乙型肝炎患者外周血中免疫细胞检测的临床意义

丁建平，侯远沛

（1.东台市中医院检验科，江苏 东台 224200；2.徐州市传染病医院检验科，江苏 徐州 221004）

水平传播的乙型肝炎病毒侵入人体后，95%的感染者自身的免疫系统会将其清除,形成T细胞及抗体介导的长期免疫力[1]，仅有少部分患者发展为慢性乙型肝炎、肝硬化甚至肝癌。有研究表明,HB V慢性感染者以适应性免疫应答减弱为特征,表现为CD4+、CD8+T淋巴细胞数量上的减少和质量上的失效[2],以往大多以CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分数和比值进行粗略统计[3,4],随着流式细胞检测技术的发展,研发出更为精确的以荧光微球为参照的免疫细胞绝对计数法,现将本院乙型肝炎患者免疫细胞的绝对数进行统计分析,探讨其临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 病例选择 选取2016年1月-10月于本院确诊为乙型肝炎患者173例,其中慢性乙型肝炎患者106例（轻度52例，中度38例，重度16例），肝硬化患者67例，所有慢性乙型肝炎诊断均符合2010版《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准[5]，排除甲、丙、戊型肝炎混合感染，无合并糖尿病、艾滋病以及营养不良患者，最近半年未使用免疫调节剂治疗。女性49例，男性124例，年龄24～84岁,平均年龄46.89±12.93岁；40例健康对照者年龄20～75岁,平均年龄45.62±14.23岁。按照患病与否、ALT、HBeAg含量的多少将乙型肝炎患者分为3组，各组间年龄均无统计学差异，见表1。

表1 3组患者年龄的比较

1.2 仪器与方法 所有患者入院当日空腹抽取静脉血送检,外周血免疫细胞采用Beckman Coulter FC500型流式细胞仪检测，加入该公司配套的荧光微球作为参照品，计算免疫细胞的绝对数；ALT采用速率法，由日立公司生产的7180型全自动生化分析仪检测，HBeAg采用时间分辨免疫荧光法，由苏州新波生物有限公司生产的EasyCuta MiNi全自动免疫检测仪检测，HBeAg＞0.50 PEIU/ml为阳性，试剂为各公司配套试剂，严格按照SOP文件操作，各检测项目以室内质控品进行质量控制，确保检测结果准确可靠。

1.3 统计学方法 采用PEMS 3.1医学统计软件进行统计分析，率的比较采用χ2检验，两组均数的比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 173例乙型肝炎患者与40例健康对照者相比除B淋巴细胞无显著性差异外 (t=1.81,P=0.07),CD 4+、CD8+、NK 细胞的表达均显著降低 （t=4.47,4.21,2.72；P=0.00，0.00,0.01），乙型肝炎患者与健康对照者免疫细胞表达水平的比较见表2。

2.2 年龄≥56岁的老年乙型肝炎患者与≤35岁的年轻患者相比 CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达水平显著降低（t=2.30,3.38；P=0.02,0.00），B、NK 细胞差异无统计学意义 （t=0.87,0.71；P=0.38，0.48）；与36～55岁的乙型肝炎患者相比，除CD8+T淋巴细胞显著性降低（t=2.53,P=0.01）外，CD4+、B 淋巴细胞、NK细胞的表达均无显著性差异（t=1.71,0.71,0.97；P=0.09,0.48，0.33），36～55 岁的乙型肝炎与≤35 岁的年轻患者相比 CD4+、CD8+、B、NK 细胞的表达水平均无统计学差异 （t=1.39,1.81,0.29,0.18;P=0.17,0.07,0.77,0.86），173例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与年龄的关系见表3。

2.3 ALT≥200μ/L的乙型肝炎患者与＜200μ/L的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达显著增加（t=2.49,2.36；P=0.01,0.02），B、NK 细胞差异不明显（t=0.59,0.18；P=0.56，0.86），173 例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与ALT的关系见表4。

2.4 60例HBeAg阳性的乙型肝炎患者与113例HBeAg阴性的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达显著增加（t=2.13,2.17；P=0.03,0.03），B、NK 细胞差异不明显（t=1.30,0.49；P=0.19，0.63），173 例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与HBeAg的关系见表5。

表2 173例乙型肝炎患者与40例健康对照者免疫细胞表达水平的比较

表3 173例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与年龄的关系

表4 173例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与ALT的关系

表5 173例乙型肝炎患者免疫细胞的表达水平与HBeAg的关系

3 讨论

我国乙型肝炎病毒感染率较高，据报道2006年中国15～59岁人群HBsAg的感染率为8.12%[6]。HBV侵入人体后，体内的固有免疫和适应性免疫对病毒的清除发挥重要的作用。以NK细胞为代表的固有免疫可以直接杀伤HBV感染的肝细胞，也可通过ADCC效应、释放多种细胞因子等方式共同发挥抗HBV效应，研究表明，乙型肝炎肝硬化患者外周血中NK细胞不仅表现为数量的减少，其分泌细胞因子的功能也减弱[7],导致HBV病毒在体内持续复制[8]；另外HBV病毒为胞内病毒，以T淋巴细胞为主的适应性免疫发挥关键作用[9]，表2资料提示HBV感染者NK、CD4+、CD8+细胞的表达水平显著低于健康对照者,由于主要用于清除HBV感染的免疫细胞数量减少，导致机体对HBV的清除力下降，使得HBV在肝脏内长期存在，造成不同程度的肝损伤。研究表明，监测HBV感染者淋巴细胞亚群对于评估其免疫功能具有重要的应用价值[10]。

表3资料显示,老年乙型肝炎患者CD4+、CD8+淋巴细胞的表达水平显著低于年轻患者,而细胞免疫对HBV的清除起着关键性的作用，因此老年患者清除体内HBV的能力相对较弱。有研究表明老年重度CHB和肝炎后肝硬化患者CD4+、CD8+T淋巴细胞下降更为显著,下降幅度与疾病的严重程度有关[11],因此老年乙型肝炎患者在抗病毒治疗的同时应注重对其免疫紊乱及免疫抑制情况的纠正[12]，以便达到最佳疗效。

表4资料提示当肝细胞严重受损时，CD4+、CD8+T淋巴细胞表达数量显著增高，细胞因子的分泌量也会随之增加，免疫反应更加活跃，导致肝组织的损伤更为严重。研究表明，肝细胞的损伤主要来源于杀伤性T细胞清理HBV感染的过程[13]，因此在治疗肝细胞严重受损的乙型肝炎患者时应注重其免疫功能的调节，防止过度的免疫反应造成肝组织损伤。

表5资料提示HBeAg阳性的乙型肝炎患者CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达量显著高于HBeAg阴性患者，表明HBeAg的表达可促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖,同时也说明细胞免疫对HBV的清除起主导作用。活化的CD4+T淋巴细胞可通过分泌细胞因子，活化CD8+、B淋巴细胞等方式激活机体的体液免疫和细胞免疫系统清除体内HBV[14]；CD8+T淋巴细胞活化为CTL细胞起主要清除HBV病毒作用，特异性CTL的数量及活性与病毒感染是否持续密切相关[15]。

综上所述，HBV感染者免疫细胞的数量表现为不同程度的降低，HBeAg的表达可促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖,老年乙型肝炎患者以及肝细胞严重受损的患者在抗病毒治疗的同时应关注其免疫功能的调节，以便达到最佳疗效。