胃腺癌组织中DEK与MMP-9的表达及临床意义

常艳华，蔡 颖，邹冰清，陈文凯

胃腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，临床治疗多采用手术切除和术后辅助化疗。胃腺癌易复发、转移，给术后综合治疗带来了巨大挑战。研究胃腺癌的发生、侵袭和转移机制对提高胃腺癌的治疗效果具有重要的意义。

DEK蛋白是一种广泛存在于有机体细胞核内可磷酸化的核蛋白[1]，有研究证明，DEK蛋白在胃癌组织中呈高表达[2]，然而，DEK在胃腺癌发生、发展中的功能及其作用机制尚不清楚。MMP-9是基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases, MMPs)的重要成员，可以破坏和裂解细胞外基质，促进肿瘤的侵袭和转移[3-4]。

本实验采用免疫组化法检测DEK与MMP-9蛋白在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达，分析DEK和MMP-9蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系，并进一步分析DEK和MMP-9表达的相关性，进而探讨DEK与MMP-9蛋白在胃腺癌发生、进展、侵袭及转移过程中可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料选取2017年1～12月南京医科大学附属无锡市人民医院存档的胃腺癌标本238例，男性187例，女性51例，平均年龄65岁。所有病例临床资料完整，术前均未接受放、化疗及生物学治疗。病例经病理证实，取癌组织蜡块为胃腺癌组，相应的癌旁>5 cm的胃壁组织蜡块为癌旁组。

1.2 试剂DEK兔抗人多克隆抗体(ab22826)购自英国Abcam公司，MMP-9鼠抗人单克隆抗体(EP127)购自北京中杉金桥生物公司，EnVision试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新生物公司。

1.3 方法标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，分别行HE染色和免疫组化染色，免疫组化染色采用EnVision两步法。每批均设已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 判读标准DEK蛋白以细胞核呈棕黄色颗粒为阳性，MMP-9蛋白以细胞质呈棕黄色颗粒为阳性。判读采用二级计分法。(1)按染色强度计分：不着色为阴性，计0分；淡黄色为弱阳性，计1分；金黄色为中等阳性，计2分；棕黄色为强阳性，计3分。(2)按阳性细胞范围计分：每张切片于400倍光镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞：无阳性细胞为0分；阳性细胞数占1%～25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；76%～100%为4分。将两项得分结果相乘：得分<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.5 统计学分析采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析，计数资料以率(%)表示，采用χ2检验；DEK与MMP-9的相关性采用Pearson相关分析。以α=0.05作为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中DEK及MMP-9蛋白的表达DEK蛋白和MMP-9蛋白阳性均为棕黄色颗粒，DEK定位于细胞核(图1)，MMP-9定位于细胞质(图2)。DEK在胃腺癌组织中的阳性率(75.6%，180/238)高于癌旁正常胃黏膜组织(45.8%，109/238)(χ2=44.400，P<0.001)；MMP-9在胃腺癌组织中的阳性率(73.5%，175/238)高于癌旁正常胃黏膜组织(52.9%，126/238)(χ2=21.697，P<0.001，表1)。

①②

图1胃腺癌组织中DEK的表达，EnVision两步法图2胃腺癌组织中MMP-9的表达，EnVision两步法

表1 胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中DEK和MMP-9蛋白的表达

2.2 胃腺癌组织中DEK及MMP-9蛋白表达及与临床病理特征的关系DEK及MMP-9表达与胃腺癌患者性别、年龄均无关(P>0.05)，与胃腺癌分化程度、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P<0.05，表2)。

表2 胃腺癌组织中DEK和MMP-9蛋白表达与临床病理特征的关系

2.3 胃腺癌组织中DEK与MMP-9蛋白表达的相关性在胃腺癌组织中DEK与MMP-9蛋白表达呈正相关(r=0.813，P<0.05，表3)。

表3 胃腺癌组织中DEK与MMP-9蛋白表达之间的相关性

3 讨论

DEK是一个原癌基因，是一个高度保守的转录调控因子，在肿瘤的发生、发展中扮演重要角色。肿瘤形成前期和肿瘤进展时，其可以通过参与干扰DNA修复、细胞分裂，促进瘤细胞生长和自我更新，抑制肿瘤细胞成熟前的衰老和凋亡，促进瘤细胞增殖[5-7]。

Liu等[8]利用ONGene数据库对DEK基因在多种肿瘤中的突变情况进行了研究，发现结肠癌中DEK的突变率高达34%，DEK在子宫内膜、皮肤、胃和肺等的原发性肿瘤中也有较高的突变率；Gao等[9]发现，DEK在卵巢癌中有较高的扩增率，达12%。已有研究表明[10]，DEK的高表达与胃癌患者的不良预后有关，然而其机制尚有待进一步研究。本实验采用免疫组化法检测238例胃腺癌及癌旁正常胃黏膜标本，发现DEK阳性定位于细胞核，其在胃腺癌组织中的阳性率达75.6%，高于癌旁正常胃黏膜组织(45.8%，P<0.001)，证实了DEK在胃癌组织中呈高表达。

Liu等[11]的Meta分析结果表明，DEK过表达与人实体肿瘤的总生存期短有关。Piao等[12]采用免疫组化和免疫荧光技术研究了DEK蛋白在胃癌组织中的表达，结果提示DEK表达与肿瘤体积、分化、临床分期、无瘤生存率和总生存率有关，认为DEK高表达提示不良预后。本组实验发现，DEK蛋白表达与胃腺癌浸润深度、分化程度及淋巴结转移情况密切相关，与Piao等的报道一致。

DEK对瘤细胞的调控机制复杂，涉及调节染色质、转录、翻译等过程的多个信号通路[12]，关于DEK表达的调控机制，目前仍知之甚少。凋亡的细胞核在磷酸化调节和多聚ADP-核糖化作用下，可释放DEK，并作用于细胞外基质，DEK被细胞外基质内的细胞摄取，进入这些细胞的胞核，DEK的分泌、摄取介导的瘤细胞与周围基质的对话，可能是DEK作用于细胞外基质促进肿瘤进展的可能机制[13]。

肿瘤的侵袭和转移受多种因子调控，研究发现，细胞外基质降解、肿瘤细胞突破基膜是造成肿瘤浸润、转移的主要原因。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)是降解细胞外基质的最为关键的蛋白水解酶，MMP-9是MMPs家族中重要的基质金属蛋白酶，是一类Zn2+依赖的细胞外蛋白水解酶，可降解细胞外基质，促进肿瘤细胞的侵袭和转移[14-15]。有研究显示[16]，MMP-9在胃癌组织的阳性率与其临床分期、分化程度及有无淋巴结转移有关。本组实验结果显示，MMP-9在胃腺癌组织中的阳性率达73.5%，高于癌旁正常胃黏膜组织(52.9%，P<0.001)，且其表达与胃腺癌浸润深度、分化程度及淋巴结转移情况密切相关(P<0.05)。本实验分析了胃腺癌组织中DEK和MMP表达的相关性，发现两者的表达呈正相关(r=0.813，P<0.05)，提示两者在胃腺癌的发生、发展、侵袭和转移中可能起作用。

已有研究证实，DEK可通过调节MMP-9的表达来影响结直肠癌细胞的侵袭与转移[17]。DEK高表达可促进子宫颈癌的生成和转移，其作用是通过DEK/p-Ser9-GSK-3β/p-Tyr216-GSK-3β/β-catenin轴实现的。体外实验提示，DEK基因沉默后，癌细胞增殖、浸润、迁移受抑，β-catenin降解，MMP-9表达下调[18]。

联合检测DEK与MMP-9，可能有助于对胃腺癌恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估，进而为胃腺癌的预后分析和临床治疗提供有效的依据。