子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达变化及其临床意义

张宇靖，腾红，周炫妤

中国人民解放军92493部队医院，辽宁葫芦岛125001

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，占女性恶性肿瘤总数的4%～7%[1]。与欧美发达国家相比，我国子宫内膜癌的发病率总体处于较低水平，但近年来持续上升并呈年轻化趋势[1,2]。浸润和转移是影响恶性肿瘤治疗效果和患者预后的重要因素[3]。因此，探索敏感性高、特异性强的肿瘤标志物对恶性肿瘤早期诊断、预测病情和预后具有重要意义。随着肿瘤发病分子机制研究的不断深入，发现了多种与肿瘤发生、发展相关的因子[4]。E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种主要在上皮细胞膜表达的跨膜糖蛋白，能够介导上皮细胞间的黏附连接，对维持正常上皮细胞形态和结构完整具有重要作用。研究发现，在非小细胞肺癌、肝癌、结直肠癌等恶性肿瘤组织中E-cadherin异常表达，并与肿瘤进展和患者预后密切相关[5～7]。跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)属于Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白家族成员之一。研究发现，TMPRSS4表达上调能够介导肿瘤细胞的恶性增殖、侵袭和迁移，从而参与前列腺癌、乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤的发生、发展[8～10]。但目前E-cadherin、TMPRSS4表达变化与子宫内膜癌发生、发展的关系尚不清楚。为此，本研究观察了子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达变化，并探讨其表达变化与肿瘤进展和患者预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2014年5月～2016年5月中国人民解放军92493部队医院收治的子宫内膜癌患者93例(观察组)。所有患者经术后组织病理检查明确诊断。纳入标准：①符合子宫内膜癌诊断；②初诊；③接受子宫切除手术，包括广泛子宫切除手术联合双侧附件切除手术或盆腔淋巴结清扫术以及筋膜外全子宫切除术；④术前未接受任何抗肿瘤治疗；⑤预计生存时间>6个月；⑥临床病理资料和随访资料完整。排除标准：①合并心、肝、肾等重要脏器严重功能障碍或凝血功能障碍者；②合并急慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病或其他部位恶性肿瘤者；③术前接受任何抗肿瘤治疗者；④妊娠期或哺乳期女性；⑤合并其他恶性肿瘤者。患者年龄29～73(60.87±10.24)岁，其中<60岁41例、≥60岁52例；绝经状态：绝经前34例，绝经后59例；组织学类型：腺癌72例，鳞癌21例；FIGO分期[11]：Ⅰ、Ⅱ期58例，Ⅲ、Ⅳ期35例；组织分化程度：低未分化37例，高中分化56例；浸润深度：未浸润31例，浅肌层38例，深肌层24例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移63例。同期随机选择中国人民解放军92493部队医院收治的，因阴道流血行诊断性刮宫并经组织病理检查证实为正常子宫内膜患者45例(对照组)，年龄30～76(58.92±11.35)岁。两组年龄具有可比性。本研究经中国人民解放军92493部队医院医学伦理委员会批准，所有研究对象或其家属知情同意。

1.2 E-cadherin、TMPRSS4表达检测 采用免疫组化SP法。取手术切除的子宫内膜癌组织和诊断性刮宫获取的正常子宫内膜组织，4%多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。然后将切片置于65 ℃烤箱烘片30 min，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性，柠檬酸抗原修复液(pH 6.0)加热修复抗原，自然冷却至室温。山羊血清封闭液封闭后，分别加入兔抗人E-cadherin、TMPRSS4一抗，4 ℃过夜。次日加入HRP标记的二抗室温孵育20 min后，加入链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物37 ℃孵育30 min，DAB染色，苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知E-cadherin、TMPRSS4阳性切片作为阳性对照。

采用双盲法由两位病理科医师独立阅片。E-cadherin、TMPRSS4阳性染色主要定位于胞质中，呈棕褐色或深褐色颗粒。每张切片随机选取5个400倍视野，评估染色强度，并计算阳性细胞比例。染色强度：未着色为0分，浅棕色为1分，棕色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例：无阳性细胞为0分，≤25%为1分，>25%～<50%为2分，≥50%为3分。以染色强度和阳性细胞比例综合评估阳性表达[12]，二者评分乘积≥1即为阳性表达。

1.3 随访 子宫内膜癌患者术后采用门诊、电话等形式定期随访，术后2年内每3个月随访1次、术后第3年开始每6个月随访1次，共随访时间为3年。终点事件为患者死亡。统计患者生存时间，计算3年生存率。

1.4 统计学方法 采用SPSS24.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验或秩和检验。相关性分析采用Spearman秩相关分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组E-cadherin、TMPRSS4表达比较 观察组与对照组E-cadherin阳性表达率分别为38.71%(36/93)、73.33%(33/45)，TMPRSS4阳性表达率分别为78.49%(73/93)、31.11%(14/45)。观察组E-cadherin阳性表达率低于对照组，TMPRSS4阳性表达率高于对照组(χ2分别为14.542、29.224，P均<0.05)。

2.2 子宫内膜癌组织E-cadherin表达与TMPRSS4表达的关系 Spearman秩相关分析显示，子宫内膜癌组织E-cadherin表达与TMPRSS4表达呈负相关关系(rs=-0.672，P<0.05)。

2.3 子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达与患者临床病理特征的关系 子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达均与FIGO分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)，而与年龄、绝经状态、组织学类型无关(P均>0.05)。见表1。

2.4 子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达与患者预后的关系 截至随访日期，共随访17～36个月，中位随访时间为25个月，死亡37例，无失访病例。

子宫内膜癌组织E-cadherin阳性表达者生存时间22～35个月、中位生存时间29个月，3年生存率为80.56%(29/36)；E-cadherin阴性表达者生存时间16～31个月、中位生存时间24个月，3年生存率为47.37%(27/57)。子宫内膜癌组织E-cadherin阳性表达者中位生存时间、3年生存率均高于E-cadherin阴性表达者(χ2分别为9.053、7.231，P均<0.05)。

子宫内膜癌组织TMPRSS4阳性表达者生存时间15～29个月、中位生存时间22个月，3年生存率为53.42%(39/73)；TMPRSS4阴性表达者生存时间27～36个月、中位生存时间32个月，3年生存率为85.00%(17/20)。子宫内膜癌组织TMPRSS4阳性表达者中位生存时间、3年生存率均低于TMPRSS4阴性表达者(χ2分别为12.521、16.085，P均<0.05)。

表1 子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达与患者临床病理特征的关系

3 讨论

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，是女性生殖系统三大常见恶性肿瘤之一，多发生于围绝经期和绝经后妇女。近年来随着我国经济快速发展和居民生活方式转变，子宫内膜癌的发病率逐年升高并呈年轻化趋势，已成为威胁女性健康和生活质量的主要疾病之一。子宫内膜癌早期以手术治疗为主，治疗效果较好，中晚期多采取手术联合放化疗治疗，患者预后较差，5年生存率较低。目前认为，浸润和转移是导致子宫内膜癌患者预后较差的重要因素[13,14]。因此，早期诊断子宫内膜癌，对临床制定针对性干预措施具有重要意义。但目前缺少有效的早期子宫内膜癌筛查手段。

E-cadherin是一种存在于上皮细胞膜表面的细胞黏附分子，能够介导上皮细胞间的黏附连接，同时还具有细胞骨架，对维持正常上皮细胞形态和结构完整具有重要作用。研究证实，在多种恶性肿瘤组织中E-cadherin异常表达，并与肿瘤进展和患者预后密切相关展[15]。Lopez-Verdin等[16]研究发现，E-cadherin表达下调能够使细胞间的黏附作用降低，进而促进恶性肿瘤的侵袭和转移。武鸿彪等[17]研究发现，E-cadherin能够参与直肠癌的发生、发展，并可作为评估患者预后的分子标志物。Jang等[18]研究发现，E-cadherin在胃癌组织中表达下调，并与患者临床病理特征密切相关，可作为胃癌辅助诊断和预后评估的重要分子标志物。TMPRSS4属于Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白家族成员之一，具有水解蛋白酶体、介导细胞内外的多种传导信号途径等作用。有研究发现，TMPRSS4能够通过激活uPA/uPAR受体系统和解整合素-金属蛋白酶受体系统，引起Src、FAK、ERK、Rac1、JNK等信号传导异常活化，继而导致恶性肿瘤的发生、发展[19]。Mahati等[20]研究发现，TMPRSS4表达上调与肝癌的发生、发展密切相关，具有作为肿瘤诊断、病情评估和预后判断肿瘤标志物的潜能。有研究还发现，TMPRSS4表达上调能够促进肿瘤细胞的恶性增殖、侵袭和迁移，从而促进甲状腺癌[21]、结肠癌[22]等恶性肿瘤的发生、发展。但目前E-cadherin、TMPRSS4表达变化与子宫内膜癌发生、发展的关系尚不清楚。

本研究结果发现，观察组E-cadherin阳性表达率低于对照组，TMPRSS4阳性表达率高于对照组，提示在子宫内膜癌组织存在E-cadherin、TMPRSS4异常表达现象，其异常表达能够参与子宫内膜癌形成。E-cadherin正常表达对维持上皮细胞形态和结构完整具有重要作用，当其表达下调或表达缺失时，可引起肿瘤细胞恶性增殖，从而促进肿瘤的发生、发展。TMPRSS4与相应细胞因子作用可使蛋白酶激活，进而启动肿瘤相关基因表达，促进肿瘤细胞增殖并抑制其凋亡。本研究结果发现，子宫内膜癌组织E-cadherin、TMPRSS4表达均与FIGO分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移有关，而与年龄、绝经状态、组织学类型无关。提示E-cadherin、TMPRSS4表达变化与子宫内膜癌侵袭和转移密切相关，可作为评估子宫内膜癌病情程度的分子标志物。本研究结果发现，子宫内膜癌组织E-cadherin表达与TMPRSS4表达呈负相关关系，提示E-cadherin、TMPRSS4可能通过相互作用共同介导子宫内膜癌的侵袭和转移。在子宫内膜癌中E-cadherin表达与TMPRSS4表达具体的作用机制尚不完全清楚，可能是E-cadherin表达下调能够减弱肿瘤细胞间的黏附作用，使肿瘤细胞从原始部位脱离或穿过基底膜侵犯周围组织；TMPRSS4表达上调能够促进肿瘤新生血管生成，促进恶性肿瘤的浸润和转移；TMPRSS4通过介导整合素α5表达及其信号传导途径，抑制E-cadherin表达，诱导肿瘤细胞侵袭和迁移。本研究结果还发现，子宫内膜癌组织E-cadherin阳性表达者中位生存时间、3年生存率均高于E-cadherin阴性表达者；子宫内膜癌组织TMPRSS4阳性表达者中位生存时间、3年生存率均低于TMPRSS4阴性表达者。提示E-cadherin、TMPRSS4异常表达与子宫内膜癌患者预后密切相关，有可能作为子宫内膜癌预后评估的分子标志物。

综上所述，子宫内膜癌组织E-cadherin表达下调、TMPRSS4表达上调，二者表达变化与子宫内膜癌的发生、发展和患者预后密切相关。E-cadherin、TMPRSS4有可能成为子宫内膜癌早期诊断、病情评估和预后判断的生物标志物。