人参二醇酰化产物的合成及其对大鼠离体胸主动脉的影响

周金娜，张荣平，邹 澄，杨为民，段文越，陈 晨，胡建林

昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，昆明 650500

三七属五加科人参属植物，又名田七，金不换，具有止血、散瘀、定痛的功效。三七是我国云南省文山市的道地药材，在我国已经有600年以上的药用历史，临床上常用于治疗血管疾病，如动脉粥样硬化[1,2]，冠心病[3]和高血压[4]。三七发挥药理活性的主要有效成分是三七皂苷[5-7]，以三七总皂苷为主要成分的药物—血塞通，具有通脉活络和增加脑血流量的作用。血塞通里的三七皂苷可以在体内发生代谢，典型代谢为逐步脱糖至生成苷元[8]。因此，对三七皂苷元进行结构改造具有重要意义。

新药研究开发的一条有效途径是通过对丰产易得的天然产物进行结构改造以期发现新的活性成分[9]。三七中苷元类型主要分为原人参二醇和原人参三醇，目前，大量的结构改造工作集中于三七皂苷，主要包括酸水解，碱水解，酶裂解等方法，而针对三七苷元改造的研究方法则较少。为了充分开发利用这一植物资源，本文以人参二醇为原料，将其3位OH通过与酰氯化合物(图1中1～10)反应，合成了10个人参二醇酰化衍生物(图1中PD-1～10)，利用Wire Myograph System DMT血管张力测定仪测定其舒张大鼠胸主动脉活性，结构与合成路线如图1所示，这10个化合物均为新化合物。

1 仪器和材料

78-1型磁力搅拌器(杭州仪器电机厂)；BUCHI R-200旋转蒸发仪(瑞士)；TN型托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂)；FA 2004电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)HH-2型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SHZ-D循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限公司)瑞士AM-400型核磁共振波谱仪(全部化合物的波谱数据均由中国科学院昆明植物研究所仪器中心测定)；Wire Myograph System DMT血管张力测定仪(Danish Myo Technology Company)；PowerLAB数据记录和分析系统(澳大利亚Adinstruments公司)；Motic SMZ168-TL解剖显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)；WA3010显微镜(上海医疗器械集团)；维纳斯眼科剪(江苏苏科医疗器械有限公司)；乌拉坦(天津市轩昂科工贸有限公司)。

样品(20R)-人参二醇(含量≥90%)购买于上海思达医药化工科技有限公司，并经核磁共振氢谱与碳谱确定其结构正确。所有化学合成试剂主要为分析纯，购买于上海晶纯实业有限公司(阿拉丁)和上海泰坦科技股份有限公司(阿达玛斯)，柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的300～400目硅胶，薄层层析硅胶为默克公司生产的高效薄层层析板，显色剂为5%的硫酸乙醇溶液。

2 实验方法

2.1 PD-1～7的制备

称取7份人参二醇，每份46 mg，编号1～7，催化剂量的DMAP，依次加入25 mL两口反应瓶中，用5mL无水吡啶充分溶解后，1～7号两口反应瓶分别滴加15滴苯甲酰氯，20滴邻氯苯甲酰氯，5滴4-三氟甲基苯甲酰氯，15滴对甲基苯甲酰氯，15滴2，4-二氯苯甲酰氯，5滴3-苯基丙酰氯，5滴特戊酰氯，加热搅拌反应，TLC检测反应进程。至原料不再消耗后，反应到达终点。室温放冷，将反应液倾入装有100 mL水的烧杯中，稍搅拌，静置待酰氯水解完全。用棉花柱过滤，蒸馏水和饱和食盐水冲洗三次，乙酸乙酯冲洗三次，收集酯层。酯层用无水Na2SO4干燥，浓缩回收酯层，反应物1～3经300～400目硅胶柱分离，以石油醚∶乙酸乙酯(15∶1)洗脱，反应物4～6经300～400目硅胶柱分离，以石油醚：乙酸乙酯(12∶1)洗脱，反应物7经300～400目硅胶柱分离，以石油醚：乙酸乙酯(25∶1)洗脱，得到化合物PD-1～7(结构如图1所示)。

图1 人参二醇酰化衍生物结构与合成路线

2.2 PD-8～10的制备

称取人参二醇3份，每份46mg，编号8～10，分别将对甲氧基苯甲酰氯250 mg，2，3-二氯苯甲酰氯80 mg，3，5-二硝基苯甲酰氯60 mg，以及催化剂量的DMAP，依次加入25 mL两口反应瓶中，加入10 mL无水吡啶，稍加热使反应物大部分溶解后，置于室温下搅拌反应，TLC检测反应进程，至原料消耗完全，停止反应。后处理方法同上。浓缩回收酯层，经300～400目硅胶柱分离，分别以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1、15∶1、12∶1)洗脱。得到化合物PD-8～10(结构如图1所示)。

2.3 波谱数据

化合物PD-1白色针状结晶(CHCl3)；mp.198～200 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-28)，1.01(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.72(1H，dd，J= 4.0，12.0 Hz，H-3)，6.31(1H，brs，-OH)，7.54(1H，s，H-5′)，8.04(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 7′)，7.43(2H，d，J= 8.0 Hz，H-4′ and 6′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.4(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.5(t，C-11)，69.8(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，33.0(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.2(s，C-1′)，130.9(s，C-2′)，129.5(d，C-3′)，128.2(d，C-4′)，132.6(s，C-5′)，128.2(d，C-6′)，129.5(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-苯甲酰酯-人参二醇。

化合物PD-2白色针状结晶(CHCl3)；mp.208～210 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，0.96(3H，s，H-28)，0.99(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.76(1H，dd，J= 4.0，12.0 Hz，H-3)，6.39(1H，brs，-OH)，7.3～7.8(4H，m)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.5(d，C-3)，38.0(s，C-4)，56.0(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，69.9(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，165.6(s，C-1′)，131.2(s，C-2′)，132.1(s，C-3′)，130.9(d，C-4′)，133.4(d，C-5′)，126.5(d，C-6′)，130.9(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-邻苯甲酰酯-人参二醇。

化合物PD-3淡黄色无定型粉末(CHCl3)；mp.191～192 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-18)，0.96(3H，s，H-19)，1.01(3H，s，H-28)，1.02(3H，s，H-29)，1.20(3H，s，H-26)，1.23(3H，s，H-27)，1.28(3H，s，H-21)，4.76(1H，dd，J= 4.0，10.7 Hz，H-3)，6.55(1H，brs，-OH)，8.14(2H，d，J= 8.2 Hz，H-2′ and 6′)，7.70(2H，d，J= 8.2 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.2(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，30.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，165.0(s，C-1′)，125.3(s，C-2′)，129.8(d，C-3′)，125.3(d，C-4′)，134.1(s，C-5′)，125.3(d，C-6′)，129.8(d，C-7′)，29.6(s，-CF3)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-对三氟甲基苯甲酰-人参二醇。

化合物PD-4白色针状结晶(CHCl3)；mp.213～215 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.96(3H，s，H-19)，1.01(3H，s，H-28)，1.20(3H，s，H-29)，1.24(3H，s，H-26)，1.26(3H，s，H-27)，1.28(3H，s，H-21)，4.72(1H，dd，J= 5.0，10.0 Hz，H-3)，2.41(3H，s，H-4′-CH3)，7.94(2H，d，J= 8.1 Hz，H-2′ and 6′)，7.24(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.1(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.0(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.3(s，C-1′)，128.1(s，C-2′)，129.5(d，C-3′)，128.9(d，C-4′)，143.2(s，C-5′)，128.9(d，C-6′)，129.5(d，C-7′)，21.6(q，-CH3)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-对甲基苯甲酰酯-人参二醇。

化合物PD-5白色针状结晶(CHCl3)；mp.198～201 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.94(3H，s，H-19)，0.94(3H，s，H-28)，0.98(3H，s，H-29)，1.17(3H，s，H-26)，1.21(3H，s，H-27)，1.24(3H，s，H-21)，4.74(1H，dd，J= 4.4，11.2 Hz，H-3)，6.34(1H，brs，-OH)，7.45(1H，s，J= 2.0 Hz，H-1′)，7.28(1H，d，J= 8.4 Hz，H-2′)，7.76(1H，d，J= 8.4 Hz，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.9(d，C-3)，38.0(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.5(t，C-101)，69.8(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，164.7(s，C-1′)，132.3(s，C-2′)，137.9(s，C-3′)，129.1(d，C-4′)，130.8(s，C-5′)，126.9(d，C-6′)，134.6(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-(2，4-二氯苯甲酰酯)-人参二醇。

化合物PD-6白色无定型粉末(CHCl3)；mp.192～193 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.77(3H，s，H-30)，0.82(3H，s，H-18)，0.87(3H，s，H-19)，0.89(3H，s，H-28)，0.97(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.48(1H，dd，J= 5.0，10.0 Hz，H-3)，6.48(1H，brs，-OH)，2.95(2H，m，H-2′)，2.63(2H，m，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，80.9(d，C-3)，37.8(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.8(t，C-7)，39.8(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.4(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.1(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.7(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.4(q，C-21)，35.7(t，C-22)，16.4(t，C-22)，37.0(t，C-23)，73.2(s，C-24)，27.9(q，C-25)，33.0(q，C-26)，15.6(q，C-27)，27.1(q，C-28)，17.0(q，C-29)，172.6(s，C-30)，36.2(t，C-1′)，31.1(t，C-2′)，140.5(s，C-3′)，128.4(d，C-4′)，128.5(d，C-5′)，128.4(d，C-6′)，128.5(d，C-8′)，128.4(d，C-9′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-苯丙酰酯-人参二醇。

化合物PD-7白色针状结晶(CHCl3)；mp.188～189 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.84(3H，s，H-30)，0.85(3H，s，H-18)，0.86(3H，s，H-19)，0.88(3H，s，H-28)，0.92(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-26)，1.20(3H，s，H-27)，1.23(3H，s，H-21)，1.28(9H，s，H-2′，3′，4′)，4.44(1H，dd，J= 6.4，10.0 Hz，H-3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.4(t，C-1)，25.1(t，C-2)，80.1(d，C-3)，38.0(s，C-4)，55.8(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.3(t，C-11)，70.1(d，C-12)，48.9(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.5(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.5(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，27.9(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，178.1(s，C-1′)，38.9(s，C-2′)，27.1(q，C-3′)，27.1(q，C-4′)，27.1(q，C-5′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-特戊酰酯-人参二醇。

化合物PD-8白色针状结晶(CHCl3)；mp.209～210 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.91(3H，s，H-18)，0.94(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-28)，1.03(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.69(1H，dd，J= 4.0，8.0 Hz，H-3)，3.85(3H，s，H-4′-OCH3)，6.38(1H，brs，-OH)，6.91(2H，d，J= 8.0 Hz，H-2′ and 6′)，8.00(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.0(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，69.9(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.8(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.0(s，C-1′)，123.3(s，C-2′)，131.4(d，C-3′)，113.4(d，C-4′)，163.1(s，C-5′)，113.4(d，C-6′)，131.4(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-对甲氧基苯甲酰酯-人参二醇。

化合物PD-9白色无定型粉末(CHCl3)；mp.188～189 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.87(3H，s，H-30)，0.90(3H，s，H-18)，0.92(3H，s，H-19)，0.97(3H，s，H-28)，1.00(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-26)，1.23(3H，s，H-27)，1.27(3H，s，H-21)，4.77(1H，dd，J= 4.0，11.4 Hz，H-3)，6.47(1H，brs，-OH)，7.24(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1′)，7.59(1H，dd，J= 8.0，12.7 Hz，H-2′)，7.61(1H，d，J= 6.7 Hz，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.6(t，C-1)，25.1(t，C-2)，83.1(d，C-3)，38.1(s，C-4)，56.0(d，C-5)，18.2(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.8(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.4(s，C-10)，30.5(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.4(q，C-21)，35.7(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.1(q，C-26)，33.0(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.1(q，C-29)，17.0(q，C-30)，165.3(s，C-1′)，132.7(s，C-2′)，128.7(s，C-3′)，134.4(s，C-4′)，133.9(d，C-5′)，127.1(d，C-6′)，128.7(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-(2，3-二氯苯甲酰酯)-人参二醇。

化合物PD-10黄色无定型粉末(CHCl3)；mp.222～224 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.94(3H，s，H-18)，0.98(3H，s，H-19)，1.02(3H，s，H-28)，1.06(3H，s，H-29)，1.21(3H，s，H-26)，1.25(3H，s，H-27)，1.29(3H，s，H-21)，4.86(1H，dd，J= 5.9 Hz，9.5 Hz，H-3)，6.77(1H，brs，-OH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.4(t，C-1)，25.1(t，C-2)，84.2(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.6(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.3(t，C-11)，70.1(d，C-12)，48.9(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.1(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.4(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，162.1(s，C-1′)，134.5(s，C-2′)，129.3(d，C-3′)，148.6(s，C-4′)，122.1(d，C-5′)，148.6(s，C-6′)，129.3(d，C-7′)。化合物波谱数据与未酰化的化合物数据[10]进行对比后，鉴定化合物为3-(3，5-二硝基苯甲酰酯)-人参二醇。

2.4 舒张SD大鼠胸主动脉血管的评价[11]

2.4.1 制备血管环

准备10%的乌拉坦(1.00 mL/100g)将SD大鼠腹腔注射麻醉，迅速取出胸主动脉置于4 ℃MOPS-PSS液中。在体式解剖显微镜下，用显微手术器械将胸主动脉周围组织分离干净。剪成约2 mm动脉环穿60 μm金属丝备用(注意尽量不要损伤血管内皮等)。

2.4.2 平衡血管环

浴槽恒温37°C，盛MOPS-PSS工作液5 mL，并且持续通入95%O2和5%CO2的混合气体后将动脉血管环挂置于浴槽固定器上，调节微调装置，给血管环15 mN的预负荷。每隔20 min换1次MOPS-PSS(37 ℃)工作液，每次5 mL，平衡三次后，然后更换MOPS-KPSS工作液(含60 mM K+)5 mL检测血管环活性，检测两次，每次5 min。当收缩力为预负荷2倍左右时认为活性合格，用MOPS-PSS(37 ℃)工作液洗涤2～3次后再加入5 mL MOPS-PSS(37 ℃)工作液平衡后用于实验，然后按照预先计算的给药体积加药。

2.4.3 受试药物对SD大鼠离体胸主动脉的舒张实验

胸主动脉平衡并检测血管环活性合格后，加入200 μmol/L去氧肾上腺素(PE)5 μL收缩血管，待收缩达到最大值且平衡后，将受试药物用DMSO配制成800 μmol/L，并且用PowerLAB数据记录和分析系统采集数据。每一个受试药物取8根血管环进行重复试验。

2.5.4 数据处理

采用SigmaStat10.0统计分析软件对数据进行分析处理，本实验数据结果采用舒张率(%)来表示，相对张力值计算公式为：相对张力值=(X-平衡值)/(PE收缩值-平衡值)×100%，当相对张力小于50%时，认为受试药对SD大鼠胸主动脉具有舒张作用，相对张力越小，受试药舒张作用越显著。阳性对照为人参二醇。

3 实验结果

由表1可以看出，所制备的化合物PD-3、4、7、9、10有明显的舒张SD大鼠胸主动脉活性。其中化合物PD-3和PD-7舒张SD大鼠活性优于阳性对照人参二醇，特别是化合物PD-3(结果如表1所示)。

4 结果与讨论

制备得到的10个人参二醇酰化化合物均为新化合物，未见相关报道。实验集中对于人参二醇的3-位羟基进行结构改造，并且发现，目标产物产率的高低与酰氯试剂的空间位阻有关，位阻越小则产率越高，反应得越完全。实验操作简单，并且各目标产物的产率均在50%以上。由于人参二醇的3-位羟基的位阻使得反应速度缓慢，因此实验在选取合适催化剂方面也尤为谨慎，最终选定DMAP为催化剂。与此同时，采用吡啶为反应溶剂也大大加快了反应速度并提高了各目标产物的产率。值得一提的是，实验中，要注意在无水环境下进行，以免造成试剂的水解。

表1 化合物舒张SD大鼠胸主动脉活性结果

利用SD大鼠胸主动脉建立的离体模型，将所制备得到的人参二醇酰化产物进行舒张SD大鼠胸主动脉活性初步筛选，结果显示化合物PD-3、4、7、9、10具有舒张作用，并且化合物PD-3和PD-7舒张血管活性优于人参二醇，研究发现人参二醇酰化产物的舒张血管活性与C-3位所连基团上的取代基有关，首先，C-3位连接小分子取代基团舒张血管活性优于大分子取代基团，其次，C-3位连有苯环并且存在取代基的化合物有舒张血管活性，并且发现，C-3位连有苯环并且具有邻位取代的化合物能抑制舒张血管活性，而间、对位存在吸电子取代基的化合物活性较好。这些实验结果为人参二醇结构修饰及与舒张胸主动脉活性的构效关系的研究提供了有利依据，与此同时也需要进一步的体内药理作用机制研究。