丙酮及按压脱脂法在提高脂肪组织制片质量中的应用

岳永亮，顾 霞，朱文欣

脂肪组织因其细胞内的油脂成分不利于其脱水、透明及浸蜡,最终导致由于缺少石蜡的支撑作用使脂肪组织切片不完整，呈碎渣样，有大空洞；有些切片无法漂片，表现为入水后蜡片即炸开，无法得到组织切片。有医院通过针对脂肪组织设置特殊的脱水程序、延长固定时间或改善取材方法等[1-2]，对提高脂肪组织制片质量起良好的效果。我院病理科采用加热丙酮、按压脱脂法处理脂肪组织不仅使脂肪组织标本制片良好，而且不需要设置特殊的脱水程序，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料临床送检的乳腺、脂肪瘤、大网膜、肠旁脂肪、清扫淋巴脂肪等富含脂肪的标本，樱花Tissue VIP 6 AI全自动脱水机，Thermo HM340E轮转式切片机，丙酮、10%中性福尔马林、常规脱水试剂，DAKO染封一体机等。

1.2 方法乳腺、脂肪瘤标本按常规取材法各取100块，均随机分成2组，实验组、对照组各50块；大网膜、肠旁脂肪、清扫淋巴脂肪组织标本按常规取材法共取100块，随机分成2组，实验组、对照组各50块。实验组标本放入丙酮中，在65 ℃烤箱加热30 min后取出用纱布按压挤出油脂(图1)，然后经全自动脱水机常规脱水；对照组直接放入全自动脱水机常规脱水。脱水具体流程：10%中性福尔马林固定2 h；70%乙醇90 min；80%乙醇 60 min；90%乙醇2道，分别为50、40 min；无水乙醇2道分别为35、30 min；透明剂3道分别70、60、50 min；石蜡4道分别为50、50、40、40 min。将处理过的组织块进行石蜡包埋，运用轮转式切片机切片，切片厚度3 μm，漂片温度45 ℃，自动染色机HE染色。

1.3 统计学分析应用SPSS 22.0软件进行统计学分析，采用χ2检验各组数据，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

本组制片不合格：肉眼可见切片有空洞，展片时易破碎，镜下见脂肪组织形态不完整，有空洞或有挤压和皱缩现象(图2)。本组制片合格：蜡片完整，展片时无破碎，镜下见脂肪组织形态完整，无空洞、挤压和皱缩，脂肪细胞结构清楚，HE染色清晰(图3)。本实验结果显示：乳腺组织实验组合格率96%，对照组合格率28%(χ2=49.066，P<0.001)；脂肪瘤实验组合格率100%，对照组合格率4%(χ2=92.308，P<0.001)；大网膜、肠旁脂肪、清扫淋巴脂肪组织等实验组合格率100%，对照组合格率56%(χ2=28.205，P<0.001，表1)。

图1 脂肪组织加热丙酮浸泡后用纱布按压挤出油脂 图2 不合格切片:HE染色镜下观察有空洞、折叠、切片不完整 图3 合格切片:HE染色镜下观察切片完整、脂肪细胞结构清晰

表1 脂肪组织制片合格情况

3 讨论

本实验采用加热法使丙酮快速渗透入脂肪细胞，溶解脂肪细胞内的油脂，通过按压法使溶解于丙酮的油脂挤出细胞，从而达到快速脱脂目的。本实验结果表明脂肪组织制片完整，组织无挤压及皱缩，结构清晰。各种类型的脂肪组织切片合格率与对照组相比均大大提高，差异有统计学意义；另外本组采用方法步骤较简单易操作，且脂肪组织脱脂后与常规组织进行相同的脱水、切片、HE 染色等处理流程，保证脂肪组织能够与其它常规组织同时完成制片。

部分大网膜、腹腔盆腔清扫淋巴脂肪组织等不经过脱脂处理也能达到满意的切片效果，主要原因可能是这些组织较疏松，试剂易渗透。一方面乙醇具有一定的脱脂功能，在组织脱水的同时也进行了脱脂，有利于后续的透明及浸蜡；另一方面由于组织疏松易于石蜡的浸透，从而达到较好的浸蜡效果。部分乳腺组织不经脱脂处理也能合格制片，可能与该组织块内脂肪含量较低有关[1]，然而大部分乳腺组织及脂肪瘤不经脱脂处理则大多易出现切片空洞、破碎、漂片时散片等，不能完整制片。可能与乳腺组织及脂肪瘤组织较致密试剂不易渗透及脂肪组织的结构特点有关。脂肪细胞聚集在一起且薄层疏松结缔组织将聚集在一起的脂肪细胞分隔成许多不同的小叶，使脂肪组织中含有丰富的网状纤维[3]，这些特殊结构会造成组织块固定、脱水不良[4]，从而最终影响组织浸蜡，细胞内石蜡量不足以支撑组织形态，最终会导致组织切片空洞、破碎、不完全。

在临床工作中，除了考虑制片质量外还需考虑完成时间，制片质量差直接影响医师诊断的准确性，甚至造成误诊。制片完成慢则影响病理医师最终发出报告的时间，从而延误临床医师的诊治。本实验中采用脱脂法，不仅保证制片质量，而且保障制片完成时间，具有临床推广价值。