一例种鸭场沙门氏菌和大肠杆菌混感的临床诊治

刘存霞 张华 盛媛 刘丽萍 刘娜 田雪 路晓 吴静 刘玉山 王林 宋敏训

摘  要：雏鸭沙门氏菌病是由沙门氏菌感染引起的一种急性流行性传染性疾病，具有很高的致死率。某种鸭场临床上出现雏鸭零星死亡，采食量下降，剖检可见浆膜炎、包心包肝、肝脏肿大出血、脾脏出血坏死，送检样品经细菌分离、镜检、PCR检测，鉴定为沙门氏菌、大肠杆菌混合感染，根据药敏试验结果，联合使用头孢曲松钠、氟苯尼考治疗，效果显著。

关键词：鸭;沙门氏菌;大肠杆菌;混感

中图分类号：S858.32     文献标识码：C     文章编号：1673-1085（2020）3-0040-03

沙门氏菌病（Salmonellosis）是由肠杆菌科一个重要菌属沙门氏菌属（Salmonella）感染人和各种动物引起的慢性和急性疾病的总称[1，2]。被沙门氏菌污染的家禽及其他产品可以经食物链传播给人，造成人的食物中毒，严重者甚至死亡[3]。沙门氏菌在成年家禽体内主要以隐性感染存在，通常不表现出明显的临床症状而长期带菌垂直传播，目前，我国防控沙门氏菌的核心方法仍是种群净化，以防止病原进入种禽场生产链导致后代禽群受感染[4，5]。近年来随着种鸭养殖产业不断向集约化、规模化方向发展，易发生沙门氏菌及大肠杆菌混感，给养殖企业造成不可挽回的经济损失。

1  材料与方法

1.1  试剂  Simply P病毒DNA/RNA共提取试剂盒购自杭州博日科技有限公司，HiScript II One Step RT-PCR Kit购自Vazyme公司（南京诺唯赞生物科技有限公司），药敏试剂片购自温州市康泰生物科技有限公司，鸡白痢血清平板凝集标准抗原购自青岛易邦生物工程有限公司。

1.2  临床症状及剖检  2019年11月，某种鸭场的雏鸭自7日龄免疫鸭黄病毒及鸭肝炎疫苗后出现大面积死亡，采食量略有下降，伴有少量呼吸道症状，同场父母代种蛋鸭产蛋量由90%下降至80%，孵化率下降。送检10日龄病死鸭，雏鸭瘦弱，剖检可见浆膜炎、包心包肝、脾脏出血坏死，肝脏肿大有出血，见图1、图2、图3。

1.3  样品采集与处理  采集病死雏鸭的病变肝脏、脑组织，孵化器中的死胚和饮水进行细菌分离。取病死鸭的肝脏、脾脏、脑组织按体积1：4加入无菌生理盐水研磨，加入终浓度1000U双抗，4℃作用2h，冻融3次，8000rpm/min离心10min取上清-20℃保存备用。另外采集种鸭、雏鸭血液分离血清，4℃保存备用。

1.4  细菌分离培养  取病变肝脏、脾脏无菌条件下用接种环挑取组织涂5%血清LB平板;鸭脑无菌剥离头盖骨，挑取脑中组织涂于5%血清LB平板;死亡胚胎外表用75%酒精消毒，无菌取卵黄液，接种于5%血清LB平板，37℃培养过夜，取200μL水样涂5%血清LB平板，分离的细菌进行镜检及PCR检测。

1.5  血清学检测  将采集分离的种鸭、雏鸭血清样本利用平板凝集试验检测沙门氏菌抗体。

1.6  PCR检测

1.6.1  病料检测  取处理匀浆液200μL，按Simply P病毒DNA/RNA共提取试剂盒操作说明提取核酸，用实验室设计合成的检测引物分别检测鸭肝炎病毒、鸭黄病毒、鸭呼肠孤病毒、腺病毒、鸭圆环病毒、鸭瘟病毒。

1.6.2  细菌检测  利用PCR方法对分离的细菌进行沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌检测。

1.7  药敏试验  取细菌分离培养的单菌落，以生理盐水稀释后涂布于5%血清LB平板上，选取克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢噻肟、头孢曲松、红霉素药敏片贴于平板上，37℃培养过夜，用游标卡尺量取抑菌圈直径。

2  结果与分析

2.1  细菌分离及血清学检测结果  从肝脏、脑、死胚卵黄中均分离出细菌，见图4。

其中从死胚卵黄中分离到两种大小、形态不同的细菌，经革兰氏染色，均为阴性杆菌。饮用水细菌分离为阴性。经过平板凝集方法检测种鸭、雏鸭血清样本均为阴性。

2.2  PCR检测结果  肝脏、脾脏和脑组织检测鸭肝炎病毒、鸭黄病毒、鸭呼肠孤病毒、腺病毒、鸭圆环病毒、鸭瘟病毒均为阴性;死胚卵黄中分离到的两种细菌经检测分别为沙门氏菌和大肠杆菌阳性，病死雏鸭肝脏和脑中分离到的细菌经检测均为大肠杆菌阳性。

2.3  药敏试验  取本实验室分离到的沙门氏菌和大肠杆菌，分别用克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢噻肟、头孢曲松、红霉素进行药敏试验。结果显示，氟苯尼考、头孢噻肟、头孢曲松、丁胺卡那为高度敏感，见表1、表2所示。

2.4  治疗  根据药敏试验结果，联合使用头孢曲松钠、氟苯尼考进行治疗，疗效较显著，病死率逐渐下降。推荐加强种蛋入孵前的消毒及孵化器清洁消毒，取得了很好的效果。

3  讨论

种禽场沙门氏菌病是一种危害非常严重的细菌性传染性，因其是一种条件致病菌，且可垂直傳播也可水平传播，给该病的防控带来较大困难。目前，该病的防控主要通过持续不断的检疫和淘汰沙门氏菌阳性种禽来完成种禽场净化。该种禽场一直严格按照标准化生产模式管理，此次雏鸭出雏后即出现大量弱雏，7日龄免疫后死亡率突然增高，经核酸检测，鸭肝炎病毒、鸭黄病毒、鸭呼肠孤病毒、腺病毒、鸭圆环病毒、鸭瘟病毒均为阴性，从肝脏和脑中分离到大肠杆菌。进而对种鸭、孵化设施、饮水、死胚进一步检测，结果从死胚中分离到沙门氏菌和大肠杆菌，推测孵化过程中存在沙门氏菌、大肠杆菌混合感染。根据药敏试验结果联合使用头孢曲松钠和氟苯尼考，疗效较显著。通过加强种蛋入孵前的消毒及孵化器清洁消毒，使该病得到有效控制。

综上所述，做好种禽场种源输入检疫、严格的生产管理及卫生消毒对防控鸭沙门氏菌传播具有重要意义。

参考文献：

[1]  齐静，王守荣，李兰波，等.山东省肉鸭沙门氏菌的分离鉴定及敏感抗菌药物的筛选[J].中国畜牧兽医，2014，41（07）：216-220.

[2]  曲歌，沙万里，高雪，等.吉林地区规模化猪场大肠杆菌和沙门氏菌性仔猪腹泻流行情况调查[J].安徽农业科学，2020，48（03）：89-90+100.

[3]  王菲，张玲，杨佳怡，等.基于实时荧光定量PCR检测的沙门氏菌标准物质验证研究[J/OL].食品与发酵工业：1-9[2020-03-17].https：//doi.org/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022950.

[4]  王红宁.蛋鸡沙门氏菌病净化研究[J].中国家禽，2012，34（01）：37.

[5]  卢国强.种鸡场鸡白痢沙门氏菌病的净化[J].北方牧业，2019（16）：26-27.

基金项目：山东省农业科学院青年科研基金（2015YQN54）;山东省现代农业产业技术体系家禽产业创新团队（SDAIT-11-01）;山东省农业科学院农业科技创新工程（CXGC2016A10）;山东省农业科学院农业科技创新工程学科团队（CXGC2018E11）。

作者简介：刘存霞（1980-），女，山东东营人，博士，副研究员，主要从事动物分子病毒学及流行病学研究，E-mail：liucunxia9@163.com。

通讯作者：宋敏训（1963-），男，研究员，主要从事家禽免疫与防控技术研究，E-mail：mxsong@aliyun.com。