sVAP-1在慢性乙型肝炎患者血清中的表达水平及临床意义

张玉枝 韩正宇 耿建洪

慢性乙型肝炎是消化内科及感染科的常见疾病，发病率较高[1]。乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致慢性肝病、肝硬化、肝细胞癌等的重要原因之一，现已成为严重威胁人类健康的传染性疾病[2]。慢性乙型肝炎的发病机制尚未完全阐明，目前研究表明，免疫细胞及相关炎性介质与HBV清除及肝脏炎性损伤有关[3]。血管黏附蛋白-1(VAP-1)是一种内皮细胞黏附分子，主要由肝脏产生，其可通过蛋白酶水解为可溶性血管黏附蛋白-1(sVAP-1)，参与人体血液循环，具有促炎作用[4]。Weston等[5]的研究表明，VAP-1与细胞外基质的重塑及肝纤维化密切相关，在肝脏疾病中具有多种功能。HBV是慢性乙型肝炎的致病原，HBV DNA水平可反映机体内HBV复制的活跃程度。本研究探讨sVAP-1水平与慢性乙型肝炎患者HBV DNA水平、肝功能指标的相关性，以期为慢性乙型肝炎的治疗提供一定参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本试验选择2018年1月至2019年1月沧州市人民医院收治的96例慢性乙型肝炎患者作为研究对象，将患者分为HBV DNA阳性组(HBV DNA>1.0×103拷贝/mL)60例和HBV DNA阴性组(HBV DNA≤1.0×103拷贝/mL)36例[6]。另选择50名同期健康体检者作为正常对照组。纳入标准：(1)符合《病毒性肝炎防治诊断标准》[7]中乙型肝炎的诊断标准；(2)年龄为18～65岁；(3)患者均签署知情同意书。排除标准：(1)其他病毒引起的肝炎；(2)患有酒精性肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝炎等其他肝病；(3)合并其他感染性疾病或自身免疫性疾病；(4)患有肿瘤；(5)有严重的脏器功能损伤；(6)妊娠、哺乳期妇女。本研究经本院医学伦理委员会批准。

HBV DNA阳性组60例患者中，男性38例，女性22例；年龄为20～65岁，平均年龄为(41.35±6.87)岁；体质指数(BMI)为18.12～27.35 kg/m2，平均BMI为(21.92±2.83)kg/m2。HBV DNA阴性组中，男性20例，女性16例；年龄18～63岁，平均年龄为(41.95±6.46)岁；BMI为18.25～27.59 kg/m2，平均BMI为(22.10±2.76)kg/m2。正常对照组中，男性30例，女性20例；年龄21～65岁，平均年龄为(42.29±7.12)岁；BMI为18.11～27.73 kg/m2，平均BMI为(22.34±2.82)kg/m2。各组的一般资料的差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

(1)血液样本的采集：于清晨空腹时，应用肝素钠抗凝真空采集管采集患者的肘静脉血5 mL，以3 000 r/min离心10 min后，收集上清液分装至冻存管，于-70 ℃冰箱保存待检。同期采血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb)、总胆红素(TBil)及HBV DNA水平。(2)采用酶联免疫吸附法检测sVAP-1的表达水平，试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 慢性乙型肝炎患者体内血清sVAP-1水平分析

sVAP-1在慢性乙型肝炎组患者血清中的表达水平显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 慢性乙型肝炎组与正常对照组的血清sVAP-1水平比较 ()/ng·mL-1

2.2 慢性乙型肝炎HBV DNA阳性/阴性患者血清sVAP-1水平比较

血清sVAP-1在慢性乙型肝炎HBV DNA阳性组中的表达水平高于HBV DNA阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组患者的血清sVAP-1水平比较()/ng·mL-1

注：与正常对照组比较，aP<0.05；与HBV DNA阴性组比较，bP<0.05

2.3 慢性乙型肝炎HBV DNA阳性/阴性患者的肝功能指标比较

慢性乙型肝炎HBV DNA阳性/阴性患者的ALT、AST、TBil水平显著高于正常对照组，Alb水平显著低于正常对照组(P<0.05)。HBV DNA阳性组ALT、AST、TBil水平显著高于HBV DNA阴性组，Alb水平显著低于HBV DNA阴性组(P<0.05)。见表3。

表3 各组患者的肝功能指标比较 ()

注：与正常对照组比较，aP<0.05；与HBV DNA阴性组比较，bP<0.05

2.4 慢性乙型肝炎患者sVAP-1与HBV DNA及肝功能指标的相关性分析

sVAP-1与HBV DNA、ALT、AST、TBil呈正相关(P<0.05)，与Alb呈负相关(P<0.05)。见表4。

表4 慢性乙型肝炎患者sVAP-1与HBV DNA及肝功能指标的相关性分析

3 讨论

慢性乙型肝炎是常见的消化系统疾病，可导致HBV在患者体内持续复制，造成免疫病理损伤，现已成为全球性公共卫生问题[8]。目前，临床上治疗慢性乙型肝炎仍以抗病毒治疗为主，但相关药物只能起到抑制HBV复制的作用，而不能彻底杀灭病毒，导致疗效欠佳[9]。因此，使机体产生有效的免疫应答是抑制HBV复制的关键，也是临床研究的重要方向。VAP-1是一种膜结合的胺氧化酶，具有双重功能，可通过细胞黏附作用显示促炎效应，还可通过酶反应产物上调多种促炎介质的表达水平，引发炎性反应[10-12]。国外研究显示，肝硬化患者中VAP-1的表达水平升高，纤维化肝病患者循环中sVAP-1的水平也明显升高，该研究进一步发现，VAP-1不仅支持淋巴细胞和肝星状细胞的募集，而且可调节细胞外基质的重塑及肝纤维化形成，提示VAP-1在肝脏疾病中具有多种功能[13]。Kraemer等[14]研究发现，慢性丙型肝炎感染者血浆VAP-1水平随着纤维化的严重程度增高而升高，并且在肝硬化患者中显著升高，该研究还推测血浆VAP-1水平可能是监测慢性肝病患者随访过程中纤维生成的一项指标。VAP-1具有致炎效应，在炎性疾病患者中的表达水平较高，而且常以水解形式(即sVAP-1)参与炎性反应的发生机制，肝脏是产生VAP-1的重要器官，但目前关于sVAP-1在肝脏疾病中作用的报道较少。

本研究结果显示，慢性乙型肝炎组中血清sVAP-1水平显著高于正常对照组。Weston等[15]研究显示，在炎性肝病患者的肝脏组织和血清中VAP-1表达上调，与本研究结果相符。该研究还发现，小鼠肝损伤模型中VAP-1的缺失或VAP-1酶功能的抑制可减少炎性细胞向肝脏募集，并减轻纤维化。因此，靶向VAP-1在抑制肝脏炎性反应和纤维化方面具有潜在的治疗作用。

本研究结果显示，HBV DNA阳性组的血清sVAP-1水平高于HBV DNA阴性组，经相关性分析发现，sVAP-1水平与HBV DNA水平呈正相关。目前已有研究证实，慢性乙型肝炎患者的血清HBV DNA水平与肝实质损伤、肝脏储备能力及肝组织纤维化密切相关，可在一定程度上反映慢性乙型肝炎患者病情的严重程度[16]。sVAP-1可介导炎性反应，反映肝脏炎性损伤及肝纤维化，推测其也可能参与了慢性肝病的进展。另外，HBV感染、治疗与患者免疫应答有关，但慢性乙型肝炎患者常不能产生有效的免疫应答，因此对HBV的清除一直是临床治疗的难题。HBV DNA疫苗可有效引起机体对HBV的免疫反应，但其在体内长期存在是否会引起严重不良反应目前尚未可知，其安全性问题也一直是HBV DNA疫苗不能应用于临床的重要阻碍[17]。本次研究结果指出，sVAP-1水平与HBV DNA呈正相关，可能参与了慢性乙型肝炎的进展过程，而且其还可直接介导机体内炎性反应，参与免疫调节，或许对慢性乙型肝炎的治疗具有重要的潜在意义。目前已有研究表明，sVAP-1与炎性疾病、糖代谢相关疾病、慢性阻塞性肺病等有关，相关免疫抑制剂也在动物模型中显示出显著的疗效及良好的安全性[18-19]。因此，sVAP-1可能对慢性乙型肝炎的治疗有重要意义，具有很好的应用前景。

ALT、AST、TBil水平是反映肝脏炎性损伤的重要指标，Alb是反映肝脏代谢功能的重要指标，有文献报道，肝脏的炎性活动度较高时机体合成Alb的能力减弱[20]。本研究结果显示，HBV DNA阳性组ALT、AST、TBil水平显著高于HBV DNA阴性组，Alb水平显著低于HBV DNA阴性组，提示HBV DNA阳性组的肝损伤程度比HBV DNA阴性组更严重，提示HBV复制的活跃程度越高，肝脏损伤越严重，与既往研究的结果相符[21]。本研究结果指出，sVAP-1水平与ALT、AST、TBil水平呈正相关，与Alb水平呈负相关，提示sVAP-1与肝脏炎性损伤有关，推测sVAP-1可能显示致炎特征，参与慢性乙型肝炎患者的肝脏炎性损伤过程。

综上所述，慢性乙型肝炎患者的血清sVAP-1表达水平升高，且其表达水平与HBV DNA水平、肝脏炎性损伤程度有关，有望成为监测慢性乙型肝炎患者病情的有效指标，为临床治疗提供新思路。