血清BNP、cTnl、DGCR8水平变化对诊断先天性心脏病患者病情发生发展的影响

牛会晓，谢双霞，薛园园

（许昌市人民医院儿童重症监护病房，河南 许昌 461000）

流行病学研究表明,我国部分地区先天性心脏病的发病率可接近485～686/1万人左右[1]。临床上先天性心脏病的发生,能够导致患者恶性心血管结局事件的发生，增加了患者的病死率可能[2,3]。现阶段临床上缺乏对于先天性心脏病病情评估的可靠性指标，而对于相关病情评估性指标的研究，能够指导临床上先天性心脏病患者的诊疗和临床预后评估工作。脑钠肽(BNP)是心房细胞分泌的糖蛋白，其表达浓度的上升能够反应心脏的顺应性改变，评估心肺循环障碍的发生风险[4]；肌钙蛋白（cTnI）是反应心肌细胞膜完整性的指标,在心肌细胞损伤或者膜完整性破坏的患者中，cTnI的表达浓度可明显的上升[5]；乔治综合症危象基因（DGCR8）的表达浓度的上升,能够通过影响到心血管内皮细胞的分化成熟，促进心脏内膜下心肌细胞的发育，抑制心脏的重塑性改变,降低先天性心脏病的病情进展速度[6]。 为了揭示 BNP、cTnl、DGCR8 的表达与先天性心脏病患者的病情关系,从而为临床上相关患者的病情评估提供参考,本次研究选择2016年1月-2018年1月我院儿科收治的106例先天性心脏病患儿为观察组,探讨了BNP、cTnl、DGCR8的表达及其与患儿的病情关系，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2016年1月-2018年1月我院儿科收治的106例先天性心脏病患儿为观察组，其中男50例、女46例，年龄2个月～24个月，同期健康体检儿童160例为对照组,其中男89例，女71例，年龄1月～12岁,两组患者在性别、年龄等一般资料方面无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。观察组患儿中室间隔缺损16例,房间隔缺损5例，房间隔合并室间隔缺损9例，房室间隔缺损2例，法洛四联症4例，动脉导管未闭4例。纳入标准:无肝、肾功能不全、血液系统疾病及肿瘤；健康对照组血常规、肝肾功能、心脏超声等检查均无异常。排除标准：临床资料不完整，治疗后无明显好转或死亡。本研究经过医院临床研究伦理委员会批准，所有受试者监护人自愿参与本次研究,并签署知情同意书。

1.2 分组标准 依据改良Ross评分标准将患者分为三组，分别为无心力衰竭组（n=11），轻度心衰组（n=45），中度心衰组（n=38）和重度心衰组（n=12）。分组标准:无心力衰竭(0～2 分)，轻度心衰(3～6 分)，中度心衰(7～9 分)，重度心衰(10～12 分)，见表 1。

表1 改良Ross标准

1.3 观察指标 观察组患儿在入院第2天和治疗后稳定期分别采集空腹静脉血1～2 ml,低温300g离心3min，吸取血清，置-20℃冻存备用,对照组儿童取清晨空腹静脉血1～2 ml，处理同观察组,采用免疫发光法检测所有受试者血清脑钠肽 (BNP)、肌钙蛋白（cTnI）浓度，采用RT-PCR法检测血清中DGCR8 mRNA的表达水平。心功能参数LVEF、LVFS测量采用多普勒超声心动图仪，根据两组的LVESD和LVEDD计算出左心室质量指数(LVMI)。

1.4 检测方法 采集患者的静脉血3ml,加入BNP、cTnl单抗，标本和标准品中的BNP、cTnl会与单抗结合,PBS液体洗涤5min。按照1：500的比例加入羊标志的一抗5ml，4℃放置过夜，PBS缓冲液洗涤3 次，每次 5min，加入鼠来源的二抗（1：1000）2ml，室温放置2h，PBS液体洗涤5min。加入显色底物,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。于450nm处测OD值。

采集患者的静脉血，加入0.2ml的氯仿，2℃～8℃ 冰冻离心机12000 g离心15min,反复一次洗涤RNA,弃上清,在管底部可见一乳白色小沉淀物，加入1 ml 75%乙醇,0.1%DEPC水溶解。加入DGCR8基因和 GAPDH上下游引物、0.1%DEPC使其终浓度均为 20pmol/μl，制备反应体系，RTPCR 扩增的条件与参数：48℃，45min，94℃，2 min；94℃ 30s，58℃ 60s，68℃ 2min 共 40 个循环； 循环完毕后 68℃ 延伸 7 min。

检查仪器为美国飞利浦公司生产的IE33，仪器探头设置为3.5～5.0MHZ,检测左室射血分数（LVEF）及左室短轴收缩率（LVFS）、左心室质量指数(LVMI)。

1.5 统计学方法 统计软件采用SPSS16.0，采用均数±标准差（x±s）进行统计描述，组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ2检验；P＜0.05为差异具有统计学意义，采用pearson检验分析心功能参数 LVEF、LVFS、LVMI 与血清 BNP、cTnl、DGC R8水平相关性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 先天性心脏病患儿血清BNP、cTnl、DGCR8水平变化 观察组患儿血清BNP、cTnl水平较对照组明显升高，DGCR8 mRNA表达较对照组显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.01），见表 2。

2.2 不同心功能等级先心病患儿血清BNP、cTnl、DGCR8水平变化 患儿BNP、cTnl、DGCR8水平在不同心功能等级组间差异均有统计学意义,P均＜0.05，心功能等级越高，血清中BNP、cTnl水平越高，DGCR8 mRNA表达越低，见表3。

表2 先天性心脏病患儿血清BNP、cTnl、DGCR8水平变化

表3 不同心功能患儿组血清BNP、cTnl、DGCR8水平比较

2.3 先心病患儿血清BNP、cTnl、DGCR8水平与心功能指标相关性 先心病患儿血清BNP水平与LVEF呈显著负相关，与LVMI呈显著正相关；cTnl与LVFS呈显著负相关；DGCR8 mRNA表达呈显著负相关。见表4。

3 讨论

遗传性因素、射线及胚胎期不同病理性因素的致畸，均能够促进先天性心脏病的发生，特别是在合并有相关心血管先天性疾病家族史的患者中，先天性心脏病的发生率可进一步的上升[7]。临床上先天性心脏病的发生,能够导致患儿生活质量的显著下降,并能够增加肺性脑病、肺动脉高血压、多器官功能衰竭等的发生风险[3,8]。现阶段临床上主要通过心脏超声检测评估先天性心脏病患者的病情,但一项囊括了203例样本量的病情评估分析研究可见,依靠心脏超声检查评估先天性心脏病患者病情的一致性率仍然存在一定的局限性,其对于患儿远期心力衰竭或者临床转归的预测作用不足[9]。而本次研究对于先天性心脏病患者体内BNP、cTnl、DGCR8的表达分析研究，不仅能够揭示先天性心脏病的病情进展机制,同时还能为临床上相关患儿的病情评估提供血清学方面的参考。

BNP是反应患者心力衰竭潜在风险的指标，由于先天性心脏病患儿,其多数存明显的心肺循环障碍,心脏泵血负荷的增加，能够导致心房细胞分泌BNP能力的显著上升,促进了机械性刺激下BN P的分泌速度[10]；cTnl是反应心肌细胞损伤的指标,在急性心肌梗塞或者冠脉综合症的患者中,cTnl的表达均可显著上升。而在先天性心脏病患儿中，由于心脏循环负荷的增加,心肌细胞能量利用代谢的障碍,均能够导致心肌细胞的缺氧缺血性损伤[11]；DGCR8能够通过内质网或者线粒体的微处理器，影响到微小RNA的转录和合成，进而参与到心血管内皮细胞的分化和成熟过程。

本次研究探讨了BNP、cTnl、DGCR8在心脏病患儿中的表达情况,发现在病例组患者血清中，B NP、cTnl的表达浓度明显上升,而DGCR8的表达浓度明显下降,提示了 BNP、cTnl、DGCR8的差异性表达,均能够参与到儿童先天性心脏病的发生发展过程。通过汇集不同的相关文献，笔者认为这主要由于BNP、cTnl、DGCR8的下列几个方面的机理有关[12,13]：⑴先天性心脏病患者，心肺循环的障碍，能够导致动脉血中血氧饱和度的下降,导致心肌细胞的缺氧缺血性损伤,进而促进了心肌细胞膜的破坏，促进了BNP、cTnl的释放；⑵先天性心脏病患儿,其心血管内皮细胞的分化障碍和心脏间质组织细胞的发育调控异常，导致DGCR8的合成显著的不足。杜伟等[14]研究者也认为，在心脏病患者中，BNP的表达浓度可平均上升40%以上,特别是在合并有明显的肺动脉高压或者肺心病的患者中，BNP的表达浓度可进一步的上升。在探讨不同心衰程度的患者相关指标的表达过程中,可以发现在心衰组特别是重度心衰组患者中，BNP、cTnl的表达浓度明显上升,而DGCR8的表达浓度明显的下降，提示BNP、cTnl、DGCR8的表达与先天性心脏病患者的病情严重程度具有密切的关系,这主要由于心血管系统病情严重程度越高,患儿体内的心肌细胞的损伤程度越为明显，BNP、cTnl的释放程度越高[15]。但部分研究者并不认为cTnl的表达与儿童心衰患者的病情存在相关关系,存在不同的临床结论主要考虑与cTnl的检测时机或者检测方法的不同有关。左室射血分数（LVEF）及左室短轴收缩率（LV FS）、左心室质量指数(LVMI)，是评估患儿心功能的指标,可以发现 BNP、cTnl、DGCR8的表达与患儿的心功能水平密切相关,进一步提示了BNP、cTnl、DGCR8的表达与先天性心脏病患者的病情关系。

综上所述，在先天性心脏病患者中，BNP、cTnl的表达浓度明显上升，DGCR8的表达明显下降，同时BNP、cTnl、DGCR8的表达与患儿心衰程度及心功能密切相关。

表4 先心病患儿血清BNP、cTnl水平及DGCR8 mRNA表达与心功能指标相关性