血清PDCD5蛋白在I-II期肺癌患者中的表达与出现转移的相关性

张岭，白天

（南阳医专第一附属医院，1.胸外科；2.检验科 河南 南阳 473000）

肺癌是全世界发病率与死亡率最高的恶性肿瘤之一[1]。I-II期肺癌为早期肺癌，以非小细胞肺癌多见，包括鳞癌、腺癌、大细胞癌。肺癌早期症状不明显，多数患者确诊时已为晚期，此时癌细胞已病变转移，因此肺癌的早期诊断尤为重要。但因缺少敏感指标,目前临床早期筛查并确诊肺癌仍较困难[2]。肺癌的形成受原癌基因与抑癌基因表达的影响,与细胞凋亡及增殖异常有关[3]。不良饮食习惯、长期吸烟等多种危险因素均可激活原癌基因,使抑癌基因失活，癌基因突变导致恶性肿瘤形成[4]。程序化细胞死亡分子5（Programmed cell death 5，PDCD5）蛋白是近年新发现的一种新抑癌基因[5]。PDCD5蛋白可参与细胞凋亡调控过程,与肺癌形成、发展及转移密切相关。且有研究显示PDCD5蛋白在肿瘤细胞凋亡过程中起正调控作用[6]。本研究通过观察PDCD5蛋白在I-II期肺癌患者血清中表达水平,分析血清PDCD5蛋白在临床评估早期肺癌中的作用及与肺癌细胞转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月-2018年3月本院收治的肺癌患者52例作为观察组。纳入标准：⑴经影像学、组织病理学检查确诊为肺癌[7]；⑵年龄30～65岁；⑶未出现转移或出现远处转移，即TNM分期为I-II期或III-IV期[8]。排除标准：⑴严重心肝肾脑部功能不全；⑵慢性阻塞性肺病等其它肺部疾病；⑶严重贫血；⑷语言及智力障碍。将观察组患者按照有无远处转移分为TNM分期为III-IV期的出现转移组25例与TNM分期为I-II期的未转移组27例。再根据远处转移部位个数分为转移0个组27例，1个组18例，≥2个组7例。另选择同期于本院体检合格者52例作为对照组。观察组年龄 31～65 岁，平均（44.72±2.85）岁，男性33例，女性19例，鳞癌21例，腺癌31例。对照组年龄 27～58 岁，平均（37.21±2.24）岁，男性 28 例，女性24例。观察组与对照组患者年龄、性别基础资料比较无明显差异（P＞0.05）。本研究获得医学伦理委员会批准，所有研究对象对本研究内容充分知晓，自愿签署知情同意书。

1.2 方法 观察组于入院第二天清晨，对照组于体检时分别抽取静脉血3ml，采用乙二胺四乙酸（Ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA） 抗凝，经TD4Y台式低速自动平衡离心机 （上海卢湘仪，型号：TD4Y）离心分离血清，转速设定 2500r/min，时间15min,并保存于-80℃冷冻待检。采用酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测两组受试者血清PDCD5蛋白水平。ELISA试剂：PDCD5试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，货号：PROTO14737），内含 PDCD5 标准品及稀释液、PDCD检测液及稀释液、显色剂、洗涤剂、终止剂、微孔板。缓冲溶液：磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline,PBS）（上海莼试，货号：CS-0779S）。具体检测方法：向PDCD5标准品中加入1mlPDCD5标准品稀释液,配制为质量浓度40ng/ml的PDCD5标准溶液。将所得PDCD5标准溶液依次稀释 4、8、16、32、64、128、256 倍。 分别取 PDCD5检测溶液 A、B10μl与其对应的稀释溶液 990μl，充分混匀后稀释为体积为8.5mlPDCD5检测溶液A、B。用黑色马克笔将微孔板编号，将PDCD5标准溶液孔编号为标1～7，设一个空白对照孔，编号为空白，样本孔按照待检标本数量从样1开始编号。使用加样枪向空白孔中加入PDCD5标准品稀释液100μl，作为空白对照。向标1～7号孔中依次用加样枪加入稀释 4～256倍的 PDCD5标准溶液100μl。样本孔中加入待测标本量也为100μl。加样完成后，将微孔板置于37℃恒温水浴箱（苏州力意达仪器科技有限公司，型号：ST-RT）内孵育1h。孵育完成后用洗涤剂洗涤三次,每次洗涤后进行拍板。向每个孔内加入显色剂后置于37℃电热恒温培养箱（青岛聚创环保设备有限公司，型号：HN）内反应15～20min。取出微孔板后每孔加50μl终止剂。采用酶标分析仪（北京普朗医疗，型号：DNM-9606）测定每孔吸光度,并计算待测标本质量浓度。所有抽血、血液分离与保存、ELISA试验操作均由本院检验科医师完成。

1.3 观察指标 ⑴观察组与对照组血清 PDCD5蛋白水平；⑵出现转移组与未转移组血清 PDCD5蛋白水平；⑶不同转移部位个数组血清PDCD5蛋白表达水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS21.0统计学软件进行数据分析,计量资料组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用配对样本t检验。P＜0.05为比较差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组受试者血清PDCD5蛋白表达水平比较 观察组患者血清PDCD5蛋白水平明显低于对照组（P＜0.05），见表 1。

2.2 观察组中出现远处转移组与未转移组血清PDCD5蛋白表达水平比较 观察组患者中出现远处转移组血清PDCD5蛋白水平低于未出现转移组（P＜0.05），见表 2。

表1 观察组与对照组受试者血清PDCD5蛋白表达水平比较

表2 观察组中出现远处转移组与未转移组血清PDCD5蛋白表达水平比较

出现转移组中 III、IV期患者血清 PDCD5蛋白表达水平分别为（0.63±0.28） ng/ml、（0.54±0.33）ng/ml。未转移组中 I、II期患者血清 PDCD5蛋白表达水平 分别为（1.10±0.16）ng/ml、（0.98±0.27）ng/ml。

2.3 不同转移部位个数组血清 PDCD5蛋白表达水平比较 观察组患者中转移0个组血清PDCD5蛋白水平明显高于转移1个组及转移≥2个组（P＜0.05）；转移1个组血清PDCD5蛋白水平高于转移2 个组（P＜0.05），见表 3。

表3 不同转移部位个数组血清PDCD5蛋白表达水平比较

3 讨论

I-II期肺癌属于早期肺癌，目前临床治疗早期肺癌主要采用化学治疗方式杀伤肿瘤细胞,降低肿瘤细胞增殖速度[9]。有研究显示，约1%早期肺癌患者通过化疗能达到痊愈,但大多数患者不能被治愈，只能通过化疗延长生命[10]。化疗是根据肺癌患者不同癌变类型选择不同化疗药物及采用不同方案进行治疗[11]。化疗能够杀伤肿瘤细胞，但同时会对正常细胞产生损害，长期化疗会出现贫血等不良症状。此外，若癌细胞转移侵犯其它组织器官，患者全身各部位均有可能出现不同临床并发症状。癌细胞增殖速度加快，但受患者身体状况影响，临床化疗速度跟不上癌细胞扩散转移速度,导致肺癌细胞转移至更远的淋巴结、胸膜、肾脏、骨髓、消化道、心脏或神经系统，整体治疗疗效降低。因此早期发现确诊癌变并及时接受治疗对患者而言尤为重要。

PDCD5是北京大学人类疾病基因研究中心发现的一种新型程序性细胞死亡相关基因[12]。PDCD5基因进化保守，编码蛋白由125个氨基酸组成，胞内定位于细胞核[13]。重组人PDCD5蛋白可结合组蛋白乙酰转移酶Tip60及p53，致DNA受损，进而促进多种肿瘤细胞凋亡[14]。PDCD5的mRNA在人体多种组织内均可表达,胚胎期表达水平低于成人,在肿瘤细胞中表达水平显著低于正常细胞[14]。北京大学人类疾病基因研究中心利用荧光标记的PDCD5蛋白进行细胞内化试验,结果表明人重组PDCD5蛋白可通过网格蛋白（Clathrin）非依赖型途径将生物大分子携带进细胞内,在体内导入治疗中起重要作用[15]。其原理是PDCD5蛋白可作为人细胞穿膜蛋白，发挥类似HIVTAT蛋白载体功能，并且有效避免TAT蛋白免疫原性干扰。该试验还发现重组PDCD5蛋白可增强肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、宫颈癌等多种肿瘤细胞对不同种类凋亡诱导剂的敏感性，表明PDCD5蛋白可增强化疗过程中药物对肿瘤细胞的杀伤作用[15]。同时，北京大学人类疾病基因研究中心体内外试验表明,很多肿瘤细胞因PDCD5蛋白表达水平低下而对化疗药物敏感性降低，在给予人体补充PDCD5蛋白后可恢复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[16]。并且PDCD5只能促进肿瘤细胞凋亡,不具有诱导肿瘤细胞凋亡作用，这意味着PDCD5在体内表达时不会出现凋亡诱导效应,表示PDCD5蛋白对正常细胞毒性较小，临床应用安全性会更高。PDCD5蛋白因其结构简单，无二硫键，无糖基，属于人源性蛋白，易于产业化及大规模生物制药的特点,已成为目前临床抗肿瘤的热点研究对象[17]。

本研究结果显示,观察组肺癌患者血清PDCD5表达水平明显低于对照组健康者,与北京大学人类疾病基因研究中心实验室的PDCD5在肿瘤细胞中低表达的结果相符。且观察组中出现远处转移的肺癌患者血清PDCD5表达水平显著低于未出现远处转移患者。表明血清PDCD5表达水平可随肺癌病情加重而降低。观察组中出现远处转移2个或2个以上部位患者血清PDCD5表达水平明显低于出现远处转移1个部位及未出现远处转移肺癌患者,表明肺癌细胞的转移扩散会影响血清PDCD5表达水平，其大小可随转移部位增加而降低。

综上所述，血清PDCD5蛋白表达水平与 I-II期肺癌患者病情及癌细胞转移 扩散程度密切相关，癌细胞扩散转移部位越多的患者血清PDCD5表达水平越低，血清PDCD5持续低表达可提示患者有癌转移风险或已经发生转移。

通过对接受肺癌筛查的患者血清PDCD5表达水平的检测，可评估患者是否癌变或癌变程度，以便及时给予针对性治疗，提高临床肺癌治疗有效率。但本研究未能对PDCD5蛋白可增强化疗过程中药物杀伤肿瘤细胞的作用进行探究，在后续研究中，还需采用PDCD5蛋白干预临床给药治疗过程，以深入探讨PDCD5对肺癌治疗的影响。