联合检测血清脂肪酸结合蛋白和微小RNA-499在急性心肌梗死预警中的价值

郗汇聪，陈 礴，候海文

(青海省心脑血管病专科医院冠心病一科，青海 西宁810000 )

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是指心肌持续严重缺血而导致的心肌细胞坏死，多见于中老年患者，预后较差[1]。目前，多采用心肌损伤标志物对AMI进行早期诊断[2]。然而，现应用广泛的心肌损伤标志物存在组织特异性差、释放迟缓、持续时间长等不足，不利于AMI的早期诊断和梗死后再梗死诊断[3]。因此，寻找灵敏度及特异度高、释放时间早、代谢速率快的心肌损伤标志物成为临床研究的热点[4]。血清心脏型脂肪酸结合蛋白(heart type-fatty acid binding protein,H-FABP)、微小RNA-499(microRNA-499，miRNA-499)是近年来发现的新型心肌损伤标志物，具有较高的灵敏度和特异度[5-6]。本研究通过比较分析不同时间段H-FABP及miRNA-499变化情况，比较二者单独或联合检测的灵敏度、特异度等情况，以探讨H-FABP及miRNA-499联合检测在AMI早期诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2015年12月至2017年12月因胸痛急性发作来我院就诊的190例疑似AMI患者为研究对象，所有患者按照胸痛发作时间分为<4 h组(50例)，4～8 h组(55例)，8～12 h组(45例)，>12 h组(40例)。最后确诊为83例患者确诊为AMI，107例患者为非AMI。所有患者均按照2001年《急性心肌梗死诊断标准和指南》进行诊断[7]与分组，AMI均经临床、心电图及冠状动脉造影证实。排除标准：①严重肝、脑、肺、肾疾病患者；②严重感染者；③其他重要脏器疾病患者。

1.2 检测方法

所有患者入院后采集其外周静脉血5 mL，以3 000 r/min的速度离心12 min，采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆中miR-499的表达，利用miRNeasy RNA Isolation试剂盒(购自Qiagen公司)提取血浆总RNA，然后采用的Taq-Man miRNA反转录试剂盒(购自Applied BioSystems公司)进行逆转录，采用北京百奥莱博有限公司提供的BTN131042型miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒测定miRNA-499含量，标准内参为秀丽杆线虫miRNA(cel-miR-39)。每个样本重复测量3次取平均值，应用2-ΔΔCt法计算miR-499的相对表达量。H-FABP含量用基蛋生物科技股份有限公司提供的FIA8000免疫定量分析仪及配套试剂盒测定。

1.3 判断标准

阳性判断标准(参照试剂盒阳性判断标准)：H-FABP>10 ng/mL，miRNA-499相对表达量>1.0。联合检测时，结果采用并联法判定，两项指标中任何一项阳性即为阳性，两项指标均为阴性即为阴性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，行配对样本t检验，计数资料以例百分数(%)表示，进行χ2检验，以α=0.05作为检验水准，当P<0.05时表示差异具有显著性意义。

2 结 果

2.1 不同时间段H-FABP、miRNA-499指标含量

H-FABP含量于4～8 h开始升高，8～12 h达到峰值后逐渐回落，miRNA-499含量于4 h开始升高，4～8 h开达到峰值后逐渐回落，两项指标均于12 h后回归下降，见表1。

表1 H-FABP、miRNA-499指标含量不同时间段对比

与<4 h组相比，aP<0.05；与4～8 h组相比，bP<0.05；与8～12 h组相比，cP<0.05

2.2 H-FABP、miRNA-499定性检测结果

AMI与非AMI的H-FABP、miRNA-499单独及联合检测的灵敏度分别为59.49%、56.82%、64.52%，特异度分别为67.56%、67.65%、66.41%，见表2。

表2 H-FABP、miRNA-499定性检测结果比较

2.3 H-FABP、miRNA-499敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较

相比于单独检测，H-FABP联合miRNA-499检测AMI灵敏度及阴性预测值均显著提高(P<0.05)，见表3。

3 讨 论

急性心肌梗死一种常见的心内科急症，患者多有胸部压榨样疼痛、胸闷等症状，症状不典型易与主动脉夹层动脉瘤、肺栓塞等疾病相混淆。AMI多由冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起，若不及时予以处理，预后较差[7]。临床诊断多依赖于心电图及血清心肌损伤标志物[8]。然而，AMI早期患者心电图可无特异性表现，肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)等血清心肌损伤标志物存在组织特异性差、释放迟缓、持续时间长等不足，不利于急性心肌梗死的早期诊断[9]。近年来，临床研究证实H-FABP及miRNA-499可在AMI患者发病的初期即明显升高，但目前的临床研究多集中于H-FABP及miRNA-499在AMI患者中的单项检测价值，而对于H-FABP及miRNA-499联合检测在AMI患者早期诊断中的价值研究却鲜有报道[10]。

表3 H-FABP、miRNA-499敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较

H-FABP是一种存在于心肌细胞内的小分子脂溶性蛋白，具有较高的组织特异性[11]。在急性心肌梗死发生时，由于心肌细胞持续严重缺血、缺氧，细胞膜通透性增加，H-FABP可迅速通过细胞膜扩散至血液中，从而起到对急性心肌梗死的早期预警作用[12]。本研究显示，H-FABP在0～4 h开始上升，4～8 h达到峰值，然后逐渐回落，并于12 h后回归正常，表明H-FABP可在心肌梗死发生的早期即有明显升高、机体代谢周期较短，符合急性心肌梗死早期诊断要求，具有临床应用价值。

微小RNA是由21～25个核苷酸构成的小分子RNA[13]。研究发现，心肌细胞可特异性表达miRNA-499，并存在于心肌细胞，几乎不存在于血液中[14]。在急性心肌梗死发生时，由于心肌细胞持续严重缺血、缺氧，细胞膜通透性增加，miRNA-499可迅速通过细胞膜扩散至血液中，从而起到对急性心肌梗死的早期预警作用[15-16]。本研究结果显示，miRNA-499含量在AMI发病后4 h开始升高，4～8 h开达到峰值后逐渐回落，表明miRNA-499可在AMI发病后短时间内迅速升高，其在机体代谢周期与H-FABP相似，相比于单独检测，联合检测H-FABP和miRNA-499能显著提高预测AMI的灵敏度。

综述所述，H-FABP、miRNA-499均可用于AMI的早期诊断，两者联合检测可显著提高AMI诊断的灵敏度，具有较高的临床推广价值。