循环miR-26b水平变化与老年高血压患者左心室肥厚及心功能的关系

冯崴，张俊，武文君，高兰兰

目前心血管疾病是全球范围内导致死亡的重要原因，而高血压则是心血管疾病的重要危险因素。近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，我国高血压患病人数激增。作为一种常见的慢性病，高血压以动脉血压持续升高为主要特征，长期发病会使心脏结构及功能发生改变，左心室肥厚及其舒张功能减退是高血压的早期表现，随着病情进展则会出现心室收缩功能减退及心腔扩大，最终导致心力衰竭的发生[1]。左心室肥厚(LVH)是高血压导致的一种常见的靶器官损害，以心肌纤维增多为主要表现，目前其病理生理机制尚未完全阐明，但最新文献报道，微小RNA(miRNAs)参与了心脏发育和重构、心律失常、心肌肥厚等心血管生理病理过程[2]。循环miRNAs即血清和血浆中的miRNAs，在高温、酸碱性、RNA酶等恶劣条件下均能保持极高的稳定性[3]。关于循环微小RNA-26(miR-26b)水平变化与老年高血压患者左心室肥厚及心功能的关系报道较为少见，现检测老年高血压患者循环miR-26b水平变化及超声心动图参数并分析其相关性，以期为高血压左心室肥厚的早期发现及诊断提供一定指导，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1月—2019年10月蚌埠医学院第二附属医院心内科诊治老年高血压患者132例，男80例，女52例，年龄62～85岁，本研究经医院医学伦理委员会审核批准，患者及家属知情同意并签署同意书。

1.2 选择标准 (1)诊断标准：高血压诊断标准参照2018年修订版“中国高血压防治指南”[4]，不使用降压药物，非同日 3次测量诊室血压，舒张压≥90 mmHg和/或收缩压≥140 mmHg。(2)纳入标准：年龄在60岁以上；符合以上高血压诊断标准；均为原发性高血压患者；未接受降血压药物治疗；对本研究积极配合者。(3)排除标准：原发性醛固酮增多症、嗜铬细胞瘤、肾性高血压等继发性高血压患者；先天性心脏畸形；合并肥厚性心肌病、心脏瓣膜病、收缩性心力衰竭等心脏病；某些对心率有影响的疾病或已服用影响心率的药物；有吸烟、饮酒及糖尿病史的患者；合并严重的肝、脾、肺、肾等系统疾病；代谢性疾病和肿瘤患者；接受瓣膜置换术、冠状动脉搭桥术、起搏器植入术及近1年有外科手术史的患者。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 临床资料：收集患者的基本资料，包括性别、年龄、体质量指数(BMI)、病程、入院时舒张压(DBP)和收缩压(SBP)、诱因等。

1.3.2 循环miR-26b水平检测：患者入院次日清晨空腹采取肘静脉血5 ml，离心获取血浆并移入无RNA酶灭菌管中，用Trizol法提取血浆总RNA并用分光光度计进行定量，对miRNAs 3'末端加Poly (A)处理后进行逆转录反应，将合成的cDNA为模板采用SYBR Green Ⅰ法进行实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)。miR-26b上游引物: 5'-ACACTCCAGCTGGGTTTGGTCCCCTTCAAC-3'，下游引物: 5'-GGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3'；同时以U6作为内参基因，上游引物: 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物: 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。以2-ΔΔCt公式计算miR-26b的相对表达量。

1.3.3 生化指标检测：取空腹肘静脉血5 ml，离心后获得血清，采用奥林巴斯AU400全自动生化分析仪检测空腹血糖(FPG)、三酰甘油 (TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、血肌酐(SCr)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。

1.3.4 超声心动图检查： 采用美国 GEVivid7型彩色超声仪，探头频率2.5～3.5 MHz，测量左心室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室射血分数(LVEF)及二尖瓣舒张早期血液流速峰值(E峰)及舒张晚期流速峰值(A峰)，并计算E/A值。取测量3个心动周期的平均值。左心室心肌质量(LVM) 采用Devereux公式计算，LVM =1.04[(LVEDD+IVST +LVPWT)3-LVEDD3]-13.6)，左心室质量指数(LVMI) 再根据体表面积(BSA)计算，LVMI=LVM/BSA。根据美国超声心动图协会推荐的标准[5]，男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2即诊断为LVH。

2 结 果

2.1 2组临床资料比较 根据循环miR-26b水平检测结果，132例患者miR-26b的相对表达量为4.56～16.93，以中位数7.62为分组界值，<7.62纳入miR-26b低水平组(对照组)76例，≥7.62纳入miR-26b高水平组(观察组)56例。2组患者的性别、年龄、BMI、病程、DBP、SBP、高血压分级、诱因及生化指标FPG、TG、TC、LDL-C、HDL-C、HbA1c、ALT、AST、SCr、CK、CK-MB、LDH、hs-CRP、BUN、UA比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 2组患者临床特征比较

2.2 2组超声心动图参数比较 与对照组比较，观察组IVST、LVPWT、LVMI水平及LVH病例数均减少，E/A值升高(P<0.01)。2组患者LVEDD、LVEF比较差异无统计学意义 (P>0.05)，见表2 。

表2 2组患者超声心动图参数比较

2.3 循环miR-26b水平与IVST、LVPWT、LVMI及E/A的相关性 循环miR-26b水平与IVST、LVPWT和LVMI均呈负相关(r=-0.493、-0.526、-0.789，P均<0.001)，与E /A 值呈正相关(r=0.421,P<0.001)。

2.4 2组NYHA心功能分级比较 根据NYHA标准评估结果，对照组心功能减退患者72例(94.74%)，高于观察组26例(41.08%) (χ2=42.861，P=0.000)，见表3。

表3 2组患者NYHA心功能分级比较 [例(%)]

2.5 老年高血压患者左心室肥厚的影响因素分析 Logistic多因素分析结果显示，年龄、IVST、LVPWT及LVMI增加是导致老年高血压患者左心室肥厚发生的独立危险因素(P<0.05)； miR-26b水平升高则是保护因素(P<0.01)，见表4。

表4 老年高血压患者左心室肥厚影响多因素Logistic分析

注：自变量赋值，年龄>75岁=1，≤75岁=0；IVST增加=1，未增加=0；LVPWT增加=1，未增加=0；LVMI男性>125 g/m2、女性>110 g/m2=1，男性≤125 g/m2、女性≤110 g/m2=0； miR-26b≥7.62=1，<7.62=0

2.6 循环miR-26b水平对老年高血压患者左心室肥厚的诊断价值 ROC曲线分析结果显示，miR-26b曲线下面积为0.836，95%CI为0.757～0.916(P<0.05) ，最佳临界值为8.83， 敏感度为81.4%，特异度为78.9%，约登指数为0.603。miR-26b对老年高血压患者LVH有较高的诊断价值，见图1。

图1 miR-26b诊断老年高血压患者LVH的ROC曲线图

3 讨 论

LVH 是高血压的常见并发症之一，长期高血压可增加心脏左心室后负荷，因而导致慢性适应性改变，即LVH的发生[6-7]。心肌重塑及质量增加、心室壁增厚是LVH的重要特征。研究显示高血压患者合并LVH 时发生心律失常的比率显著高于单纯高血压患者[8]。有文献报道[9]，高血压合并LVH 患者冠状动脉储备能力显著下降，导致急性心肌缺血事件极易发生从而使死亡风险增加。高血压伴发LVH是心脑血管事件和死亡发生的独立危险因素，因此及早准确地诊断LVH临床意义重大。目前常用的心电图、磁共振成像及超声心动图等诊断方法均有一定的弊端或局限性[10]，临床上急需找到一种简单并且特异度和敏感度高的诊断方法。

miRNAs为一类在生物进化过程中高度保守的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平具有调控基因表达的作用[11]。在细胞的分化、增殖、迁移、凋亡等多种病理生理过程中均有miRNAs参与。以往文献报道[12]，miRNAs在消化系统、神经系统及生殖系统等疾病中均取得了较大的研究进展。近年来研究发现[13]，miRNAs参与了心脏发育和重构，并且与心肌纤维化、心肌肥大及心力衰竭等多种心血管疾病密切相关。早期研究发现[14]，冠心病患者血浆中miR-26b的表达水平显著低于健康人，miR-26b有望成为辅助诊断冠心病的标志物。赵欣等[15]报道，在建立的小鼠心房纤维化—房颤模型中，miR-26通过抑制心房组织中血管紧张素Ⅱ/Kruppel样因子4/转化生长因子-β (angiotensin / Kruppel like factor 4/transforming growth factor-β,Ang Ⅱ/KLF 4/TGF-β)信号通路的激活，从而起到抗房颤、心房纤维化的效应。本研究检测了132例老年高血压患者静脉血miR-26b水平，结果发现其相对表达量在4.56～16.93之间，中位数为7.62。

为探讨miR-26b水平与LVH发生的关系，本研究分析显示，与对照组相比，观察组室间隔厚度、左心室后壁厚度、左心室质量指数及左心室肥厚病例数均显著减少 (P<0.01)。室间隔厚度和左心室后壁厚度决定了左心室质量指数，而左心室质量指数可直接作为衡量左心室肥厚的重要临床指标，左心室质量指数值越大则左心室肥厚越严重[16]。该结果提示循环miR-26b水平越低，越容易发生左心室肥厚，且与伍崇海[17]报道相符。二尖瓣舒张早期血液流速峰值下降，舒张晚期流速峰值升高，则两者比值(E/A值)下降，E/A值<1，说明左心室舒张功能下降[18]。文献报道[19]，老年高血压伴发左心室肥厚患者常出现左心室舒张功能下降。本研究显示，2组患者E/A值均<1，且对照组显著低于观察组 (P<0.01)。提示2组患者均出现左心室舒张功能不全，且miR-26b水平越低越严重。最新研究表明，抑制miR-26b后可使脂肪细胞分化被有效抑制，抑制miR-26b对细胞增殖有促进作用。推测可能是miR-26b水平较低的老年高血压患者，更利于心肌细胞增殖且发生代偿性肥大，心肌间质胶原随之增多，心肌发生纤维化样变，持续肥厚的心肌出现功能和生化反应异常，使其顺应性和僵硬度均发生改变，进而心脏舒张功能出现进行性下降，最终导致心脏舒张功能不全。相关性分析结果显示，循环miR-26b水平与室间隔厚度、左心室后壁厚度和左心室质量指数均呈负相关(P均<0.01)，与E /A 值呈正相关(P<0.01)。根据NYHA标准评估显示，miR-26b低水平组心功能减退比例显著高于miR-26b高水平组(P<0.05)。以上结果均证实miR-26b水平低的老年高血压患者更容易合并左心室肥厚及心功能减退。

多因素分析结果显示，年龄、室间隔厚度、左心室后壁厚度及左心室质量指数增加是导致老年高血压患者左心室肥厚发生的独立危险因素(P<0.05)；miR-26b水平升高是保护因素(P<0.05)。有研究指出[20]，随着年龄的增加，心肌细胞体积增大，心脏胶原成分和心脏质量增加，长期超负荷压力及左心室适应性反应衰竭可能导致了左心室肥厚的发生，因而老年患者LVH的发生率升高。室间隔厚度和左心室后壁厚度增加，左心室质量指数随之增加，当男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2时即诊断为左心室肥厚。以往研究报道，大鼠心脏肥厚组织中miR-26a和miR-26b表达下调，并且通过对靶点糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)进行抑制以调控心脏肥厚过程[21]。本研究结果提示，miR-26b在老年高血压患者心室肥厚过程亦发挥了调控作用，但其作用机制有待进一步研究。ROC曲线分析显示，曲线下面积为0.836，95%CI为0.757～0.916，最佳临界值为8.83，敏感度81.4%，特异度78.9%，提示miR-26b相对表达量<8.83即可诊断为心室肥厚，且具有较高的敏感度和特异度。

综上，循环miR-26b水平与老年高血压患者左心室肥厚呈负相关，与左室舒张功能呈正相关，是老年高血压患者发生左心室肥厚伴舒张功能不全的保护因素，同时可作为潜在的生物标志物用于老年高血压患者左心室肥厚的诊断。今后需进一步开展循环miR-26b对左心室肥厚发挥保护作用机制的研究。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

冯崴：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；张俊：提出研究思路，分析试验数据，论文审核；武文君、高兰兰：实施研究过程，资料搜集整理，论文修改