血浆CRABP2与非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的相关性研究

蒙建凤

【摘  要】目的：探究血浆CRABP2与非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的相关性研究。方法：本研究首先将siRNA以及CRABP2质粒进行构建以及转染，随机将培养皿分组，共计180个，分为三组，每组各60个。分析血浆CRABP2在非小细胞肺癌细胞中的表达。结果：血浆CRABP2高水平表达可加速癌细胞的生长，血浆CRABP2与癌细胞的增殖、迁移和侵袭相关性强。结论：血浆CRABP2水平很可能是非小细胞肺癌细胞侵袭性的指标，可作为非小细胞肺癌新的诊断和预后标志物。

【关键词】细胞视黄酸结合蛋白2;非小细胞肺癌;增殖;迁移;侵袭

【中图分类号】R45      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）03-0092-01

肺癌是全世界与癌症相关的死亡最常见的原因。只有18%的肺癌患者在确诊后存活5年或更长时间。早期诊断对降低肺癌死亡率具有重要意义。近年来，低剂量计算机断层扫描（LDCT）被引入肺癌的早期诊断。然而，除了LDCT外，我们还可以使用各种方法检测肺癌，而使用血样是最简便的方法之一。有研究报道显示，肺癌组织中一种新的遗传标记物细胞维甲酸结合蛋白2（CRABP2）的鉴定可有效诊断非小细胞肺癌。本研究探究血浆CRABP2与非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的相关性研究，具体如下：

1 一般资料和方法

1.1 一般资料

研究所需的非小细胞肺癌细胞株A549细胞购买于上海研域生物科技有限公司，并将该细胞株作解冻、扩增，观测其生长状况，随后再进行细胞株培养、冻存、复苏。

1.2 方法

（1）本研究首先将siRNA以及CRABP2质粒进行构建以及转染，随机将培养皿分组，共计180个，分为三组，每组各60个。分别命名为A、B、C三组，A组是CRABP2质粒组;B组是-CRABP2 siRNA转染组，剩余的C组是空质粒转染组。

（2）准备DMEM培养基，将非小细胞肺癌细胞株放置于培养基内培养。

（3）随后，需检测细胞增殖能力，采取的方法是MTT法;检测CRABP2基因表达情况，采取的方法是RT-PCR法;检测CRABP2/MMP9蛋白表达情况采取Western blot法。

（4）分别采用Transwell细胞侵袭实验法、细胞划痕法分析CRABP2转染前后对非小细胞肺癌细胞A549侵袭、迁移的影响。

1.3 统计学方法

采用统计学标准软件SPSS 22.0系统对本研究数据作统计学分析。计量资料（均数±方差）采取T值检验（独立样本）;计数资料（%）应用卡方检验。P<0.05，表示数据存有统计学意义。

2 结果

分析显示在非小细胞肺癌中CRABP2的表达显著上调，且高表达CRABP2 的 95-D 细胞存在更强的增殖抑制反應。表明CRABP2基因在非小细胞肺癌中的表达增加;而在siRNA 干扰 95-D 细胞中，CRABP2 在ATRA中的表达明显降低。

3 讨论

CRABP2是一种与维甲酸相关的细胞内脂质结合蛋白，被认为可以调节细胞内的维甲酸信号。已鉴定出两个亚型（CRABP1和CRABP2），它们都对配体全反式维甲酸具有高亲和力。这些亚型在人类中显示出74%的序列同源性，在物种中高度保守。CRABP1在成人中广泛表达，而CRABP2只在皮肤、子宫、卵巢和脉络丛中表达。CRABP蛋白的生物学功能还不完全清楚。在小鼠基因敲除研究中，CRABP亚型的破坏与肢体发育的轻度缺陷有关。CRAPP1被发现作为一种被动载体，根据浓度梯度结合并释放其配体，而CRAPP2已知将维甲酸传递给维甲酸受体（RAR），并且维甲酸在CRAPP2和RAR之间的通道导致了全RAR形成和RAR转录的显著上调。CRABP2在MCF-7乳腺癌细胞中的高表达与维甲酸诱导的生长抑制的敏感性显著增强有关。相反，乳腺癌细胞株CRABP2表达的缺失与对维甲酸诱导的生长停滞的抵抗有关。因此，CRABP2的表达似乎在视网膜酸致敏细胞中起作用。CRABP2蛋白的抗癌作用在其他肿瘤，包括星形细胞瘤和头颈部肿瘤等等^[1～2]。

有关研究发现，癌组织中的细胞视黄酸结合蛋白2（CRABP2）信使RNA（mRNA）水平明显高于癌旁正常肺组织，癌细胞中CRABP2的表达可被免疫组化检测到，而正常肺细胞中无表达。CRABP2已被证明有助于维甲酸与其同源受体复合物的结合，但其在癌变中的作用尚不清楚。迄今为止，对非小细胞肺癌中CRABP2的研究很少。本研究结果显示，血浆CRABP2高水平表达可加速癌细胞的生长，血浆CRABP2与癌细胞的增殖、迁移和侵袭相关性强，与最新的一份报告^[3]结果相似：48例肺癌标本中56%的CRABP2 mRNA水平与邻近正常组织相比升高，56%的肿瘤标本中也检测到CRABP2蛋白表达。此外，NSCLC癌组织中RNA-Seq的表达较正常肺组织增加了4.9倍，72.1%的NSCLC组织中CRABP2的表达。

综上所述，血浆CRABP2水平很可能是非小细胞肺癌细胞侵袭性的指标，可作为非小细胞肺癌新的诊断和预后标志物。

参考文献

[1] Lin Jia-Zhou，Ma Song-Kun，Wu Sheng-Xi，et al. A network meta-analysis of nonsmall-cell lung cancer patients with an activating EGFR mutation： Should osimertinib be the first-line treatment？[J] Medicine，2018，97（30）：211-225.

[2] A network meta-analysis of nonsmall-cell lung cancer patients with an activating EGFR mutation： Should osimertinib be the first-line treatment？： Erratum[J]. Medicine，2019，98（32）：357-362.

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