高效液相色谱法测定小儿启脾颗粒的含量

夏鸿林，胡 翔，陈亚飞，张前珍

(1.长江职业学院，湖北 武汉 430074；2.上海必奕医药科技有限公司，上海 201318；3.上海玉安药业有限公司，上海 201415)

众所周知，小儿启脾颗粒是基于小儿启脾片[1]的处方制备而得，本品主要功效为和胃、健脾和止泻。用于脾胃虚弱，食欲不振，消化不良，腹胀便溏。颗粒剂同片剂相比具有很多优势，可省去制粒以后压片与包衣，既简化了工艺步骤，又可降低成本，并使质量易于控制。此外，本品为颗粒剂，更方便小儿服用。另一方面，颗粒剂分剂量准确，且质量较稳定。实验小组在原片剂的基础上对本品进行了颗粒剂的研制，并对质量标准进行了相应的研究，方便本品的质量控制。小儿启脾片已在市场销售多年，质量稳定。因此，改剂型后含量测定方法参照小儿启脾片的标准而定，检测样品中人参皂苷Rg1的含量。

一、仪器与试药

(一)仪器

LC-10ATVP高效液相色谱仪；C18(Inertsil 4.6×150mm，5μm)色谱柱；N-2000色谱工作站。

(二)试药

人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-201128)购自中中国食品药品检定研究院；小儿启脾颗粒(自制，批号：20140701,20140702,20140703)。乙腈、甲醇为色谱纯试剂;水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

二、方法与结果

(一)色谱条件

色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)；流速：1.0ml·min-1；检测波长：203nm；进样量：20μl。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于2500，且人参皂苷Rg1与相邻峰的分离度大于2.0。

(二)溶液的制备

1．对照品溶液的制备。取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含53μg的溶液。

2．供试品溶液的制备。取本品1.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤容器及滤渣，合并洗液和滤液，蒸干，残渣加水25ml使溶解，用乙醚洗涤3次，每次10ml，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3．阴性样品溶液的制备。取除人参外的其余处方量药材，按样品的制备工艺方法制备缺人参的阴性样品，然后按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

(三)系统适应性试验

精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10μl，按上述色谱条件下进样，测定，记录色谱图，见图1。结果表明，该色谱条件下，人参皂苷Rg1峰与其他峰分离良好，峰形对称，且阴性样品无干扰，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于2500，且人参皂苷Rg1峰与相邻峰的分离度大于2.0。表明本方法具有良好的专属性。HPLC图谱见图1。

(四)线性关系考察

精密称取人参皂苷Rg1对照品10.12mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含101.2μg的溶液，作为对照品贮备液；精密量取贮备液1、2、4、6、8ml,分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液20μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积。将浓度C和相应的峰面积A进行回归处理，人参皂苷Rg1的回归方程为：A=1.522×105C-2.7×103(r=0.9998)，线性范围为0.2024～1.6192μg·ml-1。

图1 小儿启脾颗粒的高效液相色谱图(A.对照品；B.样品；C.缺人参阴性对照样品；1：人参皂苷Rg1)

(五)精密度试验与重复性试验

取对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，以峰面积考察精密度，峰面积的RSD为0.72%。取同一批号样品(批号20140701)，按“二.(二).2”项下的处理方法平行处理6份，依上述色谱条件依法进行测定，并计算含量，结果样品中人参皂苷Rg1含量的RSD为1.09%。

(六)稳定性试验和回收率试验

取供试品，按照“二.(二).2”项下方法处理，依上述色谱条件分别在0,2,4，6，8h依次进行测定，结果峰面积的RSD为0.40%。精密称取已知含量为0.270mg/袋(批号为20140701，每袋平均装量2.038g)的样品约1.2g共6份，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液(50.6μg·ml-1)3.0ml，按照“二.(二).2”项下方法处理，依上述色谱条件测定其中的人参皂苷Rg1的含量,并分别计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

(七)样品测定

取本品3批样品，按“二.(二).2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法计算样品中人参皂苷Rg1的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

三、结论

经对人参皂苷Rg1对照品溶液进行紫外扫描，发现人参皂苷Rg1在近紫外区有最大吸收，参考《中国药典》人参的含量测定方法和有关文献报道[2-5]，选用203nm为检测波长。

本试验参照《中国药典》人参的含量测定方法和有关文献报道[3-5]，在方法研究过程中，流动相比较了乙腈-1%磷酸溶液(20:80)、乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)及乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值为2.7)(20:80),结果显示，采用乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)为流动相,系统分离效果较好，故选择本系统为流动相。

三批自制产品的含量测定结果表明：本方法简便、快速和结果准确，毋容置疑，本含量测定可以用于产品的质量控制。