东莞南城区九项呼吸道病原体IgM抗体检测结果分析

黄明兰 ，彭致平 ，隋洪 ，刘安定

（1.东莞康华医院检验科，广东 东莞 523003；2.广东医科大学，广东 东莞 523073）

常见的呼吸道感染，主要由细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体等病原体引起，呼吸道感染由不同的病原体侵袭所致[1]。患者的临床症状有很大的相似度，引起上呼吸道感染、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎、肺部感染、咳嗽、发热等类似的临床症状，在感染早期医生只能够凭经验用药，给临床医疗工作者的诊治活动带来了极大的困扰，同时也会导致抗生素的滥用。在患者受到呼吸道病原体的感染后，1到3周内最先出现相关的特异性IgM抗体，相关的IgM抗体会存在人体血液内2～3个月的时间[2]。使用“九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）”对常见的呼吸道病原体的特异性抗体进行联合检测,确定其感染的病原体，有助于医生的针对性用药，减少患者不必要的负担与痛苦，给临床疾病诊断提供依据。

为充分了解东莞南城区呼吸道病原体的感染情况及流行趋势,统计2013年到2017年期间于我院就诊的呼吸道感染患者,共计2019例，统计呼吸道患者中九项呼吸道病原体特异性IgM的检出情况，为临床诊治提供参考性依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2013年1月-2017年12月于东莞康华医院就诊的2019例呼吸道感染的患者，男性1226例，女性793例，患者年龄1月～90岁，平均年龄（20.51±0.56）岁。根据就诊患者的年龄进行如下分组，幼儿组≤1岁、儿童青少年组（＞1岁,≤18岁）、成人组（＞18 岁、≤60 岁）、老龄组（＞60 岁）

1.2 标本来源 抽取呼吸道感染的患者静脉血4～5ml于红色无抗凝剂的真空采血管中，静置1h后，3000r/min离心10分钟，取血清进行检测。

1.3 方法

1.3.1 试剂、仪器的选择 采用由郑州安图生物公司提供的 “九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）”，生产地址：西班牙。仪器采用荧光显微镜OLYMPUS，型号CX31。

1.3.2 检测原理 间接免疫荧光法（IFA）是在检测板上包被有相对应的特异性抗原,待测样品中的抗体与包被在检测板上的抗原发生免疫特异性反应,未与抗原结合的非特异性抗体分子被洗涤缓冲液（PBS）除去。接下来，抗原-抗体免疫性复合物与荧光素标记的抗IgM发生免疫特异性反应,将荧光素（FITC）粘附在检测板上。用免疫荧光显微镜观察检测板上相对应的孔位的荧光模型,得出对应的结果。

1.3.3 结果判断 阳性结果：呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒（ADV），甲型流感病毒（INFA），副流感病毒1、2 和 3 型（PIVs）和乙型流感病毒（INFB）的测试孔位中有1%至5%细胞的细胞核、胞浆或胞膜呈现出绿色的荧光模型；嗜肺军团菌（LP1），Q热立克次体（COX），肺炎衣原体（CPn）的测试孔位中包被的菌体呈现出绿色的荧光模型;肺炎支原体测试孔位中呈现细胞外围绿色的荧光模型。阴性结果：肺炎衣原体,嗜肺军团菌和立克次体的检测孔位无绿色荧光发出，甲型和乙型流感病毒，支原体，腺病毒,呼吸道合胞病毒和副流感病毒的检测孔位的细胞发出红色的荧光。10号位为质控孔位，发出红色荧光。

1.3.4 数据处理 采用SPSS19.0软件进行数据处理，计数资料以率或例数来表示。对于同一个体两种以上的病原体感染,针对同一病原体采用重复计算。比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 呼吸道感染病原体特异性IgM抗体检测结果2013年至2017年共计2019例,共计有643例特异性IgM抗体阳性患者，772项IgM抗体阳性结果。九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体总检出率为31.85%（混合感染重复计算）。与相关文献所报道的感染率相近[3]。 LP1 4.60%（93/2019），MP 22.10%（446/2019）,COX 0.15%（3/2019）,CP 1.09%（22/2019）,ADV 1.19%(24/2019),RSV 0.25%(5/2019),INFA 0.40% （8/2019），INFB 7.28% （147/2019），PIVs 1.19%(24/2019)，混合感染重复计算。结合数据分析，以肺炎支原体（MP）的感染率最高，乙型流感病毒次之，见图1。

图1 九项病原体特异性IgM抗体检出情况

2.2 不同类型病原体感染的相关统计 在所检测的共计有643例特异性IgM抗体阳性患者中混合感染(同一患者检测出两种及两种以上的特异性Ig M抗体)总共有119例，混合感染的模式共有23种。其中，两种病原体混合感染的模式有16种类型，三种病原体混合感染的模式有6种，四种病原体混合感染的模式有1种类型。病原体混合感染以肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(INFB)混合感染模式最高，共计52例，嗜肺军团菌（LP1）和乙型流感病毒（INFB）混合感染次之,共计26例，肺炎支原体（MP）、副流感病毒 1、2 和 3 型（PIVs）混合感染8 例,肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（CP）混合感染6 例，肺炎支原体（MP）、腺病毒（ADV）混合感染 4例。

2.3 呼吸道感染病原体的季节性分布 呼吸道病原体的传播感染，会随着季节的更替，呈现出一定的季节性变化的规律。先将该研究数据，依据感染的时间，划分为四个组。春季（3月～5月）,夏季（6月～8 月），秋季（9 月～11 月），冬季（12 月～2 月），分别统计呼吸道病原体的感染率，见表1，采用卡方检验，得 χ2=60.99，χ20.05,1=7.81，P＜0.05；差异具有统计学意义；由表1可见，春季、夏季、秋季是呼吸道病原体感染的多发时间段,而冬季呼吸道病原体的传播感染率较低。并将感染率最高的前三项病原体（LP1、MP、INFB），做出季节分布表,见表 2；由表2可见，肺炎支原体（MP）和嗜肺军团1型（LP1）感染的高发时间段为春季（3月～5月），而乙型流感病毒(INFB)感染的高发时间段为夏季（6月～8月）。

表1 九项呼吸道病原体特异性IgM抗体检出率随季节变化规律

2.4 不同年龄组呼吸道病毒特异性IgM抗体检出率 被检测人群因处于不同的年龄阶段，因免疫力的不同，对病原体的抵抗能力也截然不同。婴幼儿（≤1岁）、儿童少年（＞1岁,≤18岁）的免疫系统正处于逐渐建立及完善的过程中，成年人（＞18岁，≤60岁）的免疫系统基本建立完全，对病原体的感染具有一定的抵抗力，老龄人（＞60岁）的体质下降。也随着免疫力的下降,不同的人群对呼吸道病原体有着不同的抵抗力,在感染情况方面能够体现出来,见表 3,采用卡方检验，得 χ2=123.78，χ20.05,1=7.81，P＜0.05为差异具有统计学意义。

表2 LP1、MP、INFB特异性IgM抗体检出率随季节变化规律

表3 九项呼吸道病原体特异性IgM抗体在不同年龄人群的检出情况

2.5 不同临床诊断呼吸道病毒特异性IgM抗体检出率 呼吸道病原体,是能够引起人类呼吸道系统疾病的病原体,有细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体等病原体，而以上是作为一个大类，若细分下去，则有更多的种类，在如此众多的病原体的感染之下，用药的方向、抗生素的选择更是大相径庭，但是呼吸道疾病的临床表现却大同小异主要引起上呼吸道感染、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎、肺部感染、咳嗽、发热等相似的临床症状，在不同的临床表现下,九项呼吸道病原体特异性IgM抗体的检出情况也存在着应有的规律,现在将本研究的数据，依据不同的临床表现分为支气管炎、肺炎、肺部感染、呼吸道感染、发热查因、血液病和其他，共计7个分组,见表4。采用卡方检验,得χ2=58.13，7.81，P＜0.05为差异具有统计学意义。

表4 九项呼吸道病原体特异性IgM抗体在不同临床表现的检出情况

3 讨论

呼吸道是人直接与外界接触的一个部分，而在自然界有无数种病原体能够经空气进入人体的呼吸道，在不同的情况下，能够导致人体的呼吸道感染。不明原因发热、咽炎、支气管炎、喘息性支气管炎、肺炎、肺部感染等都是呼吸道病原体感染的临床表现,然而不同的临床表现又随着患者的年龄、免疫力、特殊体质、基础性疾病等个人身体素质差异的不同而表现出不同的临床特征,因而给临床的诊疗带来了极大的困扰。儿童免疫力低下，极易引发呼吸道感染,由于呼吸道感染的非典型病原体引起的临床表现不典型,给临床诊断和治疗造成困难[4]。

引起呼吸道感染的危险因素多种多样,若无明确的诊断极容易导致抗生素的滥用,给患者带来不必要的痛苦和经济负担。因而使用正确检查手段，得出明确的感染病原体是非常有必要的。肺炎支原体是介于细菌和病毒之间的已知能独立生活的病原微生物中最小者,被认为是导致社区获得性肺炎的第三位病原体[5]。现阶段对于呼吸道病原的检测有PCR法、病原体培养法、凝血试验法、酶联免疫吸附法(ELISA)。但不同的方法有各自的长短板。PCR法虽然敏感性高、但它的假阳性率也高，且试剂昂贵、检测繁琐,对检测人员有较高的技术要求。支原体、衣原体培养法，流感病毒的凝血试验等方法是鉴定的金标法，但培养时间过长[6]。现在使用的多数是间接免疫荧光法,检测病原体特异性IgM抗体,该检测方法具备高特异性：96.3%～100%、高灵敏性：85.7～100%（与另一商品化的IFA试剂盒对照）。检测时间短（约3h）等优点，采用九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒,更具有一份血清多项联合检测的优点，试剂较为便宜，适用于临床的推广。

呼吸道病原体的感染随着季节的更替出现有一定的变化规律,春季和夏季是呼吸道病原体感染的高发期,呼吸道病原体IgM抗体的阳性率分别为36.49%、36.58%,高于秋季和冬季的33.06%、15.72%。相关文献中，呼吸道病原体的高发期为秋季和冬季[7],该文献报道的是成都地区的感染情况，与东莞南城区的气候有较大的差异。故呼吸道病原体的流行与气候相关，空气不流通，高温湿热，是呼吸道病原体感染的高危因素。

本研究中,以肺炎支原体和乙型流感病毒最为常见，感染的人群年龄以儿童、青少年（>1岁，≤18岁）为主，感染率达46.49%。此年龄阶段的人群免疫系统尚未完善,最容易受到呼吸道病原体的感染，与相关文献报道相符[8]，若无相关的明确诊断，容易导致抗生素的滥用，凭医生的经验性用药，对儿童、青少年的身体损害较大，采用该试剂盒进行明确诊断具有积极的临床意义。而老龄组（＞60岁）的阳性率略低于成人组,是该研究分析老龄组人群的基数不够，不具有代表性意义。

对不同临床表现进行分析可得,呼吸道病原体IgM抗体阳性率前三的临床诊断为上呼吸道感染、肺炎、支气管炎,抗体阳性率分别为43.07%、37.83%、31.52%，故呼吸道病原体的感染是呼吸道疾病的高危因素。其中，对阳性患者的呼吸道病原体进行分类,以肺炎支原体(MP)和乙型流感病毒（INFB）为主。肺炎支原体，其大小介于细菌和病毒之间,是引起呼吸道感染的常见微生物[9]，乙型流感病毒为RNA病毒，容易发生变异，人群普遍对其缺乏免疫力，因此容易引起大流行[10],上述二者传播途径均是空气飞沫传播。故远离人群密集区域，保持空气流畅，对预防呼吸道病原体有积极地意义。

综上可知,对呼吸道病原体的流行时间与易感人群的年龄段进行统计分析,可为呼吸道病原体的治疗提供参考性依据。采用九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒,对呼吸道感染的患者进行检测，有助于明确感染类型,为患者明确用药方向，对患者的治疗与康复有着积极的意义。