HMGB1、IL-2、IL-6及 NSE 水平与癫痫患儿病情评估的关系

关浩，李海涛，李伟佳

（南阳医学高等专科学校第一附属医院儿二科，河南 南阳473000）

流行病学研究表明,儿童癫痫的发病率可达284～596/1万人左右[1]。临床上儿童癫痫的发生，可能增加患者生活学习压力,或导致患儿远期病死率和致残率风险的上升[2,3]。

在探讨儿童癫痫的病情进展机制的过程中,可以发现不同的细胞因子或者生物学因子的表达，能够通过影响到神经元纤维的损伤,提高神经纤维的异常放电的频率，进而促进儿童癫痫的发生。高迁移率族蛋白1（HMGB1）的表达能通过提高炎症性细胞的浸润程度,促进神经元纤维的炎症性损伤,加剧补体成熟对神经纤维的变性作用[4]；白细胞介素-2（IL-2）、IL-6的表达，能够通过提高下游炎症信号通路的激活,促进相关炎症性效应因子对于神经鞘膜完整性的破坏,促进异常放电的发生[5]；神经元特异性烯醇化酶（NSE）是存在于神经纤维内的保守性蛋白,在神经纤维损伤的过程中，NSE可以释放入血脑屏障中,并透过血脑屏障进而进入外周血中[6]。 为了揭示 HMGB1、IL-2、IL-6及 NSE 的表达与儿童癫痫的关系,从而为临床上癫痫患儿的病情评估提供参考,选取2015年1月至2017年3月我院确诊的癫痫患儿120例,探讨HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的表达及其与患儿病情的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年1月至2017年3月于我院确诊的癫痫患儿120例为癫痫组,男性66例，女性 54例，年龄 6个月～3岁，平均（1.7±0.6）岁，根据发作频率及持续时间将120例患儿分为：癫痫1组（癫痫频发，癫痫发作每日＞3次）34例,癫痫2组27例 [癫痫持续状态，癫痫发作持续时间30min以上和（或）短期内连续间断发作时间超过30min）]，癫痫3组24例（癫痫频发，同时伴有癫痫持续状态），癫痫4组35例（非癫痫频发或持续状态）。同期健康儿童60例为对照组。对照组，男性32例，女性 28例，年龄 6个月～3岁，平均（1.6±0.8）岁。癫痫组与对照组患儿的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：⑴癫痫患儿的诊断标准参考2010年国际抗癫痫联盟、国际癫痫局制定的癫痫发作、癫痫综合征诊断指南中的标准，且均为首诊；⑵患儿至少出现一次非诱发性癫痫发作、经视频脑电图检查证实；⑶患儿年龄范围6个月～3岁；⑷本研究获得患者的知情同意,获得医学伦理委员会的批准。

排除标准：⑴恶性肿瘤;⑵凝血系统疾病；⑶精神疾病及认知功能疾病；⑷肝肾功能疾病；⑸免疫系统疾病、结缔组织疾病；⑹甲状腺功能疾病;⑺先心病或染色体疾病。

1.2 指标检测方法 采用ELISA法检测HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的表达,患儿入院即刻采集肘部静脉血4ml，1500r/min离心15min，收集上清液，于每个聚苯乙烯板中加入上述液体0.1ml,4℃过夜孵育,加入磷酸盐缓冲液(PBS）洗涤3次,每次3min,在每个聚苯乙烯板孔中加入HMGB1、IL-2、IL-6及NSE蛋白抗体（1：800购自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30min，加入磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次,每次3min,每孔中加入TMB溶液底物0.1 ml,37℃20min,加入2M硫酸0.05ml终止反应，采用DG5033A酶标仪(南京华东电子科技公司)进行OD值检测。

1.3 MDI、PDI测定 精神运动发育指数（PDI）重点评价粗大运动的发展以及运动协调能力和手的精细动作；智力发育指数（MDI）主要对患儿的记忆、语言、简单解决问题以及对外界作出反应的能力。

1.4 统计学方法 计量数据表述采用（x±s）表示，两组间比较采用两组独立样本的t检验、多组间计量资料比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义,统计软件采用SPSS 16.0版本。

2 结果

2.1 癫痫组和对照组的血清 HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平比较 癫痫组患儿的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平显著高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）；见表 1。

表1 癫痫组和对照组的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE 水平比较（x±s）

2.2 癫痫组和对照组的MDI评分、PDI评分比较癫痫组患儿的MDI评分、PDI评分显著低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；见表2。

2.3 不同发作情况的癫痫组患儿血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平比较 癫痫1、2、3组患儿的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平显著高于癫痫4组,癫痫3组患儿各指标均显著高于癫痫1组和2组，差异均有统计学意义（P<0.05）；癫痫1组和2组患儿的各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）；见表3。

表2 癫痫组和对照组的MDI评分、PDI评分比较（x±s，分）

表3 不同发作情况的癫痫组患儿血清HMGB1、IL-2、IL-6 及 NSE 水平比较（x±s）

2.4 相关性分析 癫痫组患儿的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平与MDI评分、PDI评分均呈显著的负相关（P<0.05）；见表 4。

表4 相关性分析

3 讨论

自身免疫性的损伤、家族性精神系统的遗传性疾病,均能够增加儿童癫痫的发生风险,特别是在合并有脑组织缺氧缺血性损伤的患儿中,儿童癫痫的发生率持续上升[7]。临床上儿童癫痫的发生,能够导致患儿远期中枢系统并发症的发生,并能够增加短期内患儿的病死率[8]。临床上通过儿童的脑电图检查,虽然能够评估儿童癫痫脑组织的异常电活动情况,但儿童癫痫脑电图检查的配合程度较低,同时部分脑电图检查对于异常脑电活动的捕捉阳性率较低。脑脊液穿刺虽然能够辅助诊断或者评估儿童癫痫的病情,但脑脊液检查的创伤较大,家长及患儿的接受程度较低。而本次研究对于儿童癫痫体内的HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的分析研究,旨在为临床上儿童癫痫的病情评估提供参考。

HMGB1是趋化因子家族成员，其能够通过诱导趋化因子和补体成分的富集,从而促进相关因子对于神经纤维的损伤和变性,影响到了神经元神经电冲动传递的稳定性。基础方面的研究认为,HMG B1的表达还能够提高巨噬细胞和单核细胞的激活程度，促进相关炎症性细胞对于脑组织的损伤，从而促进癫痫的病情进展[9]；IL-2、IL-6的表达能够通过诱导MAPK或者NF-KB信号通路的激活，加剧免疫炎症性损伤,从而促进星形胶质细胞的功能障碍[10]；NSE是高度保守性的神经相关蛋白,其主要存在在神经纤维、角质细胞或者神经内分泌细胞中，在中毒、缺氧、炎症等病理性改变的过程中，NSE的表达可显著上升[11]。

本次研究对于癫痫患者中相关指标的分析研究可见,在病例组患者中，HMGB1、IL-2、IL-6 及NSE的表达浓度均明显上升,提示相关指标的异常表达均能够参与到儿童癫痫的病情进展过程。通过汇集相关文献,笔者认为这主要由于HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的下列几个方面的病理性作用有关[12-15]：⑴HMGB1的表达上升能够促进神经纤维的蛋白变性,导致神经纤维的电荷稳定性的下降;⑵IL-2、IL-6的表达不仅能够诱导炎症性损伤，同时还能够导致抗原提呈细胞的功能障碍,导致自然杀伤性T淋巴细胞的激活,促进了其对于神经元的损伤;⑶NSE主要作为癫痫患者脑组织损伤的反应性标志物而明显上升,不同病理性因素导致的神经元膜完整性的破坏，均能够促进NSE的上升。郝伟红等[6]研究者也认为，在癫痫患者中，NSE的表达浓度可平均上升40%以上,在合并有明显的脑功能障碍或者持续性放电的患者中，NSE的表达浓度可持续上升。精神运动发育指数（PDI）、智力发育指数（MDI）是评估患者脑功能状态的指标，病例组患者的相关评分均明显下降,脑功能障碍较为明显,这主要由于神经元异常放电导致脑组织正常神经电冲动传递的障碍有关。癫痫频发、癫痫持续状态及二者兼有的患儿的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平显著的高于非频发或非持续状态者，这可能与患儿的癫痫频发次数越多、持续性发作状态越明显,而此时相关神经元的病理性改变程度就越高，而导致HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的合成和释放速度加快有关。但部分研究者并不认为NSE的表达与癫痫的病情状态存在关系,这与本次研究结论存在出入,主要考虑与NSE检测方式的不同或者检测时间节点的不同有关。最后本次研究发现，HMGB1、IL-2、IL-6及 NSE 水平与 MDI评分、PDI评分均呈显著的负相关,进一步提示了相关细胞因子与癫痫患者的病情密切关系。

综上所述，在儿童癫痫患者中，HMGB1、IL-2、IL-6的表达均明显上升,同时相关指标的表达与患者的病情状态或者脑功能评分密切相关。