辛夷标准汤剂质量标准研究

廖鹏飞　王亚杰　郝单丽　刘丽　赵庆贺

摘要：目的  建立辛夷标准汤剂质量控制方法，为辛夷配方颗粒的质量评价提供依据。 方法  制备12批不同产地辛夷饮片的标准汤剂，按2015年版《中华人民共和国药典》挥发油测定法测定挥发油含量，采用超高效液相色谱（UPLC）-二极管阵列检测器对木兰脂素进行含量测定，计算出膏率和指标成分转移率，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）》软件对UPLC图谱进行分析。结果  12批辛夷饮片标准汤剂挥发油含量均大于1.0%（mL/g），出膏率为14.0%～19.7%，木兰脂素转移率为6.61%～36.63%。UPLC图谱确定了4个共有峰，特征图谱相似度均大于0.9。结论  本研究制备的辛夷标准汤剂质量稳定，特征图谱相似度高，方法精密度、稳定性和重复性良好，可为辛夷配方颗粒的质量控制提供参考。

关键词：辛夷;标准汤剂;木兰脂素;超高效液相色谱法;指纹图谱

中图分类号：R284.1    文献标识码：A    文章编号：1005-5304（2020）03-0053-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201903289

Quality Study of Magnoliae Flos Standard Decoction

LIAO Pengfei1，2， WANG Yajie2， HAO Danli2， LIU Li2， ZHAO Qinghe2

1. Tibetan Duorui Pharmaceutical Company， Changdu 854000， China; 2. Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China

Abstract： Objective To establish the quality control method for Magnoliae Flos standard decoction， and to provide references for the quality control protocol of Magnoliae Flos dispensing granules. Methods Twelve batches of Magnoliae Flos standard decoction were prepared. The content of volatile oil was determined according to the methods in Chinese Pharmacopoeia （2015Ed）. Ultra-high performance liquid chromatography （UPLC） - diode array detector was used to determine the content of magnolin， and the paste rate and transfer rate were calculated. UPLC fingerprint was analyzed by using Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of Traditional Chinese Medicine （2004A）. Results The contents of volatile oil of 12 batches of Magnoliae Flos standard decoction were all more than 1.0% （mL/g）， the extraction rates were 14.0%–19.7%， and the transfer rates of magnolin were 6.61%?36.63%. Moreover， 4 common chromatographic peaks were determined based on their fingerprints. The similarity of 12 batches of samples was all higher than 0.9. Conclusion The quality of 12 batches of Magnoliae Flos standard decoction is stable， the fingerprint similarity is high， and the precision， stability and repeatability of the method are good， which can provide references for the quality control of Magnoliae Flos dispensing granules.

Keywords： Magnoliae Flos; standard decoction; magnolin; UPLC; fingerprints

随着科技的进步和发展，超微粉、纳米中药、配方颗粒等新型中药饮片不断涌现[1]。这些新型中药饮片的应用具有积极的临床意义，是对传统饮片的有益补充，但也存在标准不明确、剂量不统一等问题。中药饮片标准汤剂是以中医理论为指导、临床应用为基础，参考现代提取方法，经标准化工艺制备而成的单味中药饮片水煎剂，用于标准化临床用药，保障用药的准确性和剂量的一致性[2-6]。

辛夷来源于木兰科植物望春花Magnolia biondii Pamp.的干燥花蕾[7]。其味辛，性温，归肺、胃经，具有发散风寒、通鼻窍的功效，主治风寒感冒、鼻塞、鼻渊。《本草纲目》记载：“辛夷之辛温走气而入肺，能助胃中清阳上行通于天，所以能温中治头面目鼻之病。”现代药理研究表明，辛夷有抗炎、抗变态反应、抗病原微生物、抗氧化及舒张平滑肌等作用[8]。辛夷主要有效成分为挥发油、木脂素类和黄酮类化合物。本研究按2015年版《中华人民共和国药典》方法提取并测定辛夷中挥发油的含量，采用超高效液相色谱（UPLC）-二极管阵列检测器测定指标成分木兰脂素，并建立辛夷饮片标准汤剂的特征图谱，以期为辛夷标准汤剂的质量标准研究提供参考，并为辛夷配方颗粒的质量控制提供依据。

1  仪器与试药

安捷伦1290InfinityⅡ型超高效液相色谱仪（美国安捷伦公司，G7167B型自动进样系统，G7166B型柱温箱，G7117A型DAD检测器），Welch Ultimate XB-C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），XS205型十万分之一电子分析天平（瑞士，梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ5200DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），JA2003型电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），TG16-WS型台式高速离心机（湖南湘仪有限公司），pH计（Mettler Toledo）。

木兰脂素（含量≥98%，批号31008-18-1，北京四面體生物科技有限公司）;甲醇、乙腈为色谱纯（Fisher），其他试剂为分析纯。

本研究收集3个产地共12批辛夷饮片样品，经DNA条形码鉴定，均为木兰科望春花Magnolia biondii Pamp.的干燥花蕾。样品信息见表1。

2  方法与结果

2.1  辛夷饮片木兰脂素含量测定

按2015年版《中华人民共和国药典》方法测定12批辛夷饮片中木兰脂素的含量[9-11]，结果表明，12批辛夷饮片均符合木兰脂素不得少于0.40%的限量要求。

2.2  辛夷标准汤剂制备

取辛夷饮片100 g，置于2000 mL圆底烧瓶中，加12倍量水，浸泡30 min，置挥发油提取器中提取2 h，得挥发油，提取液趁热过滤，药渣再加10倍量水，于挥发油提取器中继续提取30 min，得挥发油，提取液过滤，合并滤液，浓缩至适量，定容至500 mL;合并挥发油，加入到浓缩后的滤液中，得0.2 g/mL的辛夷标准汤剂。

2.3  辛夷标准汤剂木兰脂素含量测定

2.3.1  色谱条件

采用Welch Ultimate XB-C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为水-乙腈-四氢呋喃（59∶40∶1），柱温30 ℃，流速0.4 mL/min，检测波长278 nm，进样量5 ?L。色谱图见图1。理论塔板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

2.3.2  对照品溶液制备

取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的木兰脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1.07 mg的溶液，即得。

2.3.3  供试品溶液制备

取辛夷标准汤剂摇匀，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，超声（功率200 W，频率40 kHz）5 min，12 000 r/min离心5 min，0.22 ?m滤膜过滤，取续滤液，即得辛夷标准汤剂供试品溶液。

2.3.4  线性关系考察

精密吸取“2.3.2”项下木兰脂素对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按“2.3.1”项下色谱条件进样，测定木兰脂素峰面积，以木兰脂素进样量（?g）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=3887.2X-19.24，r=0.998，表明木兰脂素线性范围为0.128 1～0.640 8 ?g。

2.3.5  精密度试验

取同一批辛夷标准汤剂供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样6次，测定并计算木兰脂素峰面积RSD=0.07%，表明仪器精密度良好。

2.3.6  重复性试验

平行制备6份辛夷标准汤剂供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样，结果标准汤剂中木兰脂素平均含量为0.92 g/L，RSD=1.18%，表明本方法重复性良好。

2.3.7  稳定性试验

取辛夷标准汤剂供试品溶液，分别于制备后0、4、8、10、12、24 h，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算木兰脂素峰面积RSD=0.41%，表明24 h内供试品溶液稳定性良好

2.3.8  加样回收率试验

取已知含量的辛夷标准汤剂（0.80 g/L），根据其中木兰脂素含量按约1∶1比例加入木兰脂素对照品（0.089 3 mg），平行制备6份供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进行试验，计算供试品溶液中木兰脂素平均加样回收率为101.05%，RSD=3.12%，表明本方法准确度良好。

2.3.9  样品测定

精密吸取辛夷标准汤剂供试品溶液5 ?L，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算木兰脂素含量。

2.4  辛夷标准汤剂pH值、挥发油、出膏率、指标成分转移率测定

采用pH计测定辛夷标准汤剂的pH值，结果12批辛夷标准汤剂pH值为5.08～5.68，见表2。

按2015年版《中华人民共和国药典》挥发油测定法[9]测定辛夷标准汤剂挥发油含量，结果见表2。12批样品均符合挥发油含量不得少于1.0 mL/100 g的限量要求。

取辛夷标准汤剂适量，摇匀，精密吸取50 mL置精密吸取10 mL置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘3 h，取出，置干燥器中冷却30 min，称定质量，计算出膏率。出膏率（%）=（干膏量×标准汤剂体积）÷（取样体积×饮片量）×100%。结果12批辛夷标准汤剂出膏率为14.0%～19.7%（见表2），平均出膏率为16.47%。

分别测定辛夷饮片和辛夷标准汤剂中木兰脂素含量，并计算转移率。转移率（%）=标准汤剂中木兰脂素含量（mg）÷饮片中木兰脂素含量（mg）×100%。结果12批辛夷标准汤剂木兰脂素转移率为6.61%～36.63%（见表2），平均转移率为17.04%。

2.5  特征指纹图谱的建立与分析

分别取12批辛夷标准汤剂，按“2.3.3”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件测定，记录UPLC图，采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）》软件进行分析。12批样品图谱见图2，辛夷标准汤剂对照特征图谱见图3。共确定4个共有峰，12批样品特征图谱相似度均大于0.9（见表3），表明各批次辛夷标准汤剂具有较好的一致性。

3  讨论

本研究对辛夷标准汤剂的质量从以下三方面予以控制：①样品来自辛夷的主产区及主要药材市场，质量符合2015年版《中华人民共和国药典》规定;②标准汤剂的制备过程遵循统一及标准化操作流程[12];③标准汤剂的质量控制采取化学指纹图谱、挥发油含量测定及指标成分含量测定相结合的鉴定模式。对主要共有峰进行了成分指认，可为辛夷水煎液的制备及质量控制提供参照。

本研究以辛夷主要成分木兰脂素为指标，通过测定转移率及出膏率重点考察标准汤剂制备工艺的稳定性，通过含量测定主要考察不同批次标准汤剂质量的均一性。结果辛夷标准汤剂的转移率为6.61%～36.63%，不同批次标准汤剂的转移率相差较大。其中转移率较低批次的样品木兰脂素含量也较低。分析其原因，部分批次样品带花梗，试验中发现带花梗的样品较等重不带花梗的样品木兰脂素含量低。制备饮片供试品时样品需要过筛，花梗未能通过药筛，故所有批次饮片中木兰脂素含量均符合药典限量要求。而计算转移率时，带花梗样品的木兰脂素含量偏低，导致转移率范围较大。测定结果表明，不同批次辛夷饮片的标准汤剂出膏率较为稳定，质量均一性较好。

参考文献：

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[12] 陈士林.中药饮片标准汤剂：第一卷[M].北京：科学出版社，2018：7.

（收稿日期：2019-03-22）

（修回日期：2019-05-23;编辑：陈静）