。

4    参考文献

[1] 张璐，付晓燕，何强，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中的金刚烷胺[J].环境化学，2018，37（3）：614-616.

[2] 程忠刚，傅伟化，刘树中.动物抗病毒药物的应用研究进展[J].兽医导刊，2010（8）：42-45.

[3] 张强，赵巧杰，熊瑞生.抗流感病毒药物研究进展[J].药学学报，2010，45（3）：289-299.

[4] 王亚会，李祥波，陆君.高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的金刚烷胺[J].食品工业，2019，40（9）：277-280.

[5] 张昕怡.高效液相色谱技术在食品检测中的应用[J].农业与技术，2016，36（4）：235.

[6] 阳艳娟.高效液相色谱技术在食品检测中的应用[J].食品安全导刊，2015（20）：74-75.