EGFR、SOX2在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

王志勇，刘升，黄慧艳

（1.南昌大学第一临床医学院，南昌 330000；2.江西省于都县人民医院，于都 342300）

食管癌是世界范围内最致命的恶性肿瘤之一，鳞状细胞癌是其主要的病理组织学类型，由于早期症状不明显，很多患者错过了最佳治疗的机会，以致食管癌的死亡率居高不下[1]。为了提高患者的早诊率及预后生存率，以食管癌的发生、发展有关的相关基因为靶点的分子靶点治疗是目前医学领域的研究方向[2,3]。SOX-2 是SOX 基因家族中的一员，是维持胚胎干细胞及间充质细胞的稳定性的关键基因之一。EGFR 是人类表皮生长因子受体（HER）家族中的一员，又称为HER1，能够调控细胞对外界刺激的反应并影响肿瘤干细胞的增殖。目前EGFR 和SOX-2 在很多肿瘤中被发现，并用于其诊断、治疗和预后转归的评估。本次研究探讨了EGFR 和SOX-2 在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及其相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选取 2017 年 10 月-2019 年10 月于我院收治并行食管鳞癌组织切除术和淋巴结清扫术的患者80 例。其中男 51 例，女 29 例，年龄 35-75 岁，中位年龄为 65.5 岁。按照 WHO 诊断分类进行分组：高、中、低分化组分别为13、41、26例。所有患者术前均未行放射及化学等治疗，无其他原发肿瘤。术后组织标本在室温下放置于10%中性福尔马林溶液（pH 值为7.2）中固定24-48h，然后制作成蜡块备用。

1.2 实验方法 采用免疫组化二步SP 法检测Sox2 和 EGFR 蛋白在取取标本中表达：脱蜡至水；蒸馏水冲洗，PBS 溶液冲洗 5min； 抗原修复；H2O2室温孵育 10min，3 次 PBS 洗涤； 滴加一抗，4℃冰箱过夜； 滴加二抗后室温孵育30min，3 次 PBS 洗涤；DAB 显色，苏木素复染后封片显微镜下观察。

1.3 结果判定 SOX-2 以胞核中出现清晰的棕色颗粒为阳性染色，EGFR 以细胞膜及细胞质染色呈棕色为阳性染色。染色强度评分：⑴0 分：细胞无染色；⑵1 分：呈弱阳性、浅棕表达；⑶2 分：细胞深棕色和浅棕色为背景、细胞染色为棕色背景、细胞染色为棕色且无背景着色；⑷3 分：细胞深棕色、无背景着色。细胞数评分：利用400 倍数高倍镜下随机挑选 5 个视野，200 细胞/视野，共计 1000 个，取 5个视野平均数计算阳性细胞占比。⑴0 分：无阳性细胞。⑵1 分：阳性细胞数≤25%。⑶2 分：阳性细胞数＞25%且＜50%。⑷3 分：阳性细胞数≥50%。综合以上两项评分相乘，0-1 分为 （-），2-3 分为（+），4-6 分为（++），7-9 分为（+++）

1.4 统计学分析 应用SPSS 20.0 软件对多组间数据进行各组间单因素方差分析。组间比较用χ2检验。Spearman 等级相关分析 EGFR、SOX2 两者的相关性。

2 结果

2.1 各组 EGFR、SOX-2 的表达情况 EGFR、SOX-2 在食管鳞癌标本中有表达，且阳性表达率及阳性表达程度随着分化程度的降低而升高（见表1）。

2.2 EGFR、sox-2 的表达与临床病理特征的关系EGFR、SOX-2 在食管鳞癌标本中的表达与TNM分期有统计学关系，与患者的年龄、大小及淋巴结是否有转移无显著关系（见表2、表3）。

表1 各组EGFR、SOX-2 的表达情况

表2 EGFR 表达与临床病理特征的关系

2.3 EGFR、SOX-2 表达的相关性 EGFR 和 SOX-2 在食管鳞状细胞癌标本中的表达情况呈现出正相关性，两者具有协同促进作用（见表4）。

3 讨论

肿瘤干细胞（Cancer stem cells,CSCs）被称为肿瘤始动细胞（initiating cells ，TICs)，在肿瘤微环境（TME）的特定区域下，具有高增殖率、自我更新和极端抗药性。这种小而单一的细胞亚群被认为控制着人类癌症的起源、发展、耐药性、复发和转移，在几乎所有类型的人类癌症中都有它的身影[4-6]。SOX-2 及 EGFR 作为维持 CSCs 稳定性的相关基因也被认为在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。

表3 SOX-2 表达与临床病理特征的关系

表4 EGFR、SOX-2 表达的相关性

SOX-2 是与Y 染色体相关的一种转录因子，以其在保持干细胞特性方面的功能而闻名。SOX-2 所介导的CSCs 特性被认为在肿瘤的起源中起着原癌基因的作用[7,8]。在卵巢癌中能够检测到高表达的SOX-2，抑制其表达，能够降低肿瘤的增殖性及恶性侵袭性[9]。表皮生长因子受体（EGFR）频繁的过度表达和过度激活被认为与肿瘤细胞的存活、生长、增殖和分化有关。在非小细胞肺癌中，EGFR 是有仅起着原癌基因的作用，同时更是其预后的一个危险因素，但随着近年来争对EGFR 基因的靶向药物治疗的应用使得肺癌的生存率大大提高[10,11]。

EGFR 和SOX-2 两者在恶性胶质瘤中普遍高表达，而通常在正常组织中普遍低表达，SOX-2 可以在体外结合EGFR 的启动子，变相激活EGFR的转录活性，通过和EGFR 的协同作用，进一步表达SOX-2 的病毒转染神经干细胞，还能反向促进EGFR 的表达，刺激胚胎神经干细胞的增殖和体外成球率[12]。有研究发现，EGFR 能够正向调节 SOX-2 在前列腺癌中的表达,同时，小分子EGFR 抑制剂能够阻断EGFR 的激活，同时也降低了SOX2 的表达[13]。EGFR 和SOX-2 在食管癌中的表达及作用也在不断的研究发现中。

本次研究探讨了EGFR 和SOX-2 在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及其相关性。此次研究发现，EGFR、SOX-2 在食管鳞癌组织中具有较高的阳性表达率，分别为76.25%和62.5%。EGFR 和SOX-2 在不同分化程度鳞癌中的表达具有差异性，高分化鳞癌组53.85%/46.15%； 中分化组75.61%/65.85%；低分化组88.46%/80.77%，经统计学分析，鳞癌的分化程度越低，恶性程度越高，EGFR及SOX-2 的阳性表达率阳性表达程度越高。本次研究还证实了两者的表达具有一定程度的正相关性。

综上所述，EGFR、SOX-2 可能通过某种通路共同参于了食管鳞癌的发生发展，且能够一定程度的影响患者的预后，但其作用的具体通路和作用机制还不明确，进一步研究EGFR-SOX-2 协同作用机制有望开创食管鳞癌分子治疗的新格局。