外周血CD40、CD40L表达及血清BAFF水平对ITP患者疗效的预测价值

尹凤雷 尹娟 赵芳 张睿 刘静 张薇 李淑晨 王娟

原发免疫性血小板减少症（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）为临床上常见的获得性免疫介导出血性疾病，主要以血小板减少、骨髓巨核细胞正常或增多为其主要临床表现［1-2］。该病发病机制尚不明确，可能与血小板膜抗原产生抗血小板抗体而使血小板破坏，而影响淋巴细胞的活化及免疫反应［3］。B 细胞激活因子水平过高可破坏自身B 细胞的免疫耐受而出现免疫性疾病，但其水平过低又可导致免疫球蛋白成熟受阻而引起体液免疫缺陷，导致变异型免疫缺陷疾病的发生［4］。多项研究显示外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平在ITP 发生发展中具有重要的意义，但对于上述指标对ITP 患者疗效预测方面的研究较少，因此本研究旨在通过探讨外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平对ITP 患者疗效的预测价值以期为该病的疗效预测提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年12月至2019年3月在本院接受治疗的ITP 患者80例（观察组）及同期健康体检患者100例（对照组）进行研究。其中对照组男44例，女36例；年龄23～58 岁，平均（42.23±6.11）岁；BMI 指数21～29 kg/m2，平均（26.58±3.05）kg/m2。观察组男55例，女45例；年龄21～59 岁，平均（42.22±6.31）岁；身体质量指数（Body Mass Index，BMI）20～28 kg/m2，平均（26.33±2.88）kg/m2。纳入标准：①观察组患者符合《成人原发免疫性血小板缺少症诊治的中国专家共识》［5］中的相关诊断，对照组不符合相关诊断；②受试者无精神性疾病；③患者对本研究知情并签署知情同意书。排除标准：①病毒感染继发ITP 的患者；②恶性肿瘤的患者；③药物致出血者。两组患者性别、年龄、BMI 指数对比差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

①外周血CD40、CD40L 检测：抽取观察组治疗前及对照组空腹外周静脉血4 mL，加含单克隆荧光标记抗体的鼠抗人CD40-FITC 及CD40L-PE各10 μL（试剂盒均购自于美国R＆G 公司），混匀后室温下孵育，以PBS 缓冲液清洗后进行美国赛默飞世尔公司Attune NxT 型流式细胞仪检测，每管收获10 000 个细胞，以仪器配套软件分析。②血清BAFF 检测：采集调查对象血氧2 mL，在3 000 r/min 转速下离心15 min，吸取0.8 mL 冷冻待测，以酶联免疫吸附法检测BAFF 水平，试剂盒购于美国Sigma 公司。③疗效判断标准：完全缓解：血小板计数在100×109L 以上，出血症状消失；有效：血小板计数在30×109L 以上且较治疗前增加2 倍以上，无出血；无效血小板计数不足30×109L，与治疗前相比上升不足2 倍或出现出血症状。根据上述标准将观察组分为2 组，完全缓解及有效的患者划入治疗反应组，无效的患者划入治疗无反应组。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行数据分析，计量资料用（）表示，采用t检验进行分析，相关性分析采用Perason 相关系数法，以受试者工作曲线（ROC）分析外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水对ITP 患者疗效预测价值，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组受试者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平对比

观察组外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平均明显高于对照组的，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 2 组患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF水平对比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

表1 2 组患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF水平对比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

组别对照组观察组t 值P 值CD40 7.31±2.07 12.92±3.05 6.721 0.000 CD40L 3.24±1.06 6.09±1.70 5.947 0.000 BAFF（ng/L）603.17±112.38 716.44±137.48 2.936 0.005

2.2 观察组不同疗效患者外周血CD40、CD40L表达及血清BAFF 水平对比

治疗无反应组患者患者外周血CD40、CD40L表达及血清BAFF 水平均明显高于治疗反应组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 ITP 患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平与疗效相关性分析

ITP患者外周血CD40、CD40L表达及血清BAFF水平均与疗效呈显著负相关，（r值分别为-0.691、-0.713、-0.652）。差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表2 观察组不同疗效患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平对比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

表2 观察组不同疗效患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平对比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

组别治疗反应组治疗无反应组t 值P 值n 56 24 CD40 11.63±3.73 15.92±5.09 2.127 0.045 CD40L 5.61±1.14 6.88±1.25 2.237 0.034 BAFF（ng/L）683.08±111.88 804.07±117.65 2.155 0.040

2.4 ROC 分析

ROC 曲线分析结果显示骨髓CD40 对ITP 疗效预测的cutoff 值为12.28 %，AUC 为0.892，灵敏度为83.16%，特异度为92.06%；外周血CD40L 对ITP 疗效预测的cutoff 值为6.08%，AUC 为0.784，灵敏度为81.75%，特异度为90.25%；BAFF 对ITP疗效预测的cutoff值为745.02 ng/L，AUC 为0.708，灵敏度为81.02%，特异度为90.14%。见图1。

图1 ROC 分析图Figure1 ROC analysis chart

3 讨论

临床上出血性疾病中30%为ITP，该病与机体对自身抗原的免疫失耐受密切相关，但对于免疫失耐受的具体作用机制目前尚未被完全阐释［6-7］。ITP 患者自身抗体的产生与血小板、抗原递呈细胞、T 细胞及B 细胞间的相互作用有关。该病的临床治疗难度大，部分患者常规治疗难以起效发展成为难治性ITP。因ITP 发病机制较为复杂，目前尚未完全明确，对于该病的诊断仍以排除性诊断为主，目前尚缺乏特异性较强的实验室诊断依据，因而对于该病的疗效预测的研究进展较慢，而疗效预测对于ITP 治疗方案的选择具有重大的影响，因此寻找合适的ITP 患者疗效预测指标一直是研究的热点。

CD40、CD40L 为特异性免疫系统中共刺激分子重要的一员，其在体液免疫及细胞免疫中均有着重要的作用，目前已有大量研究证实CD40、CD40L 信号传导途径在肿瘤、艾滋病、移植物抗宿主病等多种自身免疫性疾病中发挥重要的作用［8-13］。本研究结果提示了ITP 的发病与CD40、CD40L 有密切的关系。在健康人体内CD40L 仅在激活的T 淋巴细胞表面有暂时性的表达，CD40 在正常情况下表达量也较大，仅在各种病理条件下才会出现明显的上调，CD40L 长时间表达可抑制活化的自身反应性淋巴细胞凋亡而引起自身免疫性疾病，因此其表达水平的高低可对患者的预后情况具有预测作用，预后较好者表达水平相对较高。研究证实ITP 患者的B 淋巴细胞增殖、活化、凋亡等均与健康人群有明显的差异，ITP 患者树突状细胞接受内毒素刺激后释放BAFF 明显较多，对于B 淋巴细胞的存活具有重要的意义［9］。研究显示：当采用大剂量激素进行治疗时，ITP 患者可出现BAFF 水平下调，提示BAFF 可能为ITP 潜在的治疗靶点［14-15］。

综上所述，ITP 患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平明显高于健康人群，无治疗反应患者外周血CD40、CD40L 表达及血清BAFF 水平明显更高，上述指标对ITP 患者疗效具有较高的预测价值。因本研究为单中心研究，样本量较少，取得的结果可能有一定的偏差，下步将扩大样本量进行进一步深入研究。