mHLA-G联合PCT、 hs-CRP在肾移植排斥反应及感染中的诊断价值分析①

申 升 朱春丽 李 琴 周结学 蒙善东 马 娟 邓庚国 王 晓 刘 东

(广东省第二人民医院器官移植科，广州 510317)

肾移植后急性排斥反应(acute rejection,AR)是由患者受体识别供者抗体而引起的，目前，常用的实验室检查指标，如血清肌酐(serum creatinine,Scr)、T淋巴细胞亚群检测、尿常规检测等在AR发生后的数小时、甚至是数日后才能检测到，且特异性较差[1-3]。感染是造成肾移植患者死亡的最常见原因，高达31%患者在肾移植后的第1年内会发生感染[4,5]。常用检测感染的方法有，影像检查、病原体检测、活检等，但这些方法检查较慢、缺乏特异性、对患者身体具有创伤性，无法满足临床的需求[6,7]。人类白细胞抗原(human leukocyte antigen-G,HLA-G)是一类免疫耐受分子， 属于主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子，健康人体内表达水平较低，当机体发生疾病，如感染、移植排斥时其表达水平升高。HLA-G能够识别淋巴细胞等表达的免疫球蛋白样受体，进而对T细胞增殖，B细胞增殖以及抗体分泌等起抑制作用。但是，HLA-G与移植后的排斥反应与感染反应的关系尚具有较多争议。

膜型人类白细胞抗原(membrane-bound human leukocyte antigen-G,mHLA-G)是HLA-G的一类，与T细胞、B细胞等免疫细胞中表达，与人体感染、排斥反应发生等具有密切关系[3,5]。血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)是机体内的炎性因子，可以反映患者的炎症状态[8,9]。本研究对使用mHLA-G联合PCT、 hs-CRP对肾移植排斥反应与感染进行分析，发现这些指标具有重要价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 以我院2015年1月～2018年10月126例肾移植患者为研究对象，其中肾功能稳定组42例，术后发生急性排斥反应(acute rejection,AR)组40例，术后发生感染组44例，另选同期健康体检者50例作为正常对照组。纳入标准：肾移植组均为终末期肾病行肾移植手术治疗，经病理检查后确定疾病类型；其中，稳定组，术后未发生AR，未发生感染；术后血肌酐以阶梯形式下降，且在正常值范围内波动；群体反应抗体(panel reactive antibody,PRA)检测呈阴性；AR组：病理检测肾穿刺标本确诊为AR；满足AR的临床诊断条件，经抗排斥反应治疗后疗效较好；感染组，患者体液经培养后，显示有细菌特征且满足影像诊断标准；患者伴有尿路刺激征、发热等典型的感染症状；经抗感染治疗后效果良好。正常组：入群人员均为健康成人，具有良好沟通能力。排除标准：诊断不明者；不能配合研究者；合并感染患者。肾移植者均采用环孢素A(CsA)或他克莫司(Tac)免疫治疗方案。4组年龄、性别及免疫治疗方案无明显差异(P>0.05)，具有可比性。见表1。

1.2方法 检测4组外周血mHLA-G、血清PCT、 hs-CRP水平。

外周血mHLA-G采用流式细胞术法：将患者肘部静脉血液2～3 ml采集入抗凝管内(EDTA)，取100 μl加入抗人mHLA-G抗体(购自德国美天旎)10 μl；在室温条件下避光孵育15 min后，将1 ml FACS溶血素加入，避光孵育13 min后，以300 g离心5 min，将上清液弃去；加入PBS清洗，以300 g离心5 min，将上清液弃去；加入200 μl PBS混匀后，在4℃条件下避光孵育1 h后，开始上机检测。

血清PCT、hs-CRP水平：均采集肘部静脉血液5 ml 左右，置于常规血管内离心后，取血清，PCT水平采用免疫定量法测定，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，hs-CRP水平采用速率散射比浊法测定。

2 结果

2.1肾移植后4周各组免疫细胞mHLA-G表达水平对比 肾移植后4周，AR组mHLA-G表达水平最低，与稳定组、感染组、对照组相比差异均明显(P<0.05)；感染组mHLA-G表达水平最高，明显高于对照组、稳定组、AR组(P<0.05)；稳定组mHLA-G表达水平略低于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 4组一般资料对比

Tab.1 Comparison of general data of 4 groups

GroupsnAge(year)GenderMaleFemaleMedication planCsATacAR group4038.6±9.428121129Infection group4438.1±9.231131529Stable group4237.9±9.030121428Control group5038.2±9.33614--F/χ20.2140.0540.493P0.7420.9970.781

表2 肾移植后4周各组免疫细胞mHLA-G表达水平对比

Tab.2 Comparison of mHLA-G expression levels of immune cells in each group at 4 weeks after kidney transplantation

GroupsnmHLA-GT cells (CD3+)B cells(CD19+)AR group400.41±0.331)2)3)0.87±0.451)2)3)Infection group441.33±0.672)3)4)2.02±0.892)3)4)Stable group420.89±0.382)4)1.59±0.622)4)Control group500.92±0.411)4)1.63±0.711)4)

Note：Compared with infection group,1)P<0.05;compared with stable group,2)P<0.05;compared with control group,3)P<0.05;compared with AR group,4)P<0.05.

表3 肾移植后4周血清PCT、 hs-CRP水平对比

Tab.3 Comparison of serum PCT and hs-CRP levels in 4 weeks after kidney transplantation

GroupsnPCT(ng/ml)hs-CRP(mg/L)AR group401.02±0.641)2)3)72.34±50.041)2)3)Infection group4425.13±3.722)3)4)89.24±65.472)3)4)Stable group420.57±0.272)4)15.26±11.182)4)Control group500.51±0.231)4)14.72±11.361)4)

Note：Compared with infection group,1)P<0.05;compared with stable group,2)P<0.05;compared with control group,3)P<0.05;compared with AR group,4)P<0.05.

表4 外周血mHLA-G、血清PCT、 hs-CRP水平在肾移植AR中ROC曲线分析对比

Tab.4 Analysis and comparison of ROC curve of mHLA-G,PCT and hs-CRP in peripheral blood in renal transplantation AR

IndexAUCSXP95%CImHLA-G0.9020.0370.0120.885-0.993PCT0.3860.0740.0150.372-0.706Hs-CRP0.4720.0710.0270.421-0.726

2.2肾移植后4周血清PCT、 hs-CRP水平对比 肾移植后4周，AR组血清PCT水平明显高于稳定组与对照组(P<0.05)，但稳定组与对照组间无明显差异(P>0.05)；感染组血清PCT水平明显高于AR组、稳定组、对照组(P<0.05)。肾移植后4周，AR组与感染组血清hs-CRP均明显高于稳定组与对照组(P<0.05)，且AR组与感染组无明显差异(P>0.05)。见表3。

2.3各指标在肾移植AR及感染中ROC分析对比

表5 外周血mHLA-G、血清PCT、 hs-CRP水平在肾移植感染中ROC曲线分析对比

Tab.5 ROC curve analysis and comparison of mHLA-G,PCT and hs-CRP levels in peripheral blood in renal transplantation infection

IndexAUCSXP95%CImHLA-G0.8430.0340.0140.814-0.928PCT0.9420.0250.0070.892-0.953Hs-CRP0.4780.0690.0230.418-0.735

表6 外周血mHLA-G、血清PCT、 hs-CRP水平在肾移植AR中诊断价值对比

Tab.6 Comparison of diagnostic value of mHLA-G,PCT and hs-CRP in peripheral blood in renal transpl-antation AR

IndexSensitivitySpecificityPositive predi-ctive valueNegative predi-ctive valuemHLA-G0.8720.8430.8510.823PCT0.4020.4230.3970.412hs-CRP0.5030.5170.4780.502mHLA-G+PCT+ hs-CRP0.9250.9180.9160.909

表7 外周血mHLA-G、血清PCT、 hs-CRP水平在肾移植感染中诊断价值对比

Tab.7 Comparison of diagnostic value of mHLA-G,PCT and hs-CRP in peripheral blood in renal transplantation infection

IndexSensitivitySpecificityPositive predi-ctive valueNegative predi-ctive valuemHLA-G0.8410.8270.8210.815PCT0.9080.6140.8850.596Hs-CRP0.9120.4260.9010.412mHLA-G+PCT+ hs-CRP0.9430.9160.9370.912

ROC曲线分析显示，mHLA-G在肾移植AR中的AUC值最大，PCT最小；PCT在肾移植感染中的AUC值最大，Hs-CRP最小。分别见表4、5。

2.4各指标在肾移植AR及感染中诊断价值对比 mHLA-G+PCT+ hs-CRP联合检测在肾移植AR及感染中敏感度与特异性均明显高于单指标检测，见表6、7。

3 讨论

肾移植是治疗终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)的最佳选择，但是患者术后容易发生免疫排斥反应。因术后患者需要使用免疫抑制剂、患者身体状况较差等原因，患者很容易并发感染[10-12]。AR的临床症状及实验室指标等与感染之间相互作用，彼此影响，二者容易混淆，延误病情[13,14]。鉴别肾移植后AR与感染对患者进行早期治疗，调整患者免疫抑制剂使用量等，对患者是否能够手术成功具有重要作用的mHLA-G属于重要的免疫耐受分子，在肿瘤免疫、移植免疫等过程中均发挥重要作用，可在T细胞、B细胞及NK细胞等免疫细胞中表达[15,16]。PCT是由血清降钙素的前体物质转变而来，稳定性好，通常在健康人群体内，水平极低，当机体发生感染时，可在2～4 h内迅速增长。而当机体发生免疫排斥反应时，血清PCT水平可以轻度增高，但却明显低于感染患者[17,18]。hs-CRP由干细胞合成的非特异性的炎症因子，在患者血清、脑脊液等多种液体中可检测到，当机体受到创伤、发生感染等时患者体内表达水平可急剧升高。另外，hs-CRP作为急性时相反应蛋白，与器官移植后所发生的免疫排斥反应具有密切联系[19,20]。

本研究对我院肾移植后AR与感染患者及肾功能稳定患者、健康人群、mHLA-G联合PCT、 hs-CRP进行了检测，结果显示肾移植AR患者与感染患者mHLA-G水平差异明显，且与肾功能稳定患者、健康患者差异明显，提示该指标在肾移植AR与感染中具有辅助诊断价值，可能与mHLA-G属于重要的免疫耐受分子，在移植排斥免疫反应、感染免疫反应中具有重要作用。肾移植AR、感染患者血清PCT、hs-CRP水平与肾功能稳定组患者及正常人群差异明显，提示该指标在肾移植AR与感染中也具有辅助诊断价值，分析原因可能与二者均为血清炎症因子，同时机体发生免疫排斥的同时，也会有一定的炎症反应，促使PCT、hs-CRP水平在肾移植AR与肾移植感染患者中均升高。进一步对mHLA-G联合PCT、 hs-CRP进行ROC分析，显示三者联合对肾移植AR及感染的鉴别价值明显好于单一指标，分析原因显示，mHLA-G属于重要的免疫耐受分子，当机体发生移植后AR水平明显升高，而在肾移植后感染中，升高并不是很明显；当机体发生免疫排斥反应时，血清PCT水平可以轻度增高，但却明显低于感染患者，而hs-CRP作为急性时相的反应蛋白，与器官移植后所发生的免疫排斥反应具有密切的联系，三者联合检测互补了对肾移植后AR及感染诊断的一些不足。有文献报道mHLA-G在肾移植AR患者中具有较高的诊断价值[3,5]，也有文献报道PCT、hs-CRP水平在各类感染患者中具有较高价值[1,6]，但鲜有文献三者联合起来共同对肾移植AR及肾移植感染进行诊断。另外，本研究由于时间、人力资源及技术等的限制，难免会存在一定的不足，研究小组将会对相关方面内容进行深入探讨。

综上所述，mHLA-G联合PCT、 hs-CRP在肾移植AR及感染中具有重要诊断价值，可作为临床诊断肾移植后AR与感染的辅助指标，为临床诊断、治疗效果及预后评估等提供可靠依据。