MSI对晚期结直肠癌化疗效果评价的意义分析

胡文杰，应雪，王景芳

（1.江西省景德镇市第二人民医院，景德镇 333000；2.江西省景德镇市第三人民医院，景德镇 333000）

结直肠癌（CRC）是消化系统常见的恶性肿瘤，为全球第三常见的癌症类型，其癌症相关死亡率居第二位[1]。该病早期症状特异性较低，大部分患者确诊时已是中晚期，失去了手术机会，化疗则是中晚期CRC 最为重要的治疗方式[2]。CRC 发生机制较为复杂，其发生是一个多因素及多基因参与的过程[3]。随着分子靶向治疗研究的不断深入，越来越多的文献报道其发病主要原因除了癌基因的激活、抑癌基因的抑制，微卫星不稳定性（MSI）为其发病的另一重要因素[4]。本研究对晚期CRC 化疗患者进行MSI 分析，探讨MSI 状态对患者化疗疗效及预后的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2016 年 1 月-2019 年 1 月我院收治的晚期CRC 患者200 例，均符合CRC 的诊断标准，经肠镜活检后病理组织学确诊，有RECIST 实体瘤疗效评价标准中的可测量病灶，影像学检查或转移灶活检明确存在远处转移灶，预计生存期>3 个月，功能状态评分（KPS）>70 分，初治患者，进行至少2 个周期FOLFOX 方案化疗，意识清楚，表达顺畅；排除存在肿瘤脑转移，化疗前接受过任何形式的抗肿瘤治疗,心肝肺肾功能及造血功能严重异常,存在其他化疗禁忌症，精神病史、意识不清、认知障碍者及病例资料记录不完整者。200 例患者中男 126 例，女 74 例；年龄 39-74（61.53±6.78）岁；病变部位：右半结肠 84 例，左半结肠71 例，直肠 45 例；病理类型：黏液腺癌 76 例，非黏液腺癌124 例；分化程度：低分化108 例，中高度分化 92 例；转移情况：单发 117 例，多发 83 例。

1.2 方法

1.2.1 化疗方法 200 例患者均予FOLFOX 方案进行化疗。奥沙利铂 （批准文号： 国药准字H20093487；生产厂家：浙江海正药业股份有限公司；规格：50mg/支）85mg/m2静脉滴注 2h，第 1d；亚叶酸钙 （商品名： 同奥； 批准文号： 国药准字H20000584；生产厂家：江苏恒瑞医药股份有限公司；规格：50mg/支）200m/m2静脉滴注 2h，第 1、2d：5-氟尿嘧啶（批准文号：国药准字H12020959；生产厂家： 天津金耀药业有限公司； 规格：250mg/支）400mg/m2静脉推注，再以600mg/m2持续静脉注射22h，第 1、2d。14d为1 个化疗周期，持续治疗不少于2 个周期。

1.2.2 疗效判定 采用RECIST 实体瘤评估标准对化疗疗效进行评价。完全缓解（CR）：所有可见病灶完全消失，全部病理淋巴结短直径减少至10mm 以下；部分缓解（PR）：所有可见病灶直径之和比基线水平减少30%以上；疾病进展（PD）：所有可见病灶直径之和比基线水平增加至少20%且5mm 以上；疾病稳定（SD）：靶病灶改变程度介于PR 和PD 之间；有效率（ORR）=CR+PR，疾病控制率（DCR）=CR+PR+SD。

1.2.3 MSI 分析 对所有原发肿瘤组织进行DNA错配修复基因 （MMR） 检测，分析 MLH1、MSH2、MSH6 以及PMS2 的表达情况。⑴免疫组化染色：所有试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，仪器采用美国罗氏公司生产的Benchmark XT全自动免疫组织化学染色机。肿瘤组织固定，包埋，并制成3μm 石蜡切片，再用染色机进行染色，染色步骤严格参照配套试剂盒说明书进行。⑵结果判读： 所有阅片由2 名高年资病理科医师采用双盲法完成。计数5 个高倍视野，根据染色强度和阳性细胞所占的百分比进行评分。染色强度评定标准：棕褐色为3 分，棕黄色为2 分，淡黄色为1分，无色为0 分； 阳性细胞所占的百分比评定标准：＞75%为 4 分，50%-75%为 3 分，10%-50%为 2分，≤10%为1 分，阴性为0 分。染色强度与阳性细胞百分比的乘积为最终分数：8-12 分为强阳性，4-7 分为中度阳性，1-3 分为弱阳性，0 分为阴性。MLH1、MSH2、MSH6 或 PMS2 中任意一种或一种以上表达为阴性定义为MMR 蛋白缺失，即为MSI；四种蛋白均未见表达缺失，则为微卫星稳定（MSS）。

1.3 观察指标 根据200 例患者MSI 分析结果分为 MSS 组、MSI 组，回顾性分析 2组患者临床特征、化疗疗效及预后。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0 软件分析数据。计数资料采用χ2检验。P＜0.05 为差异有显著性意义。

2 结果

2.1 200 例患者MSI 分析结果 200 例患者原发肿瘤组织标本结果显示，出现至少一种错配修复蛋白阴性表达即 MSI 状态 22 例（MSI 组）、缺失率为11.00%，MSS 状态则为 178 例 （MSS 组）、稳定率89.00%。其中 hPMS2 蛋白缺失 21 例 （10.50%）、hMLH1 蛋白缺失 18 例（9.00%）、hMSH2 蛋白缺失4 例 （2.00%）、hMSh6 蛋白缺 失 3 例 （1.50%），MLH1、hPMS2 共同缺失 16 例 （8.00%）、hMSH2、hMSH6 共同缺失 2 例（1.00%）。

2.2 2组患者临床特征比较 2组患者性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），肿瘤部位、分化程度、病理类型及转移情况比较差异具有统计学意义（P＜0.05），MSI 组有好发于右半结肠、倾向于低分化及黏液腺癌、易发生2 个及以上转移部位的病理特征。见表1。

2.3 2组患者化疗疗效比较 MSI 组 ORR、DCR 分别为 9.09%、45.45%，MSS 组分别为 32.58%、70.79%，MSI 组 ORR、DCR 均明显低于 MSS 组 （P＜0.05）。见表2。

表1 2组患者临床特征比较[n（%）]

表2 2组患者化疗疗效比较[n（%）]

3 讨论

MMR 是DNA 修复系统的重要成员，MSI 主要由MMR 缺陷造成DNA 复制后自我修复功能丧失，导致微卫星重复的数目改变，出现新的微卫星等位基因现象[5]。研究证实，MSI 状态可致癌基因的异常表达或者抑癌基因的失活，导致正常基因突变并且不断积累，并将错误的信息传布肿瘤基因，与多种恶性肿瘤尤其是结直肠癌的发生和发展密切相关[6,7]。MLH1、MSH2、MSH6 及 PMS2 均为 MSI形成过程中的主要错配修复蛋白,任何一项错配修复基因表达缺失都可导致MSI。本研究检测了200例晚期CRC 患者肿瘤组织上述蛋白的表达情况，结果发现有22 例（11%）患者存在MSI，这与以往文献报道的基本一致[8]。进一步研究显示，2组患者肿瘤部位、分化程度、病理类型及转移情况比较差异具有统计学意义（P＜0.05），表明MSI 状态患者存在肿瘤好发于右半结肠、倾向于低分化及黏液腺癌、易发生多转移部位等病理特征[9]，提示基因编码的差异、蛋白表达水平的不同与结直肠癌的发病位置、病理类型、分化程度等存在某种关联。此外，MSI 组 RR、DCR 均明显低于 MSS 组（P＜0.05），表明相较于MSS 患者，MSI 患者化疗疗效更差，考虑可能为结肠癌肿瘤组织存在MMR 蛋白缺乏，而后者是肿瘤组织对抗肿瘤药物的主要机制之一。

综上所述，MSI 状态与晚期CRC 的化疗疗效及预后密切相关，可作为晚期CRC 预测化疗疗效和预后的指标，具有重要的临床意义。但本研究仍存在一定的局限性，如MSI 患者在总体患者中所占比例较低（22 例），导致样本量较小；研究中检测MLH1、MSH2、MSH6 及 PMS2 四种蛋白，对其他错配修复蛋白无关注。后续工作中我们将进一步完善临床研究，以期阐明MSI 对晚期CRC 产生影响的相关分子机制。