献血者血液检测中运用核酸检测技术的价值

刘桃花

（山西省朔州市中心血站检验科，山西 朔州）

0 引言

近些年来，随着社会的进步和发展，无偿献血宣传力的增大，献血者不断增加，为了提高临床输血安全，预防和控制因输血导致疾病的传播，提高血站和医院血液标本质量，降低输血中传播病毒的风险，因此在献血者血液检测中运用核酸检测技术是十分重要的。核酸检测技术[1]（NAT）作为血液传播疾病检测的新方法，具有特异性高，受标本影响小，灵敏度高，易实现自动化等优点， 2014 年成都市血液中心在四川省率先实现血液核酸检测全覆盖，2015 年国家卫计委下发《关于做好血站核酸检测的通知》，极大程度上缩短血液中各类病毒检测的窗口期，对防控艾滋病等经血液传播的疾病具有重大意义，在各个医疗机构中应用均取得良好效果。

本次研究随机选择本血站2016 年9 月至2019 年9 月合格献血者血液标本300 例作为实验对象，应用转录介导扩增检测技术（TMA），对所选的血液标本进行核酸检测，观察NTA 阳性检出率，分项确证NAT 检测阳性标本，探究核酸检测技术（NAT）在血液检测中运用的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择本血站2016 年9 月至2019 年9 月合格献血者血液标本300 例作为实验对象，男性168 例，女性132 例，年龄20-58 岁，平均（31.4±6.8）岁。所选血液标本均通过乙肝表面抗原（HBsAg）、抗人类免疫缺陷病毒（HIV）以及抗丙肝病毒（HCV）等检查合格[2]。采血完成后，每位献血者选取4 份血液标本 ，分别进行保持核酸留样标本、酶联免疫[3]（ELISA）及血型检测、核酸检测、对谷氨酸氨基转移酶（ALT）检测 ，所有检测均在2 小时内完成离心，放置在2-8℃冰箱中冷藏保存，离心核算留样标本后放在-20℃下保存。

1.2 实验仪器与试剂

仪器：全自动核酸提取工作台（华益美公司STRA），全自动酶联免疫分析系统（FAME42），扩增仪（ABI7500），全自动加样仪（Hamilton Microlab），低速离心机（KUBOTA8420），PROCLEIX TIGRIS 核酸检测系统（美国诺华）。

试剂：ELISA 检测试剂（HBsAg、抗-HIV、抗-HCV），NAT 试剂（华益美公司），核酸定性筛査试剂，核酸定量检测试剂：HIVRNA-1，-2，HCV-RNA 和HBV-DNA。

1.3 方法

按照ELISA 试剂盒说明书的要求和规范进行操作，对HBsAg、抗HIV、抗HCV 进行检测，检测合格的血液标本采用TMA 检测技术，对ATM 进行检测。进入NAT 检测，将标本放在样品架上，每8份血液标本均选取150μL 共1.2mL 血浆到一级混样池中，选择全自动混样仪加样对HIV-RNA、HCV-RNA 及HBV-DNA 实施检测，在服务器系统中自动对结果进行判读。判定为NAT 阳性，再进行HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DNA 的鉴别试验。分析并记录血液标本的核酸检测技术检测结果。

1.4 统计学方法

将所得数据采用SPSS 22.0 统计软件处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，计数资料以百分比表示，两组间计量资料比较采用t 检验，计数资料采用χ2检验，结果以P＜0.05 表示差异有显著性。

2 结果

所选的300 例血液标本中，13 例为阳性，阳性检出率为4.3%； HIV-RNA 阳性、HCV-RNA 阳性、 HBV-DNA 阳性分别为0、0、8。分项确证相关数据见表1。

表1 NAT 检测阳性标本分项确证试验结果（份，%）

3 讨论

WHO2006 年调查124 个国家中有56 个国家未对所有血液标本进行检测，目前，世界上尚有20%的人用血未经检测，60%的血液经过检测但并不安全，20%才用上完全安全的血液[4]，WHO 提出四大战略保障输血安全：建立国家协调的采供血网络和质量体系；从低危献血者中采集血液；严格筛选检测血液和合理用血；减少不必要的输血。加强用血前免疫相容性检查，加强血液制品的病毒灭活，防止免疫性输血反应，我国是肝炎大国[5]，HBsAg 阳性率为7.18%，现存艾滋病病毒感染者约70 万，艾滋病感染者中血液传播最高为48%，而约4.2%是由于输血或者使用血制品传播的，因此在献血者血液检测中运用核酸检测技术是十分重要的。

目前，血清学检测中所使用的试剂盒灵敏度差异性大，HBsAg和HIV 变异株、HCV 不寻常亚型导致漏检。核酸检测可以筛选出处于血清窗口期的献血者，极大程度上缩短血液中各类病毒检测的窗口期[6]，HCV-RNA、HIV-RNA、HBV-DNA 检测时间分别缩短约72%、41%、50%，避免试剂假阴性，鉴别无抗体反应的慢性病毒携带者，NAT 检测方法基于病毒核酸检测比血清方法具有更高的灵敏度和特异性，能够从检测技术水平降低输血后病毒的传染风险，ELISA 与NAT 技术上在生理病理过程互补，ELISA 亚型或变异往往与NAT 亚型或变异不交叉，方法学不同影响因素不同，基本不交叉，核酸检测是一项技术含量较高的技术，对血液安全的保障非常重要，任何一种检测手段都不能完全消除血液病毒感染，因此重视采供血的整个环节，保障临床用血安全，避免输血所导致的疾病传播问题。