Tspot.TB在艾滋病合并潜伏结核感染的诊断中的应用

张珍，杨学刚，孟娟，陈振怀，李福建，范伟光

（保定市传染病医院，河北保定071000）

艾滋病（AIDS）和结核感染是威胁人类健康的两大疾病，人类免疫缺陷病毒（HIV）和结核分枝杆菌（MTB）双重感染时会加速疾病进展，目前结核感染是我国AIDS患者最常见的机会性感染和死亡原因之一[1]。我国作为结核高负担地区，约有3.6亿人感染了结核分支杆菌（MTB）[2]，这部分人群一生中有5%～10%有进展为活动性肺结核的可能。而在HIV感染人群中，结核潜伏感染则以每年7%～10%可进展为活动肺结核[3]，故如何有效的提高AIDS患者结核潜伏感染的诊断率显得尤为重要。本研究通过对120例AIDS进行结核相关筛查，探讨T-Spot.TB技术在AIDS合并结核潜伏感染诊断的应用价值。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2017年10月—2018年9月期间，在保定市传染病医院感染科门诊的120例HIV感染者进行MTB筛查。所有患者均符合中华人民共和国卫生部制定的HIV感染诊断标准（HIV抗体初筛和确诊均阳性），并行胸部DR或CT以除外活动性肺结核以及其他类型结核。同时采用问卷调查的形式记录入组患者的性别、年龄、HIV感染时间、CD4和CD8细胞计数、既往有无结核病史、是否服用过结核药物等情况。

1.2 方法

1.2.1 结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验 应用成都生物制品研究所所生产的PPD，在患者前臂掌侧皮内注射0.1 mL（5 IU），72 h后观察结果并判断阴性和阳性结果。

1.2.2 T-Spot.TB检测 采用上海复星长征公司所提供的试剂盒并严格按照说明书进行操作。抽取患者外周静脉血5 mL，免疫力极低者8～10 mL，置于真空肝素抗凝管中。6 h内分离外周血单核细胞（PBMC），用无血清培养液（AIMV）重悬细胞，将细胞浓度调成到2.5×106/mL的标准溶液。分别加入50 μL AIMV 培养液、植物血凝素（PHA）、结核分枝杆菌特异性抗原A和抗原B于相对应的阴性对照孔、PHA对照孔、A和B检测孔，再依次向每孔加入100 μL包含2.5×106/mL的PBMC标准溶液。置于37℃5%CO2培养箱中培养16～20 h。磷酸盐缓冲液（PBS）溶液洗3次，再向每孔加入50 μL酶标记的抗干扰素（IFN）-γ抗体，4℃孵育 1 h，PBS溶液洗脱3次，再向每底物显色溶液50μL，置室温孵育7min，用双蒸馏水洗涤培养板致反应终止。计数每个孔中有颜色斑点数，结果判断：阴性对照孔点数0～5示，检查孔点数-阴性对照孔≥6，判断阳性，反之为阴性。阴性对照孔点数≥6，检查孔点数≥2倍阴性对照孔时判断阳性，反之为阴性。

1.3 统计学分析 采用SPSS19.0进行统计学分析，计数资料（率）采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 CD4细胞计数对T-Spot.TB检测结果的影响 例

2 结果

2.1 一般资料 120例入组AIDS患者中，男109例，女11例，年龄20～63岁，中位年龄43岁。CD4细胞＜200个/μL 者 76例，CD4细胞≥200个/μL 者 44例。感染途径以同性性传播为主，均未接受高效抗逆转录病毒治疗（HAART），接种卡介苗者52例，未接种卡介苗者或不详者68例。

2.2 PPD试验、T-Spot.TB检测结果分析 对入组的120例患者分别进行了PPD试验和T-Spot.TB检测，结果显示PPD试验阳性16例，阳性率为13.3%，T-Spot.TB检测阳性37例，阳性率为30.8%，2种检测方法差异有统计学意义（χ2=18.95，P＜0.05），且 2种方法的一致性差（6例，5%）。

2.3 CD4细胞水平对PPD试验、T-Spot.TB检测结果的影响 按CD4细胞水平将其分为＜200个/μL和≥200个/μL，结果显示T-Spot.TB检测率在2组中分别为32.9%和27.3%，差异无统计学意义（χ2=0.12，P＞0.05）。PPD试验在2组中检测率为9.2%和20.5%，差异无统计学意义（χ2=3.04，P＞0.05）。见表1。

3 讨论

目前结核感染是AIDS最常见的机会性感染，潜伏在AIDS患者体内的MTB在机体免疫力下降时重新被激活而发展成为活动性结核，且MTB感染可以激活CD4阳性淋巴细胞，促进HIV病毒的复制从而加速AIDS的进展[4]。同时尽早明确结核感染并及时干预可减缓疾病进展并降低病死率。因此，在AIDS高危人群中筛查潜伏结核感染显得尤为重要。目前结核潜伏感染诊断没有统一的金标准，最常用的方法有传统的PPD试验和IGRA。但PPD试验作为应用最广的结核筛查手段，受卡介苗的大规模接种和AIDS人群免疫缺陷的影响，导致特异性和敏感性下降，早期研究提示CD4＜200个/μL时PPD试验无反应[5]。T-Spot.TB是检测结核感染的新技术，其原理是人体感染MTB后形成记忆性T淋巴细胞，再次接触MTB抗原后会产生IFN-γ，通过检测IFN阳性细胞数来判断机体是否存在结核感染，不受卡介苗和其他分枝杆菌的影响。研究表明T-Spot.TB诊断普通人群和AIDS人群中结核感染的特异性和灵敏性均高，在结核诊断相关指南中都有提及[6-8]。

本研究对120例合排除活动性结核的AIDS患者进行了T-Spot.TB和PPD检测，并根据不同的分层分组对检测结果进行了统计学分析。结果显示，T-Spot.TB在120例AIDS患者中的阳性率为30.8%。参考目前文献，目前国内报道的AIDS合并潜伏结核感染T-Spot.TB阳性率差异较大，为15.7%～57.4%[9-11]考虑可能与文献入组患者CD4水平分布差异及入组患者来源（门诊、住院）有关。本研究中T-Spot.TB阳性率明显高于PPD，说明TSpot.TB在诊断AIDS合并潜伏结核感染的价值要显著优于PPD试验。

由于CD4细胞200个/μL提示机体免疫功能受损严重，容易合并各种机会性感染，本研究将研究组按照CD4细胞计数分为＜200个/μL和≥200个/μL 2组以分析潜伏结核感染率。结果显示，CD4＜200个/μL时T-Spot检测阳性率虽高于CD4≥200个/μL组，但差异无统计学意义，与国内外报道的T-Spot.TB检测率在CD4细胞计数在＜200个/μL和≥200个/μL时差异无统计学意义相一致[12-13]。可能与AIDS患者在CD4＜200个/μL时更多表现为活动性结核有关，且T-Spot.TB是检测一定数量的PBMC中的干扰素阳性细胞的数量，弥补了CD4细胞的低水平，且CD8细胞亦可分泌IFN-γ，故T-Spot.TB阳性率在CD4细胞＜200个/μL和≥200个/μL时差异无统计学意义。但由于目前尚缺乏潜伏结核感染诊断的金标准，且入选患者无法明确结核病密切接触史，可能对试验产生一定的影响，可通过进一步扩大样本量和更长时间的随访来获得更可靠的数据。

综上所述，本研究表明在AIDS合并潜伏结核感染诊断中T-Spot.TB试验阳性率明显高于PPD试验，有较高的特异性和敏感性，且与患者CD4细胞水平无关。本研究认为，T-Spot.TB试验对AIDS合并潜伏结核感染的诊断有较大的应用价值。