阿尔泰金莲花总黄酮的抗氧化活性研究

赵 美，曾 亚，周晓英

(1.新疆维吾尔自治区伊犁州中医医院，新疆 伊宁 835000；2.新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 830011；3.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

阿尔泰金莲花，采自新疆博乐温泉，粉碎过筛，备用。

DPPH自由基、Tris、盐酸、邻苯三酚、硫酸亚铁、水杨酸、过氧化氢、抗坏血酸等均为分析纯；荭草苷对照品、牡荆素对照品，宝鸡辰光生物科技有限公司。

752型紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；ME204E型电子天平，上海梅特勒-托利多仪器有限公司；KQ-5200DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 阿尔泰金莲花总黄酮粗提物的制备

称取阿尔泰金莲花粉末50 g，加入12倍量60%乙醇，回流提取2次，每次 1.5 h，过滤；合并滤液，减压浓缩(60 ℃)至无醇味；浓缩液真空干燥(60 ℃)，得阿尔泰金莲花总黄酮粗提物。

1.2.2 阿尔泰金莲花总黄酮纯化物的制备

称取阿尔泰金莲花粉末 50 g，加入12倍量60%乙醇，回流提取2次，每次1.5 h，过滤；合并滤液，减压浓缩(60 ℃)至无醇味；浓缩液经大孔树脂吸附，水洗除杂后用 30%乙醇洗脱；洗脱液减压浓缩，真空干燥(60 ℃)，得阿尔泰金莲花总黄酮纯化物。

1.2.3 阿尔泰金莲花总黄酮对 DPPH自由基的清除实验

在文献[7-9]的基础上进行改进。分别称取阿尔泰金莲花总黄酮粗提物、纯化物5 mg，用蒸馏水溶解，定容于25 mL容量瓶中，吸取适当体积，稀释，配制成0.20 mg·mL-1、0.15 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1、0.005 mg·mL-1的样品溶液。样品组：在试管中加入2 mL样品溶液及 2 mL 1.0×10-4DPPH自由基溶液，摇匀，室温下暗处静置 30 min，测定517 nm处吸光度(A1)；空白组：用同体积的蒸馏水替代样品溶液，测定517 nm处吸光度(A2)；空白对照组：用同体积的95%乙醇溶液替代DPPH自由基溶液，测定517 nm处吸光度(A3)；以VC为阳性对照。每个样品平行测定3次，按式(1)计算DPPH自由基清除率。

同法测定荭草苷和牡荆素对DPPH自由基的清除率。

(1)

(2)

1.2.5 阿尔泰金莲花总黄酮对·OH的清除实验

在文献[13-15]的基础上进行改进。分别称取阿尔泰金莲花粗提物、纯化物225 mg，用蒸馏水溶解，定容于25 mL容量瓶中，吸取适当体积，稀释，配制成 9.0 mg·mL-1、7.2 mg·mL-1、5.4 mg·mL-1、3.6 mg·mL-1、2.7 mg·mL-1、0.90 mg·mL-1、0.54 mg·mL-1的样品溶液。样品组：分别向试管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亚铁溶液、 1 mL 7.5 mmol·L-1水杨酸溶液、1 mL样品溶液、6.5 mL水和 0.5 mL 0.3%过氧化氢，摇匀，37 ℃水浴 30 min，测定510 nm处吸光度(Ax)；空白组：在试管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亚铁溶液、1 mL 7.5 mmol·L-1水杨酸溶液、7.5 mL水和 0.5 mL 0.3%过氧化氢，摇匀，37 ℃水浴 30 min，测定510 nm处吸光度(A0)；空白对照组：分别向试管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亚铁溶液、1 mL 7.5 mmol·L-1水杨酸溶液、1 mL样品溶液、7 mL水，摇匀，37 ℃水浴 30 min，测定510 nm处吸光度(Ax0)；以VC为阳性对照。每个样品平行测定3次，按式(3)计算·OH清除率。

(3)

2 结果与讨论

2.1 阿尔泰金莲花总黄酮对 DPPH自由基的清除作用(图1)

图1 阿尔泰金莲花总黄酮对DPPH自由基的清除作用

由图 1可知，在实验设计的浓度范围内，阿尔泰金莲花总黄酮的粗提物和纯化物、荭草苷、牡荆素对DPPH自由基的清除率随着浓度的增加而升高，且具有一定的量效关系。当浓度为0.005 mg·mL-1时，纯化物和荭草苷对DPPH自由基的清除率分别为28.9%和32.1%，高于VC；同样浓度下，粗提物和牡荆素对DPPH自由基的清除率分别为10.8%和6.7%，低于VC；当浓度为0.05 mg·mL-1时，粗提物、纯化物、荭草苷、牡荆素对DPPH自由基的清除率分别为69.9%、83.1%、78.8%、10.5%。由此可看出，阿尔泰金莲花总黄酮对DPPH自由基有明显的清除作用，且纯化后的总黄酮的清除作用更强。

2.2 阿尔泰金莲花总黄酮对的清除作用(图2)

图 2 阿尔泰金莲花总黄酮对的清除作用

2.3 阿尔泰金莲花总黄酮对·OH的清除作用(图3)

图3 阿尔泰金莲花总黄酮对·OH的清除作用

由图 3可知，在实验设计的浓度范围内，阿尔泰金莲花总黄酮的粗提物和纯化物对·OH的清除率随着浓度的增加而升高，且具有一定的量效关系。当浓度为 0.54 mg·mL-1时，粗提物、纯化物对·OH的清除率分别为 4.58%、8.68%。由此可看出， 在一定的浓度范围内，阿尔泰金莲花总黄酮对·OH有清除作用，且纯化后的总黄酮的清除作用更强。

3 结论