卵巢癌患者血清人附睾蛋白4、糖类抗原125及甲壳质酶蛋白-40水平与病理特征的相关性

苗雨莉,杨维霞,付 欣,石丛艳

(1.通用环球西航医院 病理科,陕西 西安,710021;2.空军军医大学西京医院 病理科,陕西 西安,710032;3.西北工业大学医院 病理科,陕西 西安,710072)

目前，卵巢癌患者多采用放疗、化疗进行治疗，以尽可能多地消灭肿瘤细胞，但晚期卵巢癌中仅有20%患者可以存活超过5年[1]。甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)[2]是一种外壳质酶家族的分泌型糖蛋白，又称软骨糖蛋白-39(HCgp-39),这种蛋白是由人骨肉瘤细胞株MG63分泌，其编码基因位于染色体1q31～1q32区域，其DNA长度为8 kb[3]。研究[4]表明，血清中YKL-40表达增高是恶性肿瘤预后不良的标志。李莉莉等[5]研究表明，YKL-40蛋白表达可能来自卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌等。研究[6]显示，子宫内膜癌中上皮性卵巢癌(EOC)患者血清YKL-40水平升高，提示其可能成为EOC新的肿瘤标志物。研究[7]提示，YKL-40的表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关。人附睾蛋白4(HE4)是附睾远端上皮细胞中克隆到HE4基因的cDNA序列，这种蛋白是抑蛋白酶家族成员之一[8]。研究[9]表明,HE4在卵巢上皮性恶性肿瘤中表达程度可以作为卵巢上皮性癌筛查、诊断、预后及疗效评估的指标。HE4在鉴别卵巢良、恶性病变中的特异度较糖类抗原125(CA125)高。所以,HE4作为肿瘤标记物用于卵巢癌的检测有很好的应用前景[10]。本研究探讨卵巢癌患者血清HE4、CA125及YKL- 40水平与其病理特征的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2010年12月—2012年1月空军军医大学西京医院确诊的上皮性卵巢癌患者血清标本80例，良性卵巢肿瘤患者血清标本40例;年龄36～91岁，平均(54.58±5.24)岁;临床分期根据2017年国际抗癌协会联盟(UICC)制定的肺癌TNM分期标准，包括Ⅰ期10例，Ⅱ期15例，Ⅲ期32例，Ⅳ期23例;病理结果包括浆液性癌60例，黏液性癌20例;病理分级按照2012年世界卫生组织(WHO)制定的分级标准，分为G1、G2级50例,G3级30例。

纳入标准:所有患者均为初诊病例，术前未接受放疗、化疗或免疫治疗，患者均无影响肿瘤标志物的合并症。排除标准:排除合并其他内分泌疾病、器官肿瘤疾病患者。另选取40例同期在空军军医大学西京医院体检中心体检的正常健康妇女作为对照组，年龄35～85岁，平均(50.21±8.21)岁。纳入标准:健康女性，无相关肿瘤疾病，未接受过放疗或激素治疗。排除有肿瘤患病史者。3组患者年龄、吸烟史等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 研究方法

YKL-40试剂盒购自上海沪震实业有限公司;HE4、CA125试剂盒购自瑞典康乃格公司。采用ELISA双抗体夹心法测量血清HE4、YKL-40水平。血清样本取自患者入院后第2天空腹时静脉全血5 mL,置于未加抗凝试剂试管中，标本采集后在室温下静置 1 h,3 000 转/min离心后去上清，置于EP管中，保存于-80 ℃冰箱内待检。按照HE4和YKL-40试剂盒操作方法将待测血清与抗体反应。采用酶标仪(购自Molecular Devices公司)在450 nm波长下测定吸光度值(OD值)，通过标准曲线计算样品中YKL-40浓度。参照文献[11],采用电化学发光免疫法测定CA125含量。

1.3 生存分析

随访方式为电话随访，随访时间2012年1月—2018年1月，卵巢癌患者随访时间为首次手术至死亡时间或随访截止时间，卵巢癌患者随访时间12～72个月，中位随访时间45.20个月，其中成功随访 65例。成功随访的 65 例卵巢癌患者制作生存曲线。将YKL-40>100.00 ng/mL判断为阳性，将CA125>35.00 U/mL判断为阳性，将HE4>150.00 pmol/L判断为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS18.0软件对数据进行处理和分析，方差分析使用ANOVA,当组间差异有统计学意义时，进一步采用SNK方法进行两两比较;对于无序分布的等级资料，采用非参数Mann-WhitneyU检验。进行ROC分析。本研究所有检验均为双侧检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组血清YKL-40、HE4、CA125含量比较

与对照组比较，良性卵巢肿瘤细胞组、上皮性卵巢肿瘤细胞组YKL-40、HE4、CA125含量显著升高(P<0.01);与良性卵巢癌细胞组比较，上皮性卵巢癌细胞组YKL-40、HE4、CA125含量显著升高(P<0.01)。见表1。

表1 3组血清YKL-40、HE4、CA125含量比较

YKL-40:甲壳质酶蛋白-40;HE4:人附睾蛋白4;糖类抗原125:CA125。

与对照组比较,**P<0.01;与良性卵巢肿瘤细胞组比较,##P<0.01。

2.2 上皮性卵巢癌患者血清YKL-40、HE4、CA125与病理特征的关系

上皮性卵巢癌患者血清YKL-40含量与病理类型(浆液性、黏液性)、淋巴结转移、病理分级密切相关(P<0.05),与临床分期无显著关联(P=0.08)。上皮性卵巢癌患者血清HE4、CA125含量与病理类型(浆液性、黏液性)、临床分期、病理分级、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 上皮性卵巢癌患者血清YKL-40、HE4、CA125与病理特征的关系

YKL-40:甲壳质酶蛋白-40;HE4:人附睾蛋白4;糖类抗原125:CA125。与同一指标另一亚项比较,*P<0.05。

2.3 生存结果分析

YKL-40以100.00 ng/mL为界限值，当YKL-40>100.00 ng/mL判断为阳性。结果显示，阳性组卵巢癌患者在第5个月开始出现死亡，阴性组患者在第10个月出现死亡;阳性组在58个月时全部死亡，阴性组则有60.00%以上存活，阴性组中位生存时间为30.50个月，说明阳性卵巢癌患者生存率显著低于阴性卵巢癌患者(P<0.05)。见图1。

CA125以35.00 U/mL为界限值，当CA125>35.00 U/mL判断为阳性。结果显示，阳性组卵巢癌患者第3个月开始出现死亡，在58个月时全部死亡;阴性组则有75.00%以上存活，中位生存时间为26.50个月，说明阳性卵巢癌患者生存率显著低于阴性卵巢癌患者(P<0.05)。见图2。

HE4以150.00 pmol/L为界限值，当HE4>150.00 pmol/L判断为阳性。结果显示，阳性组卵巢癌患者在第10个月开始出现死亡，阴性患者在第15个月出现死亡;阳性组在57个月时全部死亡，阴性组则有60.00%以上存活，阴性组中位生存时间为30.50个月，说明阳性卵巢癌患者生存率显著低于阴性卵巢癌患者(P<0.05)。见图3。

由HE4、CA125、YKL-40的ROC曲线可以看出,CA125的曲线下面积大于HE4、YKL-40的面积,HE4、CA125、YKL-40的最佳临界值分别为101.200 pmol/L、95.200 U/mL、53.600 ng/mL,Youden指数分别为0.852、0.547、0.749。见图4、表3。HE4、CA125、YKL-40单独诊断卵巢癌的灵敏度分别为91.5%、87.0%、72.0%,3者联合诊断的灵敏度为96.5%,差异有统计学意义(P<0.05);HE4、CA125、YKL-40单独诊断卵巢癌的特异度分别为92.0%、93.0%、95.0%，3者联合诊断的特异度为85.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

YKL-40又称甲壳质酶蛋白-40,其相对分子质量约为40 k[12]。刘强等[13]研究发现,YKL-40与多种细胞的增殖、分化、凋亡及血管形成、细胞外组织重塑关系密切，并且在恶性肿瘤组织中有特异性表达。刘玉嵚等[14]研究表明，卵巢癌患者血清YKL-40明显高于正常人，且YKL-40与疾病分级明显相关，血清YKL-40≥80.00μg/L者预后差。本研究发现，卵巢癌患者血清中YKL-40含量显著高于正常同龄妇女，且YKL-40与患者病理类型、病理分级、淋巴结转移显著相关，其中浆液性卵巢癌患者YKL-40含量显著高于黏液性患者，同时YKL-40的含量与淋巴结转移呈正相关。本研究还发现,YKL-40阳性组卵巢癌患者生存率显著低于阴性组卵巢癌患者，表明YKL-40与卵巢癌分化及预后有一定相关性。

表3 HE4、CA125、YKL-40的ROC曲线相关值

HE4:人附睾蛋白4;糖类抗原125:CA125;YKL-40:甲壳质酶蛋白-40。

HE4又称核心表位蛋白(WFDC2)[15]。HE4属于抑蛋白酶家族成员，这种蛋白基因最早是由 Kirchhoff 等[16]在人附睾上皮细胞中发现。崔彭华等[17]研究表明,HE4是附睾特异性、生殖相关的蛋白。研究[18]表明，正常卵巢组织中不表达HE4蛋白，卵巢癌组织中 HE4 蛋白呈高表达，与本研究结论一致。本研究发现在不同临床分期和病理分级患者血清中HE4含量存在显著差异,Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者血清HE4含量显著高于Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者,G3级患者血清HE4含量显著高于G1、G2级,HE4阳性组卵巢癌患者生存率显著低于HE4阴性卵巢癌患者。

CA125是1981年由Bast等[19]从上皮性卵巢癌抗原检测出可被单克隆抗体结合的一种糖蛋白，这种蛋白来源于胚胎发育期体腔上皮。朱攀等[20]研究表明，上皮性卵巢肿瘤(浆液性肿瘤)患者的血清中CA125含量显著高于正常和良性肿瘤患者血清CA125含量，与本研究结论一致。研究[21]表明，约80%晚期卵巢癌患者血清CA125显著升高，而早期卵巢癌患者中仅有50%～60%患者血清CA125升高。本研究结果表明,CA125与患者病理类型、病理分级显著相关，其中浆液性卵巢癌患者CA125含量显著高于黏液性患者,G3级患者CA125含量显著高于G1、G2级患者。本研究还发现,CA125阳性组卵巢癌患者生存率显著低于阴性组卵巢癌患者，表明CA125与卵巢癌分化及预后有一定相关性。

综上所述，卵巢癌患者血清HE4、CA125及YKL-40含量与其病理特征相关,HE4、CA125和YKL-40含量可以作为评价卵巢癌患者预后的相关标志物。