水朝阳草薄层色谱鉴别方法的建立

贵州省铜仁市食品药品检验所，贵州 铜仁 554300

水朝阳草为菊科旋覆花属植物水朝阳花Inulahelianthus-aquaticaC.Y.Wu ex Ling.的新鲜或干燥地上部分。夏、秋二季采割，鲜用或干燥[1]。水朝阳草始载于《滇南本草》，《滇南本草》调其“生水内,花朝阳”，故名水朝阳草。菊科旋覆花属植物中绿原酸有较广泛的抑菌作用，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等诸多药理作用。近年来发现许多有机酸具有多方面的生理活性，如绿原酸、异绿原酸具有很强的抗菌作用[2]。为有效控制水朝阳草药材质量，本文以绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为对照，采用薄层色谱法鉴别，操作简便、结果直观。

1 仪器与材料

1.1 仪器 KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ，梅特勒XPE56电子天平。

1.2 材料 绿原酸(批号：110753-200413)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(批号：111782-201204)中国食品药品检定研究院。水为纯化水，其他试剂为分析纯。水朝阳草样品分别采集自贵州龙里、开阳、清镇 (见表1)，且所有样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。

表1 水朝阳草样品采集信息

2 方法与结果

2.1 提取方法的考察 称取S1样品2 g 3份，分别按下述方法处理后作为供试品溶液：①加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。②加石油醚(30～60 ℃)20 mL，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。③加石油醚(30～60 ℃)40 mL，超声处理20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

取上述供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果：方法①主斑点不清晰; 方法②主斑点不清晰; 方法③主斑点清晰，薄层色谱图展距适中，故选择方法③为供试品溶液的制备方法。

2.2 展开剂的考察 取S1样品按提取方法③制成供试品溶液，取供试品溶液10 uL、对照品溶液各5 μL点于聚酰胺薄膜上，分别在下述展开系统中展开:①甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.5)。②冰醋酸。③甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液。展开后，取出晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:系统①分离效果差，对照品斑点未显出; 系统②对照品3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸斑点清晰，但与绿原酸对照品对应斑点未分开，未达到理想的分离效果; 系统③两个主斑点清晰，分离效果好。因此选择③为水朝阳草薄层色谱鉴别的展开剂。

2.3 耐用性考察

2.3.1 温度的考察 进行低温 (7℃) 、室温(20℃) 、高温(40℃) 的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。

2.3.2 湿度的考察进行低湿度(28%) 、中等湿度(58%) 和高湿度(88%)的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。

2.3.3 不同生产厂家聚酰胺薄膜的考察 取S1样品按提取方法③制成供试品溶液，取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL点于聚酰胺薄膜上，①为国药集团化学试剂有限公司生产的聚酰胺薄膜②为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产的聚酰胺薄膜。结果：两个厂家聚酰胺薄膜都能较好分离，未有明显差异。

2. 4 水朝阳草的薄层色谱鉴别 取本品粉末2 g，加石油醚(30～60 ℃)40 mL，超声处理20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验(通则0502)，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图1所示。

3 讨论

水朝阳草具有降气化痰、祛风除湿功效。主咳嗽痰多，胞闷气喘，风湿痹痛[3]，用于治疗咳嗽痰多，胸闷气喘，风湿性关节炎和外伤骨折疼痛等，是我国民间常用的中草药之一。体外癌细胞株筛选实验证明水朝阳草有抗癌作用，对多种实体癌具有不同程度的抑制作用，对人体肺癌、口腔表皮细胞癌等6种癌细胞具有杀灭作用[4、5]。2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收载的水朝阳草只有性状描述，缺乏必要的质量控制项目。本实验从提取方法、展开系统考察等方面对水朝阳草进行了系统研究，最终选出上述薄层鉴别方法，在该实验过程中，同时进行了水朝阳花的薄层研究，该方法同样适合水朝阳花的薄层鉴别，如图1所示。该方法分离效果好、专属性强、斑点清晰，为更好地控制水朝阳草质量提供了科学依据。