番茄中异菌脲残留分析方法的开发

刘晓云 安宝东 高少妮 杨秀丽 万莉

(山东科建检测服务有限公司，山东 日照 276800)

1 材料与设备

1.1 基质

番茄，来自日照市东港区南湖镇沈马庄村试验田的对照小区。

1.2 试剂

乙腈，Sigama aldrich公司；水，霍尼韦尔国际公司；NaCl，国药集团化学试剂有限公司。

1.3 标准品

丙酮中异菌脲，1000 ± 20 mg/L，北京坛墨质检科技有限公司。

1.4 仪器设备及型号

FA1204C 万分之一电子天平，YP5002百分之一电子天平，RZ-528G 破壁机，XW-80A 微型旋涡混合仪，KQ-500B 超声波清洗器，Agilent 1290-Ultivo超高效液相色谱-质谱联用仪。

2 检测步骤

2.1 前处理步骤

提取和净化：

取待测空白番茄样品，放入破壁机制成匀浆，称取匀浆试样5.00±0.10 g于具塞试管中，添加标准物质30 min后（样品空白不需要添加标准物质），加入50.0 ml 乙腈提取剂，超声提取15 min，加入适量氯化钠，涡旋混合30 s，静置后吸取2 ml 上清液，加入0.10 g 佛洛里硅土，涡旋混合30 s，静置后取1 ml 上清液，根据实际情况稀释，取适量稀释液过0.22 µm 有机微膜，测试。

2.2 仪器测定

（1）仪器：Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色谱-质谱联用仪；（2）色谱柱：Eclipse Plus C18，1.8µL，2.1×50 mm；（3）柱温：35.0°C；（4）进样量：2.00µl；（5）流动相预处理：超声脱气；（6）流动相A：水；（7）流动相B：乙腈；（8）梯度洗脱条件：流动相A:流动相B=90:10(0.00 min)；50:50(1.00 min)；10:90(2.00 min)；90:10(3.00 min)；90:10(5.00 min)；（9）离子源：AJS-ESI；（10）扫描方式：MRM模式；（11）鞘气温度：250°C；（12）鞘气流速：11.0 L/min；（13）MS2 Heater：65 °C；（14）MS1 Heater：65 °C；（15）喷雾：15.0 psi；（16）MRM质谱条件见表1。

表1 MRM监测条件参数

3 检测方法确证

3.1 标准曲线和线性

以对照小区的番茄为材料，按照前处理步骤，制备得到空白基质溶液。

分别以乙腈和空白基质溶液为定容介质配制一系列质量浓度为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L 的标准溶液，在确定的方法条件下对标准溶液进行测定，每个浓度采集3 个平行，以5 个浓度的标准溶液绘制1 条标准曲线。

3.2 基质效应考察

分别用纯溶剂乙腈和空白基质溶液为定容介质配制一系列质量浓度为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的标准溶液，分析时以乙腈标准溶液、空白基质标准溶液的顺序进行检测，以考察基质的影响。

基质效应(Matrix Effect)评价标准：对纯溶剂与基质配制标准曲线的斜率进行比较，若基质效应ME%的绝对值≥20%，说明基质效应明显。若基质效应ME%绝对值＜20%，说明基质效应不明显。

基质效应(ME)按照式（1）进行计算：

式中：ME为基质效应，%；

bA为以纯溶剂为定容介质配制的标准曲线斜率；

bB为以空白基质溶液为定容介质配制的标准曲线斜率；

3.3 准确度和精密度试验

设计1个溶剂空白对照组、l个样品空白对照组和3个添加水平（0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg）。每个添加水平5个重复。对空白对照组与3 个添加水平组共16 个前处理后得到的样品各采集1针（溶剂空白对照不进行前处理）。

3.4 LOQ

以最小添加浓度作为方法的LOQ，异菌脲在番茄中的LOQ为0.05 mg/kg。

3.5 专属性

所测空白样品在被试物出峰区间的信号应小于LOQ 添加水平响应的30%。

4 结果与讨论

4.1 标准曲线和线性

在本试验条件下进行测定，以标准溶液的浓度对响应值（峰面积）进行线性回归，以乙腈为定容介质配制的标准曲线：y=203887.812674*x+ 851.348676，R2=0.998，r=0.999；以 空白基质溶液为定容介质配制的标准曲线：y=202558.597908*x+ 3487.782117，R2=0.998，r=0.999。

4.2 基质效应

标准曲线由5 个校准点组成（不包括原点），浓度范围为0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L。按照乙腈标准溶液、空白基质标准溶液的顺序进行检测，以标准溶液的浓度对响应值（峰面积）进行线性回归。

结果表明异菌脲在番茄中检测基质效应不明显，基质效应ME的绝对值为0.7%。

4.3 准确度与精密度

空白番茄中三个添加水平0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg的平均回收率为84%、96%、85%，相对标准偏差为11%、6%、7%。

4.4 LOQ

以最小添加浓度作为方法的LOQ，异菌脲在番茄中的LOQ为0.05 mg/kg。

4.5 专属性

所测乙腈、空白基质样品在异菌脲出峰区间的信号均小于LOQ水平响应的30%。

4.6 检测方法有效性评价

本验证试验建立了番茄异菌脲残留分析方法，番茄样品用乙腈提取，佛洛里硅土净化，采用Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色谱-质谱联用仪测定，采用保留时间（3.120 min）及定性离子对（330.0/245.0和330.0/287.9）定性，采用标准曲线-外标法定量（定量离子对330.0/245.0）。试验结果满足《农作物中农药残留试验准则》（NY/T 788-2018）对残留检测方法的要求，适合番茄中异菌脲残留的检测。