肝癌组织Mortalin表达水平对术后复发的影响

林烨珏 唐成武 费卯云

[摘要] 目的 探討肝癌组织中Mortalin表达水平对术后复发的影响。 方法 回顾性分析2010年5月～2015年10月间在本院接受手术治疗的150例肝细胞肝癌患者的临床资料。Western blot 法检测肝癌标本内的Mortalin表达水平，采用ROC曲线和Kaplan-Meier法分析Mortalin表达水平对肝癌术后复发的影响。 结果 肝癌组织Mortalin表达水平对术后复发预测的曲线下面积（AUC）为0.852，特异度为86.75%，灵敏度为85.07%，最佳判读值为2.14（P<0.01）。根据ROC曲线分析结果，将肝癌组织Mortalin相对表达水平>2.14的患者纳入高表达组（n=69），而肝癌组织Mortalin相对表达水平<2.14的患者纳入低表达组（n=81）。Kaplan-Meier法生存分析发现高表达组术后3年内有57例患者出现复发（3年无复发生存率为17.39%）;低表达组术后3年内有10例患者出现复发（3年无复发生存率为87.65%），低表达组3年无复发生存率明显优于高表达组（P<0.01，两组间复发风险比：10.9915， 95%可信区间：6.6338～18.2119）。 结论 肝癌组织Mortalin表达水平与肝癌术后复发显著相关，Mortalin表达水平升高则预示着术后早期复发，预后不佳。

[关键词] 肝细胞癌;表达;肝切除;复发;Mortalin

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）05-0009-04

Effect of Mortalin expression level on postoperative recurrence in hepatocellular carcinoma

LIN Yejue   TANG Chengwu   FEI Maoyun

Department of Surgery， the First People's Hospital Affiliated to Huzhou University， Huzhou   313000， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Mortalin expression level on postoperative recurrence in hepatocellular carcinoma. Methods The clinical data of 150 patients with hepatocellular carcinoma who underwent surgery in our hospital from May 2010 to October 2015 were retrospectively analyzed. The expression of Mortalin in liver cancer specimens was detected by Western blot. The effect of Mortalin expression on the recurrence of liver cancer was analyzed by ROC curve and Kaplan-Meier method. Results The area under the curve （AUC） of Mortalin expression in hepatocarcinoma was 0.852， the specificity was 86.75%， the sensitivity was 85.07%， and the best interpretation was 2.14（P<0.01）. According to the results of ROC curve analysis， patients with liver cancer tissue Mortalin relative expression level greater than 2.14 were included in the high expression group （n=69）， while those with liver cancer tissue Mortalin relative expression level less than 2.14 were included in the low expression group（n=81）. Kaplan-Meier survival analysis showed that 57 patients in the high expression group had recurrence within 3 years after operation（3 years recurrence-free survival rate was 17.39%）; 10 patients had recurrence within 3 years after operation in low-expression group （3 years recurrence-free survival rate was 87.65%）. The 3-year recurrence-free survival rate of the low-expression group was significantly better than that of the high-expression group（P<0.01， the risk ratio of recurrence between the two groups：10.9915， 95% confidence interval： 6.6338-18.2119）. Conclusion The expression level of Mortalin in hepatocellular carcinoma is significantly correlated with postoperative recurrence of liver cancer.The increased expression of Mortalin predicts early recurrence and poor prognosis.

[Key words] Hepatocellular carcinoma; Expression; Hepatectomy; Recurrence; Mortalin

肝癌是我国目前发病率第三的肿瘤，而其致死率位列第二，已经成为严重危害国民健康的公共卫生难题[1-3]。手术切除目前是除肝移植之外针对肝癌最有效的治疗手段[4]。然而肝癌手术切除后仍有非常高的复发率，导致长期生存率不甚理想，给家庭社会带来巨大的精神损失和压力[5，6]。因此需要深入探索肝癌术后复发的机制及危险因素，并找到预防术后复发的治疗策略及靶点，以改善肝癌术后长期生存。Mortalin是热休克蛋白70族蛋白的一种，又被称作GRP75，最早是在小鼠胚胎成纤维细胞中发现，广泛存在细胞器内，具有调节细胞分化及肿瘤发生等作用[7-10]。本研究旨在探讨肝细胞癌组织中Mortalin表达水平对肝癌术后复发的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性研究2010年5月～2015年5月间在本院接受手术治疗的150例肝细胞肝癌患者，入组标准[11]：年龄75岁以下;无全身转移;术后生存期>6个月;随访资料完整;均签署治疗知情同意书。排除标准：血液系统疾病;术后生存期<6个月。在所有入组的患者中男113例、女37例，平均年龄（56.09±6.68）岁，其中102例接受腹腔镜肝癌根治术，48例接受开放肝癌根治术，平均术前甲胎蛋白（AFP）水平为（453.42±75.59）ng/mL。

1.2 肝癌组织Mortalin表达水平检测

取标本库中对应患者手术组织标本，按照蛋白提取试剂盒的说明书，制备蛋白标本，BCA法测蛋白浓度。取20 μL样品上样，使用SDS-PAGE胶电泳分离蛋白，半干式电转膜仪转移蛋白至PVDF膜上，脱脂奶粉封闭，Mortalin一抗孵育过夜，β-actin二抗室温孵育2 h。ECL显影和定影。Mortalin蛋白大小为74 ku;β-actin蛋白大小为43 ku。Mortalin相对含量=Mortalin灰度值/β-actin灰度值。

1.3 随访及观察指标

所有患者均接受术后定期随访（术后半年内每个月1次，其后每3个月1次），收集患者资料，包括3年内复发情况及复发时间。

1.4 统计学方法

计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料采用χ2检验;Mortalin表达对术后复发的预测作用采用ROC曲线分析;患者生存资料采用Kaplan-Meier法分析。所有统计均由MEDCALC15.2软件完成，P<0.05表示有統计学差异。

2 结果

2.1 肝癌组织Mortalin表达水平对肝癌术后复发的预测价值

运用MEDCALC15.2软件将患者复发情况（无复发=0，复发=1）与肝癌组织Mortalin表达水平绘制ROC曲线（图1），测得Mortalin表达水平对术后复发预测的曲线下面积（AUC）为0.852，特异度为86.75%，灵敏度为85.07%，最佳判读值为2.14（P<0.01）。

2.2 肝癌组织Mortalin表达对术后复发的影响

根据上述ROC曲线分析结果（最佳判读值为2.14），将肝癌组织Mortalin相对表达水平>2.14的患者纳入高表达组（n=69），而将肝癌组织Mortalin相对表达水平<2.14的患者纳入低表达组（n=81）。两组患者的一般资料在年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤数量、手术方式、病毒感染及有无接受术后化疗等方面无显著差异（P>0.05）（表1）。高表达组术后3年内有57例患者出现复发（3年无复发生存率为17.39%）;低表达组术后3年内有10例患者出现复发（3年无复发生存率为87.65%）。Kaplan-Meier法生存分析发现低表达组3年无复发生存率明显优于高表达组（P<0.01，两组间复发风险比：10.9915，95%可信区间：6.6338～18.2119）（图2）。

3 讨论

肝癌是我国目前最常见的恶性肿瘤之一，在我国肝癌的发病率约为26.63/10万，每年死于肝癌的人数约为31.6万，占据全世界肝癌死亡人数的一半以上[1]。手术切除是除肝移植之外针对肝癌目前最有效的治疗手段[4]。然而肝癌手术切除后仍有非常高的复发率，导致长期生存率不甚理想，给家庭社会带来巨大的精神损失和压力[5，6]。因此需要深入探索肝癌术后复发的机制及危险因素，找到预防术后复发的靶点，以改善肝癌术后长期生存。

随着分子生物学及人类基因组学等基础科学的发展，越来越多的肿瘤分子标记物被发现。Mortalin是热休克蛋白70族蛋白的一种，又被称作GRP75，最早是在小鼠胚胎成纤维细胞中发现，广泛存在细胞器内。Mortalin已被证实在肺癌、胰腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤内表达上调，且其表达水平直接与预后相关，已成为肿瘤预后的重要预测因子[12-15]。同时，Mortalin还被发现在多种肿瘤中起到介导化疗耐药、抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤早期复发转移等作用，因此Mortalin过表达使得肿瘤预后进一步恶化[16-20]。

近年来关于Mortalin在肝癌发生发展中的作用机制研究日渐受到重视。有学者利用蛋白组学对携有丙肝病毒的肝癌患者的肝癌组织进行检测，结果发现在此类肝癌组织中Mortalin的表达较正常肝组织增高[21]。为研究肝癌组织Mortalin表达与复发的关系，有研究者将术后1年内早期复发的肝癌患者肝癌Mortalin表达水平与1年后复发的患者比较，发现在肝癌术后1年内早期复发的患者Mortalin表达水平要显著高于1年后复发的患者，同时还发现在转移性肝癌细胞系中其表达亦升高。从而提示Mortalin在肝癌复发转移等方面可能发挥重要作用，与肿瘤侵袭密切相关[22]。

本研究通過ROC曲线分析发现，肝癌组织Mortalin表达水平对术后复发预测的AUC为0.852，特异度为86.75%，灵敏度为85.07%，最佳判读值为2.14（P<0.01）。根据ROC曲线分析结果，将患者按肝癌组织Mortalin表达水平分类为高表达组和低表达组，Kaplan-Meier法生存分析发现低表达组3年无复发生存率明显优于高表达组（P<0.01）。

有学者发现Mortalin基因表达量与肝癌细胞增殖基因、间质-上皮转变（Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）相关基因直接相关[23，24]。而通过放疗联合局部热疗可有效降低Mortalin基因表达量，从而抑制肝细胞增殖及EMT，改善患者预后[25]。这可能是由于EMT是肿瘤侵袭转移级联反应的第一步，肿瘤上皮细胞失去细胞间连接（基地极性）并获得迁移、侵袭基底膜的能力[26]。众多恶性肿瘤研究已经证实，细胞发生EMT后失去上皮标志蛋白并获得间质标志蛋白，导致其黏着连接破坏并出现局部或者远处转移[27]。EMT参与恶性肿瘤细胞血管渗出、肿瘤转移定植等众多过程，EMT活性与肿瘤恶性程度高度相关[28]。我们可以推测通过降低Mortalin水平抑制肝癌细胞EMT能显著改善肝癌预后。综上所述，肝癌组织Mortalin表达水平与肝癌术后复发显著相关，Mortalin表达水平升高则预示着术后早期复发，预后不佳，因此Mortalin可能是预防肝癌术后复发的有效治疗靶点。

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（收稿日期：2019-09-06）