真菌检测技术研究进展

王珲

摘要：随着科技水平的不断提高，越来越多的人开始重视真菌检验方面的相关技术。现阶段，相关人员主要使用三种方式对单一的真菌进行检测：薄层层析法以及高效液相色谱法还有酶联免疫吸附法等。这篇文章主要对真菌的检测进行了仔细的讨论，简单的讲述了一下近些年专业人士在这方面的新技术以及新动态。对有关真菌毒素方面的检测指明了方向，为食品安全行业提供了参考性依据。

关键词：真菌毒素;快速检测;多组分检测

前言：

真菌毒素属于真菌的代谢性产物，严格意义上来说与真菌的生长发育都没有太大关系。多数人认为所有的代谢性产物都有毒，这个观点是不正确的。真菌属于一个异类，即可以一对多，也可以多对一。用通俗的话来讲就是同一种真菌可以产生很多种的毒素，但是也有可能很多种真菌只产生一种毒素。每一个硬币都有两面，有很多真菌的毒素危害很大，比如说：黄曲霉毒素以及伏马毒素还有麦角类的生物碱。据实验证明，在天然形成的物质中黄曲霉毒素的致癌性是最强的。在农产品中最容易被污染的毒素也是黄曲霉毒素。据不完全统计，全世界每一年受黄曲霉毒素污染的谷物有25%。这些谷物虽然不会直接流入我们的餐桌，但是这些谷物会被作为饲料喂养动物，间接性的流入我们的餐桌，使我们有致癌的危险。为此，我们需要对真菌的毒素进行测验，保证我们的健康。

1真菌毒素常规检测技术

随着科技不断的发展，有关真菌毒素方面的检验方法越来越多，主要包括以下三点：薄层层析法以及高效液相色谱法还有酶联免疫吸附法、培养检查法等，这些检查方式主要针对单一真菌。

1.1薄层层析法

薄层层析法这种方式早在1960年的时候就已经发展起来了，它属于一种平面的色谱技术。薄层层析法主要用于分辨不一样的样品，这种方式是通过有机的溶剂将真菌中的毒素进行提取，经过精准的溶剂纯化之后将真菌进行层析以及分离。部分真菌的毒性与普通的真菌不同，它具有荧光的特殊性质，需要先与标准的物质进行定量后才能进行下一步操作。我国将薄层层析法这种方法作为实验中的第一方法的原因有很多，举例说明：薄层层析法以经济实惠，对有关人员的操作水平低等特点广受喜爱。薄层层析法具有非常高的精准度还有分离的效率，两者随着扫描仪的发展进一步提高。所以，在很多的欧美国家薄层层析法这种检验方法都是检验荧光毒物的主要方法。

1.2酶联免疫吸附法

检验单一真菌还可以使用酶联免疫吸附法。到目前为止，酶联的免疫吸附这种方法已经发展到比较成熟的阶段。酶联免疫吸附法这种方式属于以免疫酶为基础的创新型检验技术。这种检验方法有很多的优点：首先，酶联免疫吸附法较其他的检验方法来说灵敏、对于工作人员来说操作简单易上手。在实验中使用酶联免疫吸附法之前，只需要将样品进行小限度的净化、就可以得到大量的处理样品。除此之外，酶联免疫吸附法还具有很高的特异性，只可以进行单一的检测。所以，使用酶联免疫吸附法时可以在一定程度上提高物质回收率、增强其敏感度，最大限度的减少实验中的干扰因素。使实验中的分析程序可以尽可能的简化，进一步降低成本。我们相信，如果解决的上述问题，酶联免疫吸附这种方法一定会再上一个台阶。有关人员根据国家的标准将酶联免疫吸附法作为实验中的第二方法。这种方法在很多国家已经广泛的运用，有关人员可以使用这项技术对粮油等食品进行专业的真菌毒素测验，保证我们的饮食健康。

1.3高效液相色谱法

有关人员在分析真菌毒素的过程中，经常使用高效液相色谱法。高效液相色谱法不仅仅可以对于有关的毒素进行定性，还可以在此基础上对其进行定量还有确证从测定真菌的毒素。在高效液相色谱法中，反相液相色谱是应用最广泛的。鉴于每一种真菌的性质都不相同，实验中还会有温度以及湿度等很多的干扰因素对其进行制约。所以，我们在对其进行分析时需要根据实际情况综合性的考虑，充分分析流动相以及色谱柱还有柱温检测器等条件，从而找到最合适的配比。对于一些自身发光的毒素我们可以直接进行HPLC分析，自身不带有荧光的毒素我们需要对其进行柱前以及柱后的衍生还有改变真菌流动用来增加真菌的荧光信号，方便检测。

到目前为止，我国已经建立了有关黄曲霉毒素以及赭曲霉毒素还有伏马毒素等真菌毒素的免疫亲和标准还有净化标准。上述两种测定方式都属于国际上比较常用的方式。随着科技的不断发展，在这些测定方式的基础上对其进行了一定的改进。举例说明：高效的薄层色谱固定相更改为改性硅胶还有纤维素。他们具有更细以及更均匀的优点。改变吸附剂的疏水以及亲水性质。可以初步实现色谱的正相与反相分离，从而进一步的提高选择性。这种方式还可以与其他的检验方式联合使用，使化合物测定的更加准确。举例说明：薄层色谱-质谱联用等方式。对于单孢化合物的测量来说，可以使用气相色谱法。会用这种可以轻易的将羟基作为基础进行衍生，从而一定程度上增加其挥发性以及灵敏度。

1.4培养检查法

大培养还有小培养都属于培养检查的方法。举例说明：专业人员在对血液以及骨髓还有胸腹水等无菌部位的体液进行培养时，应选用大培养的方法。在对痰以及脓液还有组织等部位进行培养时，应选用小培养的方法。据报道，法国某专家在对念珠菌进行显色培养时，与普通的沙保弱培养基进行仔细的对比发现，他们分离酵母的真菌阳性是相同的，抑菌性比起其他真菌来说，它对细菌的抑制效果更强，检验的时间更短，可以准确检验出其中是否存在混合感染。我们在对其进行鉴定的时候，也會面临很多问题，举例说明：临床工作人员与实验室的工作人员不能进行及时的共同交流，不能够准确的将结果做出正确的判断。在实验过程中，有很多的程序不合理，缺乏统一性，没有任何的标准化可言。少数的工作人员不能够正视形态学的重要性，仅仅追求表面技术，不能根据实际情况进行观察。如果上述的问题不能够进行一步改善，会在一定程度上影响临床研究。

2真菌毒素快速筛选检测技术

为了我们的生命健康以及食品安全。有关方面的检测技术需要更加的实行“四省政策”即准确以及省时省力还有省成本。这些问题不仅仅是政府的有关管理部门以及生产食品的企业所要求的，更是有关销售甚至国家安全监管部门所制约的。由此见得，我国应该建立一个简单方便，成本低，效果显著的检验方式。在最近几年，对于真菌毒素的检测方式在两个方面有重大进展。其一是有关免疫胶体方面的金层析技术，其二是有关近红外方面的无损伤检测技术。

2.1免疫胶体金层析技术

早在1980年的时候胶体金就已经被研究人员进行有关免疫学方面的检测了，这种技术是以胶体金最示踪标记物进行特异性的抗原抗体反应。在1990年的时候，有关免疫胶体方面的金层被用于单克隆的抗体技术以及胶体金方面的免疫层析技术还有新材料方面的技术。近些年来，随着科技的不断发展，医学检验技术在临床中被广泛的使用。医学检验技术是将部分特异性的抗原抗体固定在醋酸的纤维素膜上。使用胶体金化学试剂可以将其牢牢的吸附于结合垫。将试品以同样的方式加到样品垫上，通过其自身的毛细作用向前移动。使结合垫上面标记的胶体金化学试剂溶解，与之作用。移动到抗原抗体固定的区域，使待测物与金标的复合物特异性的结合，截留并聚集到相关的检测带上，使实验的结果可以很清晰的观察到。

2.2近红外检测技术

在真菌毒性的检验过程中近红外技术也很常见。近红外是一种波长为700到2500纳米之间的电磁波。红外线的光谱以其独特的优势广受喜爱。它可以快速的对其进行分析，具有高效率、低成本、使用方便的特点。在很过欧美国家，红外线技术也被列入到标准方式中。

结束语

随着科技的不断发展，有关专业人士对真菌毒素的测评工作研究的更加深入，致力于探讨速度快、成本低、高效率的检测技术。薄层层析法以经济实惠，对有关人员的操作水平低等特点广受喜爱。酶联免疫吸附法较其他的检验方法来说灵敏、对于工作人员来说操作简单易上手。高效液相色谱法可以初步实现色谱的正相与反相分离，从而进一步的提高选择性，与其他的检验方式联合使用时可以使化合物测定的更加准确。免疫胶体金层析技术还有近红外检测技术比起常规的方法更加的简单方便，成本更加低廉，效果更加顯著。我们相信通过有关人员的不断努力，检测技术可以走上一个新的台阶，开启检测技术的新纪元。

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