两种不同免疫组化染色平台TDT及CD10染色效果评价

张 娅，李传应，陈晶晶，王晓秋

近年全自动免疫组化染色平台的应用在免疫组化染色的标准化控制中起重要作用[1]，但不同免疫组化染色平台染色效果存在一定的差异，为了提高免疫组化制片的质量，确保抗原的检测率[2]，不同抗体应选择染色效果最佳平台。目前，关于不同抗体在不同免疫组化染色平台染色效果评价报道较少。本实验将TDT、CD10两种抗体在两种不同免疫组化染色平台中的染色效果总结如下。

1 材料与方法

1.1 标本选取2018～2019年安徽省立医院病理科存档的肿瘤标本40例，其中病理诊断TDT阳性的胸腺瘤、淋巴母细胞淋巴瘤标本各10例；病理诊断CD10阳性的滤泡性淋巴瘤、子宫内膜间质肉瘤各10例。

1.2 仪器与试剂Roche Ventana XT/Ultra；Leica Bond；LEICARM2235型石蜡切片机；Olympus显微镜；TDT抗体、CD10抗体均购自北京中杉金桥公司；Leica封闭式二抗系统；Roche封闭式二抗系统。

1.3 方法肿瘤蜡块连续2.5～3 μm厚切片2张，分别用贴置Roche、Leica标签的防脱载玻片捞片，80 ℃烘烤30 min，罗氏标签的玻片牛奶浸泡10 min，分别行上机全自动处理。Roche Ventana和Leica Bond全自动免疫组化染色平台均使用相同厂家和同一批次的一抗，分别使用各自封闭的二抗系统。两种染色平台使用各自标准化SOP操作流程。染色结果在显微镜下观察对比。

2 结果

2.1 TDT在不同免疫组化染色平台中的染色效果两种不同免疫组化染色平台显示胸腺瘤、淋巴母细胞淋巴瘤中TDT阳性定位于细胞核。Leica Bond染色平台示阳性细胞核染色成棕黄色，染色强度适中，背景清晰，阳性率明显较高(图1A、B)。Roche Ventana染色平台示部分细胞核阳性不明显，呈浅黄色，阳性细胞和阴性细胞的对比不明显，细胞多呈浅蓝色，部分细胞呈深灰蓝色，阳性率明显较低(图1C、D)。

2.2 CD10在两种不同免疫组化染色平台中的染色效果两种不同免疫组化染色平台显示滤泡性淋巴瘤、子宫内膜间质肉瘤中CD10阳性定位于细胞膜或细胞质，Leica Bond染色平台示阳性细胞膜或细胞质染色呈棕黄色，染色强度适中，背景清晰，细胞阳性率明显较高(图2A、B)。Roche Ventana染色平台示部分细胞膜或细胞质阳性不明显，呈浅黄色，阳性细胞和阴性细胞的对比不明显，阳性率明显较低(图2C、D)。

3 讨论

全自动免疫组化染色平台在免疫组化技术中应用广泛，染色结果可靠，操作简单，制片省时、省力，背景清晰，染色效果更佳[3]。前期我们实验室一直使用Roche Ventana染色平台，大部分抗体染色效果满意，少部分抗体染色结果有时引起争议。其中TDT、CD10染色效果有时会出现弱阳性或假阴性，未达到理想效果。本实验室发现TDT、CD10指标在Leica Bond染色平台效果优于Roche Ventana。

TDT作为DNA聚合酶的一种，免疫组化染色阳性定位于细胞核。在胸腺瘤的诊断中具有辅助作用，是胸腺瘤分型的参考指标，A、AB、B1、B2型胸腺瘤TDT均阳性[4-5]。TDT也是淋巴母细胞瘤最特异和敏感的标志物，T、B淋巴母细胞均可表达，阳性率高达95%[6]。CD10是滤泡性淋巴瘤经常表达的抗原标志，在子宫内膜间质细胞及其肿瘤阳性，以鉴别灶性弱阳性的子宫平滑肌瘤[7]，还在Burkitt淋巴瘤、部分弥漫大B细胞淋巴瘤、前驱B淋巴母细胞性淋巴瘤、白血病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤等中表达[8]。决定免疫组化染色效果的重要因素是抗原修复，肿瘤标本经10%中性福尔马林固定和石蜡包埋后，大量蛋白相互交联，抗原修复可以打开交联的蛋白，暴露抗原[9]。合适的修复液是影响抗原修复效果的重要因素，Leica Bond使用碱性修复液pH 9.0，而Roche Ventana抗原修复液pH 8.0～8.5，有文献报道，对于大部分抗原高pH值修复液的修复效果优于低pH值[9]。决定免疫组化染色效果的另一重要因素是一抗的染色，两种免疫组化染色平台的技术原理不同，Leica Bond采用Covertiles技术，试剂侧面微量泵抽吸，直接滴加在组织表面，试剂消耗少，抗体抗原结合充分。Roche Ventana采用油盖膜技术，轮盘旋转，击锤式将一抗滴加在覆盖组织的缓冲液上层油膜，空气涡流混匀试剂，一抗受到稀释，增加了消耗量。

图1 A.Leica Bond染色平台胸腺瘤中TDT的表达，EnVision法；B.Leica Bond染色平台淋巴母细胞淋巴瘤中TDT的表达，EnVision法；C.Roche Ventana染色平台胸腺瘤中TDT的表达，EnVision法；D.Roche Ventana染色平台淋巴母细胞淋巴瘤中TDT的表达，EnVision法

图2 A.Leica Bond染色平台滤泡性淋巴瘤中CD10的表达，EnVision法；B.Leica Bond染色平台子宫内膜间质肉瘤中CD10的表达，EnVision法；C.Roche Ventana染色平台滤泡性淋巴瘤中CD10的表达，EnVision法；D.Roche Ventana染色平台子宫内膜间质肉瘤中CD10的表达，EnVision法

综上所述，不同的免疫组化染色平台采用的技术原理及配套的封闭试剂不同，其染色效果也存在一定差异，为了提高制片质量，推进标准化实验平台建设，在实际操作过程中需反复摸索，针对不同的抗体选用合适的染色平台。